第七组.大肠杆菌耐盐性测定

第七组（自主设计实验）大肠杆菌耐盐性测定
一实验目的
1.了解不同钠离子浓度对大肠杆菌的生长影响。

2.巩固无菌操作技术。

二实验原理
根据微生物对氧的需求，可把微生物分为需氧微生物和厌氧微生物量大类。

在半固体深层培养基管中，穿刺接种上述对氧需求不同的细菌，适温培养后，各类细菌在半固体深层培养基中的生长情况各有不同。

大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。

将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期，对数期，稳定期和衰亡期四个阶段。

以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲
线。

不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。

测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。

本实验采用比浊法测定，由于在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条
件下的生长曲线，此法快捷、简便。

三实验器材
1.菌种︰大肠杆菌；
2.培养基︰牛肉膏蛋白胨液体培养基；
3.其他︰培养皿、移液管、水浴恒温培养箱、试管、接种环、无菌水、分光光度计、不同浓度的钠离子等。

四实验步骤
1.取培养18~24小时的大肠杆菌一支，加入4.5ml的无菌水，用接种环将菌苔轻轻刮下，震荡，制成均匀的菌悬液。

2.取6只试管，标注好离子浓度和离子成分，分别加入一定量的牛肉膏蛋白胨液体培养基。

3.向试管中加入0.2ml的菌种悬液。

4.配制不同浓度的钠离子并加入相对应的试管中。

5. 将平板倒置于37摄氏度的温箱中，定时抽出预定试管于冰箱中、、一定时间后进行吸光值测定。

比浊测定：用未接种的液体培养基作空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。

从早取出的培养液开始依次测定，对细胞密度大的培养液用液体培养基适当稀释后测定，使其OD600在0.1~0.65之内(测定OD值前，将待测定的培养液振荡，使细胞均匀分布) 。

五实验结果
2.制作不同浓度下对大肠杆菌生长曲线图
六实验讨论
1.实验过程中钠离子浓度升高对大肠杆菌生长有什么影响。

2.影响大肠杆菌地因素还有哪些。

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