疫苗生产技术简介(课堂PPT)
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• 培养病毒的细胞：细胞若有潜在的致癌性病毒或慢病毒， 以及有支原体污染均不能用作疫苗生产。对此因素应严 格检查。此外若细胞本身发生转化后，不宜于制备活疫 苗，只能制备一些灭活疫苗或亚单位疫苗。
• 培养液：培养细胞的营养液中多少含有一定量的血清蛋 白，在疫苗使用中常会出现某种程度的过敏反应，为此， 应尽量使细胞适应于无血清蛋白的培养基中，以消除过
• 痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和疱疹病毒 等一类生物制品，目前仍然利用禽胚特别是鸡胚 制备，如鸡新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟热鸡胚 弱毒疫苗等。 • 禽胚疫苗生产的原材料来源方便、质量比较 容易控制，制造程序简单，不需要过高的设备条 件，生产的疫苗质量可靠。
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5
•（一）鸡胚选择
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流程图
.
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•
——
流
•受精卵
•毒 株
程 图
•接
•培育 •鉴定
•禽 胚
种
•种 子 •扩增 •种 毒
•收获
病 毒
•含病毒尿囊液或禽胚组织
性
禽 胚
•含病毒悬液
疫 苗
•原 料
•灭活
•纯化病毒悬液
•灭活病毒液
制
•配制
•原 料 配 制
造 •保护剂 工
•配 苗
•配苗、乳化
冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通 常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生 产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、 毒价测定和其他项目的检定等。
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（三）接毒与收获
•1.接毒
• 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。
• 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚
• 甲醛灭活剂的使用：甲醛能使病毒灭活，但仍保持其抗 原性，因此普遍用来制备灭活病毒疫苗，但要控制含量。
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Thank you !
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20
受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用 抗生素药物的非免疫鸡群，以免受母源 抗体的干扰和残留抗生素的影响。
从受精卵入孵开始至培养全过程都 应保持无菌，要求一定的温度和湿度， 且需不断翻动，然后选择。选择一定日 龄、发育正常的胚用于接毒培养。
.
6
（二）种毒与毒种继代
目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自 然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的 种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保 存，保存的种毒多为冻干毒。
•佐 剂
艺 流
•分装、冻干
•分 装
程
•检验
•检验
•活疫苗
•灭活疫苗
.
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.
18
影响疫苗质量的因素
• 毒种：毒种的优劣不仅影响疫苗的产量，而且也影响疫 苗的质量，毒种不纯会产生相互干扰，减毒活疫苗毒种 若毒力回升易造成事故，因此毒种的选择应挑选那些致 病性低，免疫效价高而持久，抗原谱广的，易增殖，便 于生产，可在传代细胞上传代的毒种。
.
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•（四）配 苗
• 按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进 行配苗。 • 1.湿苗 • 通常于鸡胚液内，按每毫升加入青霉素和链霉素500~1000U，放置 0~10C 冷暗处处理后分装。 • 2.冻干苗 • 经无菌检验后合格的胚液或胚液、胎儿、绒毛尿囊膜乳剂，按比例 加入保护剂，充分混合后滤过，于滤液内按每毫升加入青、链霉素 500~1000U，混合后分装冻干。 • 3.灭活苗 • 收获鸡胚液经无菌检验及毒价测定合格后，按规定比例加入平衡液， 按不同病毒的灭活温度、时间进行灭活，加入相应的佐剂，制备成灭活疫 苗，放置4-10C保存。
•病毒疫苗制造
.
1
疫苗？
• 疫苗是指为了预防、控制传染病的发 生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预 防性生物制品。
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2
疫苗的制吸附造柱添加500ul的BL
•一、细菌性灭活疫苗的制 造
•二、细菌性活疫苗的制造
•三、病毒疫苗的制造
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3
•病毒疫苗的制造
病毒性禽胚培养疫苗制造 病毒性细胞培养疫苗制造 病毒性动物组织疫苗制造
•
尿囊腔接种
9~11日龄胚
•
羊膜腔接种
10~12日龄胚
•
卵黄囊接种
5~8日龄胚
• 如鸡新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接种10-3稀释毒种
0.1ml，后者接种10-4稀释毒种0.1ml。鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗采用绒毛尿囊
膜接种50-100倍稀释毒0.2ml。
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•2.培养收获
• 鸡胚接毒后培养增殖的时间和温度、湿度以及收获的标 准与内容物依不同的病毒和不同的疫苗而异。 • 如鸡新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39C、相对湿度 60%~70%条件培养增殖，收集接毒后24~48h内死亡胚， 置0~10C冷却4~24h，收获胚液，进行无菌检验，供制备湿 苗用。 •
• 培养液：培养细胞的营养液中多少含有一定量的血清蛋 白，在疫苗使用中常会出现某种程度的过敏反应，为此， 应尽量使细胞适应于无血清蛋白的培养基中，以消除过
• 痘病毒、正粘病毒、副粘病毒和疱疹病毒 等一类生物制品，目前仍然利用禽胚特别是鸡胚 制备，如鸡新城疫苗、禽流感疫苗、犬瘟热鸡胚 弱毒疫苗等。 • 禽胚疫苗生产的原材料来源方便、质量比较 容易控制，制造程序简单，不需要过高的设备条 件，生产的疫苗质量可靠。
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•（一）鸡胚选择
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流程图
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•受精卵
•毒 株
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•接
•培育 •鉴定
•禽 胚
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•种 子 •扩增 •种 毒
•收获
病 毒
•含病毒尿囊液或禽胚组织
性
禽 胚
•含病毒悬液
疫 苗
•原 料
•灭活
•纯化病毒悬液
•灭活病毒液
制
•配制
•原 料 配 制
造 •保护剂 工
•配 苗
•配苗、乳化
冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通 常继代3代以上，经检定符合标准后方可作力生 产疫苗的毒种，毒种检定内容包括无菌检验、 毒价测定和其他项目的检定等。
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（三）接毒与收获
•1.接毒
• 鸡胚接毒涉及接毒途径和接毒量两方面。根据不同的病毒与不同疫
苗生产程序，选择最佳接种途径和接种量。
• 接种途径：绒毛尿囊膜接种 11~12日龄胚
• 甲醛灭活剂的使用：甲醛能使病毒灭活，但仍保持其抗 原性，因此普遍用来制备灭活病毒疫苗，但要控制含量。
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受精卵应来自SPF鸡群，至少源于未用 抗生素药物的非免疫鸡群，以免受母源 抗体的干扰和残留抗生素的影响。
从受精卵入孵开始至培养全过程都 应保持无菌，要求一定的温度和湿度， 且需不断翻动，然后选择。选择一定日 龄、发育正常的胚用于接毒培养。
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（二）种毒与毒种继代
目前适应于鸡胚的种毒多系弱毒，包括自 然弱毒与人工培育的弱毒两类。各种制苗用的 种毒多数由国家菌毒种保藏部门或指定单位保 存，保存的种毒多为冻干毒。
•佐 剂
艺 流
•分装、冻干
•分 装
程
•检验
•检验
•活疫苗
•灭活疫苗
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影响疫苗质量的因素
• 毒种：毒种的优劣不仅影响疫苗的产量，而且也影响疫 苗的质量，毒种不纯会产生相互干扰，减毒活疫苗毒种 若毒力回升易造成事故，因此毒种的选择应挑选那些致 病性低，免疫效价高而持久，抗原谱广的，易增殖，便 于生产，可在传代细胞上传代的毒种。
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•（四）配 苗
• 按规定收获的胚液、胎儿和绒毛尿囊膜乳剂经无菌检验合格后即可进 行配苗。 • 1.湿苗 • 通常于鸡胚液内，按每毫升加入青霉素和链霉素500~1000U，放置 0~10C 冷暗处处理后分装。 • 2.冻干苗 • 经无菌检验后合格的胚液或胚液、胎儿、绒毛尿囊膜乳剂，按比例 加入保护剂，充分混合后滤过，于滤液内按每毫升加入青、链霉素 500~1000U，混合后分装冻干。 • 3.灭活苗 • 收获鸡胚液经无菌检验及毒价测定合格后，按规定比例加入平衡液， 按不同病毒的灭活温度、时间进行灭活，加入相应的佐剂，制备成灭活疫 苗，放置4-10C保存。
•病毒疫苗制造
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疫苗？
• 疫苗是指为了预防、控制传染病的发 生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预 防性生物制品。
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疫苗的制吸附造柱添加500ul的BL
•一、细菌性灭活疫苗的制 造
•二、细菌性活疫苗的制造
•三、病毒疫苗的制造
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•病毒疫苗的制造
病毒性禽胚培养疫苗制造 病毒性细胞培养疫苗制造 病毒性动物组织疫苗制造
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尿囊腔接种
9~11日龄胚
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羊膜腔接种
10~12日龄胚
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卵黄囊接种
5~8日龄胚
• 如鸡新城疫I系和II系毒采取尿囊腔接毒，前者接种10-3稀释毒种
0.1ml，后者接种10-4稀释毒种0.1ml。鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗采用绒毛尿囊
膜接种50-100倍稀释毒0.2ml。
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•2.培养收获
• 鸡胚接毒后培养增殖的时间和温度、湿度以及收获的标 准与内容物依不同的病毒和不同的疫苗而异。 • 如鸡新城疫I系疫苗，接毒后于38.5~39C、相对湿度 60%~70%条件培养增殖，收集接毒后24~48h内死亡胚， 置0~10C冷却4~24h，收获胚液，进行无菌检验，供制备湿 苗用。 •