大鼠MCAO模型的制作上课讲义

实验方法（4）
双线结扎颈外动脉和枕下动 脉后剪断血管，在颈外动脉 残端上用单线打一个松结
动脉夹夹闭颈总动脉近心端 以及颈内动脉，颈外动脉残 端上45度剪一小口，向颈内 方向插入栓线，扎紧固定线， 松开动脉夹
实验方法（5）
用眼科镊向为内上方轻推栓线，从血管分叉处开始算距离，当插 入深度到达鱼线的标记处时，扎紧固定线
若鱼线堵在在1cm处，是误进翼颚动脉，若在1.6cm堵住，则是 卡在了入颅处。此时都应回抽鱼线调整方向再进线，反复试几次 还不行最好换根栓线，很可能前端已经变形
如果是再灌注模型，则在缺血一定时间后拔出鱼线，结扎死颈外 动脉残端就能恢复颈总到颈内的动脉血供
实验方法（6）
待大鼠苏醒后，观察症状，模型成 功可见大鼠向对侧绕圈或追尾、倾 倒
神经功能缺失体征评分 参考Longa 5 分制法，缺血24h 后进行评分。
0 分:无神经损伤症状; 1 分:不能完全伸展对侧前爪; 2 分:向对侧转圈; 3 分:向对侧倾倒; 4 分:不能自发行走,意识丧失。 分值越高,说明动物行为障碍越严
重
实验方法（7）-取脑
脱颈椎处死大鼠，剪开皮肤暴 露头及颈段，从颈椎处剪断颈 髓，
大鼠MCAO模型的制作
实验前准备工作（1）
手术器械+取脑器械：清洗干净，简单消毒 其他：干棉球，酒精棉球，大鼠板，固定线，
自制拉钩，培养皿 麻醉药：NS配制的10%水合氯醛，用法为
0.35ml/100gIP，手术过程中可用1/4～1/3倍 液追麻 TTC染液：NS配制的1%红四氮唑溶液，现配 现用，2℃～4℃避光保存
实验前准备工作（2）
栓线选择：准备直径0.205mm、 0.235mm、0.26mm三种粗细的 鱼线，实验中根据大鼠体重以及 大鼠个体差异调整
栓线处理：取一段5cm长的鱼线， 在一端以及2cm、2.2cm处分别用 记号笔作一个标记，垂直在熔化 的石蜡中迅速浸入并提起，立即 凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附 在鱼线一端的表面
切片置1%TTC染液中，60℃烘箱中染色10min 用image pro-plus 6.0 软件计算梗塞面积
讨论
优点 不开颅、效果肯定、
可准确控制缺血及 再灌注时间 对全身影响小、动 物存活时间长，适 于慢性脑损伤的研 究
百度文库
缺点
非直视下的手术
动物品系、体重、 批次会影响结果。
操作者手术熟练度 要求较高
去除肌肉和颅骨上的膜，剪刀 伸进去0.8cm～1cm，沿正中 以及两侧45 度分别剪一刀，用 大号弯头止血钳去除颅骨
眼科镊拉断硬脑膜，取出脑组 织
实验方法（8）-染色
脑组织用NS冲洗净表面的毛和血迹，-20 ℃速冻10min后切片5～6片：第一刀在脑 前极与视交叉连线中点处；第二刀在视 交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四 刀在漏斗柄与后叶尾极之间。
注意保温 动作轻柔熟练 麻醉药用量宁少勿多 控制进线深度 线拴法有一定的死亡率，淘汰率也比较高，做
好预试 模型不成功的大鼠要记录和总结
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实验方法（1）
动物麻醉后仰卧位固 定在鼠板上，剪毛后 用75%乙醇简单消毒， 颈正中线开口
实验方法（2）
沿正中钝性分离两侧鼓泡腺体，暴露颈前肌群 沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，暴露颈总动
脉及分支 这两步均用弯头止血钳进行钝性分离
实验方法（3）
首先分离颈总动脉并穿 单线备用
沿颈总动脉向远心端依 次分离出颈外动脉、甲 状腺上动脉、枕下动脉 以及颈内动脉，在颈外 动脉及枕下动脉穿双线 备用