脾虚证动物模型的实验研究进展

专家笔谈脾虚证动物模型的实验研究进展

金敬善

北京市中医研究所,北京　100010

〔作者简介〕　金敬善,浙江省临海市人。研究员、硕士生导师。1962年

毕业于南京大学生物系生化专业,并分配到北京市中医研究所生化室从事

中西医结合和中医基础理论研究。对脾虚证的实质进行了长期而深入的研

究,取得省、部级成果奖15项,发表论文100余篇。现任北京市中医研究所

生化室主任,北京市中西医结合学会理事,基础理论专业委员会副主任委

员,北京市生化学会医用生化专业委员会副主任委员,全国中西医结合学会

基础理论专业委员会委员,消化疾病专业委员会委员等职。1988年北京市

人民政府授予有突出贡献的专家,享受国务院政府特殊津贴。

关键词　脾虚证;　动物,实验;　模型

从事脾虚证动物模型的实验研究已有20多年,从最早的大黄致慢性腹泻模型,到最近常用的病证结合模型,虽然思路不同,方法各异,但有一点应该肯定,各种模型在脾虚证实质研究的不同时期都起到了一定的推动作用。本文简要介绍各类脾虚证动物模型造模方法,以供同道们参考。

1　根据中医理论复制动物模型

111　泻下法制脾虚证动物模型

用泻下法致脾虚是脾虚证模型最常用的造型方法,其中,绝大多数为苦寒泻下法。苦寒泻下法中最常用药物为大黄、芒硝、番泻叶、大承气汤、蓖麻油、玄明粉等。大黄脾虚模型是我国最早的脾虚模型之一,应用时间长,比较普及,并积累了较多的实验研究资料。

常用造模动物有昆明种小鼠、W istar大鼠、叙利亚种金黄地鼠、兔、驴等。大黄、芒硝等中药以水煎剂灌服,用药量16～52g (kg.d),造模时间一般为5～40d。造模后的动物常表现便溏、脱肛、肛门红肿、纳呆、腹胀、消瘦、四肢不收、毛枯槁、畏寒、活动频度下降、耐寒力降低、游泳时间减少、萎靡、倦卧、体重降低。有称应用玄明粉者体重升高,体温降低,或有死亡。此外,双耳发光强度下降,百会穴、双耳、双腋下、双天枢穴、双足三里穴体表温度下降,经穴体表电阻值下降,耳部发光强度失衡,这些变化与脾虚状态密切相关。

112　饮食失常法制脾虚证动物模型

这类脾虚证动物模型包括限量饮食脾虚模型、饮食失节脾虚模型、劳倦过度加饮食失节脾虚模型、劳倦过度加饥饱失常脾虚模型、饥饱失常脾虚模型、耗气破气加饥饱失常脾虚模型等多种。常用造模动物有昆明种小鼠、W istar大鼠、SD纯系大鼠、兔、驴等。以破气苦降加饮食失节所致大白鼠脾虚证模型为例,W istar大鼠80只,随机分4组,即对照组、造模组、四君子汤复健组和自然恢复组。厚朴、枳实、大黄按3∶3∶2比例与散米混合,布包冷水浸泡30 m in,煮沸10m in,制成质量分数为100%煎剂,隔天灌胃于模型组动物,4m l (d・只),上下午各1次,喂药当日禁食,次日给足量食;对照组灌以同量蒸馏水,正常饮食,造模期42d。复健方法:炙黄芪、党参、茯苓、炒白术、炙甘草按2∶2∶2∶2∶1比例煎煮,灌胃法同上,隔天灌胃于四君子汤组动物,自然恢复组灌以同样量的蒸馏水,二组均以正常饮食,复健期21d。结果模型动物造模8d出现体瘦;18d出现竖毛、毛枯不泽、懒动、耳色淡;30d见拱背、清便粘尾、反应迟钝、尾灰白,与对照组在外观上有明显差异,类似临床脾虚患者脾失健运,精微不生,不能充养皮毛四肢等所致的便溏、疲倦懒言、乏神嗜睡、消瘦、毛发不荣、舌淡、面白等现象。造模动物便溏出现较晚,

与单味大黄泻下致虚模型不同。用四君子汤复健需8d,而自然恢复组则需15d,其他症状体征恢复二组无显著性差异。此类脾虚动物模型多数出现较晚,继大黄致脾虚模型之后,应用较广泛。

113　证病结合脾虚证动物模型

包括脾虚溃疡型结肠炎动物模型、脾阳虚型腹水型肝癌模型、脾阳虚型实体型肝癌模型、脾阳虚型S180肉瘤模型、脾阳虚型肝损伤模型、脾气虚型创伤愈合模型、脾气虚型胃溃疡模型、脾阳虚型胃溃疡模型、气虚型慢性萎缩性胃炎模型等多种。造模方法:先用耗气破气加饥饱失常或大黄煎剂灌胃法造成脾虚模型,再用病的造模方法。例如通过埋殖同种异体结肠抗原和注射异种结肠抗原两种方法制作大鼠脾虚溃疡型结肠炎模型;通过免疫损伤加饮用胆酸法(慢性萎缩性胃炎)和醋酸注射法(胃溃疡)制作大鼠脾虚型胃病模型;通过接种腹水型肝癌细胞(HA C)于腹外侧皮下接种6×106(或316×104、112×105、316×105)个细胞制作小鼠脾阳虚型腹水型肝癌模型;通过腋下皮下接种一块约2mm3的裸鼠原发性人体肝癌癌组织制造小鼠脾阳虚型实体型肝癌模型;通过接种S180瘤种制作小鼠脾阳虚型S180肉瘤模型;按115g kg剂量皮下注射体积分数为50%的四氯化碳花生油液制作大鼠脾阳虚型肝损伤模型;通过背部皮肤切去2c m×2c m皮块,深至深筋膜,形成创伤,术后观察21d,制作脾气虚型创伤愈合模型等。这类模型的特点是既有脾虚证的各种表现,又有病的体征,目前应用越来越广泛。陈小野教授认为有三方面意义:①使中医临床对疾病的辨证施治有相应的动物实验条件,特别是使中医辨证施治新药药理实验有相应证、病结合模型可采用;②克服中医动物模型研究虚化倾向,特别是避免中医动物模型难以实用的缺陷;③通过证病结合研究以求对疾病研究、证候研究取得进展。

证、病结合动物模型脾虚证的特点表现为便溏、乏力、体重明显减轻、消瘦、舌淡嫩苔少、胃粘膜颜色淡、小肠功能紊乱及实质损害、营养物质吸收障碍及供给减少而致机体物质和能量代谢障碍,胃壁等机体组织修复、分化功能障碍,胃体粘膜上皮DNA含量减少等。

证、病结合动物模型还有病的特征。例如脾虚型溃疡动物模型病的特征为溃疡修复上皮中酸性粘液明显增多,中性粘液减少,反映其分化障碍,上皮及肉芽组织生长不良,舌象呈舌根型化,可能也与营养不良有关,营养不良还会导致胃壁组织细胞防御能力下降,易损性增高。脾阳虚型腹水型肝癌模型病的特征为免疫功能低下,表现在无论是否去除粘附细胞,脾淋巴细胞转化率对ConA反应明显低下。健脾理气合剂(党参、白术、茯苓、八月札)能减慢脾虚鼠移殖性肿瘤生长,肿瘤出现的潜伏期延长,小鼠一般情况良好,食欲增加、活动正常、恶液质出现晚等。脾阳虚型实体型肝癌模型病的特征为脾虚型肝癌肿瘤的S期细胞比例最高,增殖指数明显增高,血清甲胎蛋白浓度显著增高,经健脾理气合剂治疗后,以上三项指标均降低。脾阳虚型S180肉瘤模型病的特征为大黄造型后有典型的脾虚症状出现,例如溏泄、脱肛、纳差、消瘦、体重减轻、毛疏枯槁、移植性肿瘤生长快等,经健脾及滋阴药物治疗后对免疫功能有保护作用。脾阳虚型肝损伤模型病的特征为肝小叶结构紊乱、瘀血,炎细胞浸润;肝细胞明显肿大、浊肿、脂肪变、空泡变、坏死及肝糖原减少等;超微结构见肝细胞核中常染色质减少,线粒体基质密度下降,糖元颗粒大量减少;肝SDH活性、G262P活性明显降低;肝细胞核酸、蛋白质合成能力下降,细胞免疫功能低下等。经和肝助脾饮治疗后,肝脏SDH、G262P 活性增高,肝细胞内核酸、蛋白质、糖元和能量合成增加,提高了肝细胞膜系统的稳定性,增强了其抗损伤能力,体重显著恢复。益气健脾方能改善肝组织病变,提高细胞免疫功能。脾气虚型创伤愈合模型病的特征为动物在施行创伤手术时易于麻醉,创伤时出血较多,创伤愈合较迟,愈合程度较差,全血维生素C值明显降低,肉芽组织羟脯氨酸含量降低,术后2周创伤组织超微结构见成纤维细胞呈功能不活跃状态。经加味四君子汤治疗后,体重增加,便清、毛枯不泽、粘尾等症状消失,伤口收缩较快,收缩幅度较大,创口愈合较早,且愈合较好;全血维生素C值显著增高,肉芽组织羟脯氨酸含量显著增高;超微结构见成纤维细胞功能较活跃。

2　借用西药制作脾虚证动物模型

这类模型有利血平脾虚模型、新斯的明脾虚模型、环磷酰胺动物模型和胆汁氢氧化钠动物模型等。对用西药制作中医“证”的模型,学术界也有不同看法,张启元等对制作中医“证”的动物模型提出8点意见:①模型设计要以中医理论为指导;②要从中医临床症状出发,使动物模型呈现出类似临床的症状;

③由于中医注重整体,因此在制作模型时要保持机体完整,最好不经手术;④动物应在正常环境中生