抗生素抗性基因插入失活法

抗生素抗性基因插入失活法：载体的抗药性基因内具有限制酶的识别位点，用某种限制酶消化并再此位点插入外源DNA时，抗药性基因不再被表达，当这个重组载体转化宿主菌并在药物选择平板上培养时，根据对该药物由抗性转为敏感，便可筛选出重组转化子。

β-半乳糖苷酶基因插入失活法：质粒载体上LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶N端与受体细菌编码的C端片段实现а互补而具有酶活性，可在IPTG诱导下分解生色底物X-gal并形成蓝色菌落，但当外源片段插入质粒的多克隆位点后，使β-半乳糖苷酶的N端失活从而破坏а互补，因此带有重组质粒的细菌将产生白色菌落，从而可依据菌落的颜色筛选出可能带有重组质粒的转化子菌落。转化：是指把带有目的基因的重组质粒DNA引入受体细胞的过程。转染：是指将重组噬菌体DNA直接引入受体细胞的过程。

转导：是指将重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的噬菌体颗粒，再以此噬菌体为载体，将头部重组DNA导入受体细胞中。

化学转化法：对受体细胞经过氯化钙、氯化铷等化学试剂的处理，使细胞膜的通透性发生暂时性的改变从而使受体细胞进入感受态，再经过热击、冷冻等处理即可将外源DNA摄入。电穿孔转化法：是指利用脉冲电场将DNA导入受体细胞的方法。

基因定点诱变：是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等

SD序列：Shine-Dalgarno序列，即核糖体结合位点，是指原核基因转录起始位点下游的一段DNA序列，它与核糖体16S rRNA特异配对而与宿主核糖体结合，对mRNA的翻译起决定性作用。

Southern印迹法的原理：将经限制酶酶切及琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段用碱变性处理后，转移到固相杂交膜上，再用同位素标记探针溶液与膜充分混合接触进行分子杂交。把未杂交的探针洗脱后经过放射自显影，根据乳胶片上有无黑色区带可判断DNA中是否含有目的片段。

放射性探针：是指一段带有放射性同位素标记的、与目的DNA或RNA片段的序列互补的单链核苷酸，将它与一个DNA片段进行杂交可检测该片段中是否含有目的序列。

定向克隆：是指对外源DNA及载体均用两种不同的限制酶消化，再将二者用DNA连接酶连接起来的方法，该法可以避免载体的自身环化。