大颗粒T淋巴细胞白血病的免疫基因诊断和西罗莫司治疗

ＴＣＲ—ＲＥ：ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ；ＴＣＲ ＢＶ：ＴＣＲ ＢＶ ２４ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｅｆｆｅｃｔ ｆｏｒ ＬＧＬＬ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｃａｎｎｏｔ ｔｏｌｅｒａｔｅ ｃｏｍｍｏｎ ｄｒｕｇｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ
ｇｒａｎｕｌａｒ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ；ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ＪＥｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１２；２０（１）：２６—３２
Ａｅｒｏｓｐａｃｅ Ｇｅｎｅｒａｌ
＋Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ Ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＵ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｇｒａｎｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ，ａｎｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓｉｓ ２５６
抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ公司产品）标记细胞ＴＣＲ ＢＶ分布，
ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＬＧＬＬ）是一组少见的血液系统
分析相应细胞表型及ＴＣＲ
ＴＣＲ基因谱型的检测
ＢＶ
２４家族单克隆性。
肿瘤，ＷＨＯ于２００８年将其划人成熟Ｔ／ＮＫ细胞肿
瘤中…，近年其发病率逐渐升高，已成为危害中老
年患者的重要疾病之一。ＬＧＬＬ患者往往白细胞增
按照常规方法心’３１提取骨髓单个核细胞ＲＮＡ，合成
ｃＤＮＡ。用本实验室常规ＴＣＲ ＢＶ２４家族特异性引
高并不显著，仅仅以外周血淋巴细胞绝对值高为主 要表现，早期可以不出现贫血，临床症状轻微。 ＬＧＬＬ的诊断主要依靠典型的细胞形态学，即骨髓 和外周血出现比例占优势的大颗粒淋巴细胞。但在
临床工作中，一些病例细胞形态学表现并不典型，仅
ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（６ ｍｇ ｆｉｒｓｔ ｄｏｓｅ，２ ｍｇ
曰ｙ
ｏｎｃｅ
ａ
ｄａｙ）ｆｏｒ ａｂｏｕｔ
２４ ｇｅｎｅ
ｆａｍｉｌｙ ｂｙ
ｌａｒｇｅ
ＦＣＭ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ
ｔｏ
ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＬＧＬＬ．Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ｉｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ ｗｉｔｈｏｕｔ ｓｅｒｉｏｕｓ ｓｉｄｅ
ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ ｗｈｉｌｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｌｗａｙｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ａｎｅｍｉａ．Ｉｎ ２ ｏｕｔ ｏｆ ４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｆｒｏｍ
ｏｕｒ
ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ ｌａｒｇｅ
ｇｒａｎｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ（ＬＧＬ）ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ
１北京大学第一医院血液科，北京１０００３４；２北京航天总医院血液肿瘤研究所，北京１０００７６
摘要 本研究报告４例大颗粒淋巴细胞白血病（ＬＧＬＬ）的免疫基因诊断及ｍＴＯＲ阻断剂西罗莫司治疗的效果，
并结合国内外报道的有较完整资料的２５６例患者进行分析。ＬＧＬＬ均以外周血淋巴细胞绝对值高、粒细胞减少或 （和）贫血为主要表现。除常规外周血检查和骨髓细胞形态分类外，本院患者采用了流式细胞术（ＦＣＭ）分析Ｔ细 胞受体Ｂ链Ｖ区（ＴＣＲ
ａｎａｌｙｚｓｅ ｔｈｅ ｃｌｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ａｂｎｏｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ
ｗａｓ ｆｉｒｓｔ ｇｉｖｅｎ ｔｏ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｄｉｄ ｎｏｔ ｇａｉｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｆｒｏｍ ｃｏｍｍｏｎ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ ｈａｐｐｅｎｅｄ ｉｎ ａｌｌ ＬＧＬＬ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．ｂｕｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｗｅｓｔ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ ａｌｗａｙｓ
ｃａｓｅｓ
（ＬＧＬＬ）ａｎｄ
ｏｆ ＬＧＬＬ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ａｔ ｈｏｍｅ ＣＤ８，ａｓ ｗｅｌｌ
ａｎｄ
ａｂｒｏａｄ ｗｉｔｈｉｎ
２０００—２０１０．Ｂｅｓｉｄｅｓ ｔｈｅ ｒｏｕｔｉｎｅ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ
者共２０３例次。
结
果
本院病例与文献报道病例的临床特征比较 本院和国内文献报道的５３例次患者除外周血淋巴
细胞表型的流式细胞术分析
Ｂｅｃｔｏｎ
采用标准的４色流式细胞仪（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ型， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品）检测外周血或骨髓细胞
免疫表型。基于前向散射彤侧向角散射光（ＦＣＳ／
ｓｓｃ）圈出淋巴细胞群，单克隆抗体ＣＤ３、ＣＤ８、 ＴＣＲｃｔ＿［３、ＴＣＲＴｇ标记细胞，以ＴＣＲ ＢＶ ２４家族荧光
细胞绝对值高外，主要伴有乏力、心悸，部分诊断为 侵袭性ＬＧＬＬ，患者有肝脾肿大，骨髓形态学表现以 纯红细胞再生障碍为主。国外报道患者共２０３例 次，欧美患者临床以发热、乏力为主要表现，外周血 粒细胞缺乏为主。本院４例发病时均以重度贫血为 主要表现，外周血淋巴细胞比例增高，红细胞计数和 血红蛋白水平降低，血小板数正常。
・２６・
中国实验血液学杂志Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ２０１２；２０（１）：２６—３２
文章编号（Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ）：１００９—２１３７（２０１２）０１—００２６—０７
・论著・
大颗粒Ｔ淋巴细胞白血病的免疫基因诊断和
西罗莫 吾ｌ未厶 日Ｊ，口 疗
邢海洲１，朱平１加，刘倩１，张英１，陈艳１，胡呖１，陈雪１，夏君燕１，田正芹１，龚艺文２
ＴＲＢＶ １３．６．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＦＣＭ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｌｌ ｔｈｏｓｅ ｏｆ
１
ＲＴ．ＰＣＲ．Ｗｈｅｎ
４
ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｈａｄ ｂｅｅｎ
ｇｉｖｅｎ
ｗｅｅｋ，ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｓｅｒｉｏｕｓ ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｉｔ ｉｓ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＴＣＲ
ａｎｅｍｉａ；ＣＡ：ｃｈｒｏｍｃ ａｎｅ而ａ
万方数据
・２８・
中国实验血液学杂志Ｊ
Ｅｘｐ
Ｈｅｍａｔｏｌ
２０１２；２０（１）
Ｔａｂｌｅ ２．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｅｓｔ ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ ２５６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌａｒｇｅ ｇｒａｎｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ
ｗｅｒｅ
Ｂ—ｃｈａｉｎ（ＴＣＲ ＢＶ），ＣＤ３，ＣＤ４ ａｎｄ
ａｓ
ＴＣＲｃｔ［３，ＴＣＲ＾ｙ８
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；ｔｈｅ ＲＴ—ＰＣＲ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔＯ ａｍｐｌｉｆｙ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｓｐｅｃｔｒｏｔｙｐｅｓ，ａｎｄ ｔｏ
６
材料和方法
病例来源
ｍｇ顿服；维持量２ ｍｇ口服，１次／ｄ；年龄≥１３岁，
体重≤４０ ｋｇ的患者初始剂量应根据体表面积调整
至１ ｍｇ／（ｍ２・ｄ），负荷剂量应调整为３
ｍｇ／ｄ；１３
岁以下儿童患者中西罗莫司的安全性和疗效尚未确 定，如需应用，推荐监测其全血谷浓度维持在７．２
ｎｇ／ｍ１］。
病例分析包括本院和通过检索获得的国内外报道病
罗莫司（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）治疗，取得了较好的疗效。
ｍｉｎ；然后９４℃变性３０ Ｓ，５５℃退火３０ Ｓ，７２０Ｃ延伸
３０
Ｓ，共３５个循环；最后７２℃延伸２ ｍｉｎ，反应产物
于４℃保存一。。 西罗莫司治疗方案 确诊后先后给予泼尼松片（８０ ｍｇ，口服，１次／ｄ）、环
胞菌素Ａ胶囊（２５ ｍｇ口服，２次／ｄ，维持血药浓度 于２００ ｎｇ／ｍｌ左右）。无效者改用西罗莫司片［首日
物，进行ＰＣＲ，做ＴＣＲ基因谱型图。反应体系２０
“１，含２×ＭＩＸ １０¨１，上下游引物各０．５¨ｌ，ｃＤＮＡ
１斗１，ｄｄＨ２ Ｏ ８斗１。ＴＣＲ ＴＣＲ ＢＶ
ｄ链恒定区作为内参。
１－２４家族ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性５
依靠形态学结果，极易造成ＬＧＬＬ漏诊或误诊。本 研究对该类患者骨髓细胞进行了Ｔ细胞受体Ｂ链 Ｖ区２４家族（ＴＣＲ ＢＶ）流式细胞术免疫表型分析 和基因谱型检测，寻找淋巴细胞恶性克隆性增殖的 证据，同时收集国内外相关文献加以比较。由于 ＬＧＬＬ治疗尚无可靠的治疗方法，我们首次试用西
Leabharlann Baidu
Ｔａｂｌｅ １．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄａｔａ ｏｆ ４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＬＧＬＬ
ＬＧＬ：ｌａｒｇｅ ｇｒａｎｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ；ＰＲＡ：ｐｕｒｅ ｒｅｄ ｃｅｌｌ ａｐｌａｓｉａ；ＣＬＬ：ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ；ＲＡ：ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ＴＲＢＶ！ＴＣＲ ＢＶ．
Ｒ７３３．１；Ｒ７３３．７
文献标识码
Ａ
Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｌａｒｇｅ Ｇｒａｎｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ
ｘＩＮＧ Ｈｎｉ—ＺｈｏｕＬ，ＺＨＵ ＰｉｎｇＬ“，ＬｌＵ Ｑｉａｎｌ，ＺＨＡＮＧ Ｙｉｎ９１，ＣＨＥＮ Ｙａｎｌ。ＨＵ Ｙａｎ９１，ＣＨＥＮ Ｘｕｅｌ， ＸＩＡ Ｊｕｎ．Ｙａｎｌ。ＴｌＡＮ Ｚｈｅｎｇ—Ｑｉｎｌ．ＧｏＮＧ Ｙｉ—Ｗｅｎ。
１Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００３４，Ｃｈｉｎａ；２Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００７６，Ｃｈｉｎａ Ｐｉｎｇ，Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｓｅｎｉｏｒ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．Ｔｅｌ：（０１０）８８５２２４４４．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｕｐｉｎｇ＠ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
＋通讯作者：朱平，教授，主任医师．电话：（０１０）８８５２２４４４．Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｕｐｉｎｇ＠ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ２０１１—０９—１５收稿；２０１１—０９—２２接受
万方数据
大颗粒丁淋巴细胞白血病的免疫基因诊断和西罗莫司治疗
・２７・
大颗粒淋巴细胞白血病（１ａｒｇｅ
ｌｙｍｐｈｏｉｄ
ｇｒａｎｕｌａｒ
ＢＶ）２４家族，ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲａｌ３、Ｔｃ脚８等表达；ＲＴ—ＰＣＲ扩增做ＴＣＲ基因谱型图，分
析异常细胞的克隆性；同时首次把西罗莫司（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）用于常规治疗无效的患者。结果表明，本院和文献中患者除 外周血淋巴细胞绝对值高外，欧美患者以粒细胞缺乏为主，国内患者以纯红细胞再生障碍为主要表现。本院２例 患者的大颗粒淋巴细胞辨别困难；ＦＣＭ检测发现，淋巴细胞中以ＣＤ３＋ＣＤ８＋细胞为主，ＴＣＲＢＶ呈单克隆分布；逆 转录ＰＣＲ扩增ＴＣＲＢＶ２４基因家族与ＦＣＭ结果一致；用西罗莫司（首剂６ ｍｇ口服，维持剂量２ ｍｇ／ｄ）治疗１周 后，血红蛋白、网织红细胞升高明显。结论：ＦＣＭ检测特异性ＴＣＲＢＶ单克隆淋巴细胞有利于ＬＧＬＬ确诊。西罗莫 司可试用于ＬＧＬＬ患者治疗。 关键词 中图分类号 大颗粒Ｔ淋巴细胞白血病；免疫基因诊断；西罗莫司
ａｌｌ ４ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｌｍｏｓｔ ａｌｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ＣＤ３＋， ＣＤ８＋，ａｎｄ ＴＣＲａ／Ｂ＋．ＴＣＲ ＢＶ ２４ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｃｌｏｎｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＴＲＢＶ ２３，ＴＲＢＶ ２０，ＴＲＢＶ １３．６，ａｎｄ
ｔｏ Ｉｎ
ｂｅ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄ．
例。本院患者４例，男２例，女２例，中位年龄５６岁
（表１）。以面苍、乏力入院，发病时均以纯红细胞再
生障碍为主要表现，外周血淋巴细胞比例增高，红细
胞数、血红蛋白含量降低，血小板计数正常。同时检 索ＣＮＫＩ和ＰｕｂＭｅｄ数据库２０００—２０１０年有关文 献，选择具有完整诊断资料的文献１９篇，计２５６例 患者（表２），其中国内报道共５３例次，国外报道患