动物六胺银染色方法

ICS65.020.30
B44
中国实验动物学会团体标准
T/CALAS x-201x 实验动物六胺银染色方法
Laboratory animal-Methenamine silver stain method
（征求意见稿）
201x-xx-xx发布201x-xx-xx实施中国实验动物学会发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由中国实验动物学会归口。

本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。

本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。

本标准主要起草单位：浙江大学动物科学学院、浙江省医学科学院。

本标准主要起草人：吴旧生、刘月环。

实验动物六胺银染色方法
1范围
本标准规定了实验动物组织切片六铵银染色方法。

本标准适用于实验动物组织中细菌、真菌和肾小球基膜等多糖成分的病理检测。

2基本原理
利用氧化剂氧化细菌和真菌内的细胞壁内的粘多糖等成分而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。

同理，肾小球基膜内含有一些多糖成分，易于被氧化露出醛基而被染色。

3主要试剂
3.11%过碘酸溶液，4℃可保存一个月。

3.2六氨银工作液。

5%硝酸银水溶液 2.5ml
5%四硼酸钠水溶液 2.5ml
3%乌铬托品水溶液12.5ml
蒸馏水12.5ml
先将蒸馏水与乌铬托品水溶液混合在一起，再加入硝酸银水溶液，此时将呈现乳白色，搅拌后即可消失，加入四硼酸钠水溶液后，即可使用。

3.30.1%氯化金溶液。

3.45%硫代硫酸钠溶液。

3.50.5%亮绿溶液。

4实验步骤
4.1切片经二甲苯5min*2、无水乙醇5min*2、95％乙醇5min*2、85％乙醇5min、70％乙醇5min完成脱蜡。

脱蜡后自来水洗5min。

4.2加入1%过碘酸水溶液中作用10min。

自来水洗，然后蒸馏水洗二次，每次3min。

4.3六氨银液预热至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸馏水洗二次，每次3min。

4.4用0.1%氯化金调色处理5min，蒸馏水洗二次，每次3min。

4.5用5%硫代硫酸钠处理5min,蒸馏水洗二次，每次3min。

4.6用0.5%亮绿复染细胞质。

4.7切片再经70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各1min；经95％乙醇1min，换液重复一次；无水乙醇2min，换液重复一次快速脱水，后用二甲苯透明5min，换液重复一次。

4.8根据盖玻片规格和载玻片上组织多少，滴加适量中性树胶，封片。

5操作要求
5.1氧化切片很重要。

氧化液种类和浓度、作用时间影响阳性结果的数量。

5.2使用的容器应保持清洁，才能保证结果的稳定性。

6结果判定
细菌、真菌的粘多糖成分被染成深黑色，肾小球基膜也被染成深黑色，背景为淡绿色或无色。

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