大鼠脊髓全横断损伤模型的建立_黄纯海

切 口 上 下段 脊 髓 组织 可 见 水 肿液 化 并 伴坏 死 出 血 , 各 组大 鼠 的 后 肢 运 动 功 能 BBB评 分 均 为 2 1 分 。
并 且 脊 髓 上 下 相 邻 段 回 缩 , 切 口 间 隙 增 大 。 术 后 术 后 BBB评 分 见表 2。
7 d脊 髓 坏 死 节 段 明 显 向 上 下 段 延 伸 , 且 可 见 陈 旧 2 .4 并 发 症 和死 亡 率
国 际 神 经病 学 神 经 外 科 学 杂 志 2 0 0 8 年 第 3 5 卷 第 2 期
大鼠脊髓全横断损伤模型的建立
·论著 ·
黄纯海 , 李学军 , 黄军 , 袁贤瑞＊ 中南大学湘雅医院神经外科 , 长沙 410008
摘 要 :目 的 建立 一种 实用 、可 靠的 大 鼠脊 髓全 横断 损伤 模型 。 方 法 55 只 SD大 鼠随 机 分 为假 手 术 组及 脊 髓 全横 断 损伤 组 , 横断 组选 择 T12节 段 横断 大鼠 脊髓 。 分 别于 术后 2 4h、 7d及 2 1d取 L2 节 段制 成 20μm冰冻 切 片行 HE染 色 , 并 记 录其 后肢 运动 功能 评分 (BBB评 分 )。 结 果 脊髓 全横 断 大鼠 双下 肢运 动功 能 BBB评 分在 同一 时 间点 之间 相比 明 显低 于 假手 术组 , 差 别有 统计 学 意义 (P<0.0 1)。 而且 , 脊 髓 横断 以下 节段 出现 大量 空 泡 , 神 经 元数 量 明 显减 少 , 胶 质 细 胞明 显 增生 , 以 腹角 为甚 ;全 横断 组腹 角神 经元 计数 与 假手 术组 在 同一 时 间点 比 较 有明 显 差 异 (P<0.01 )。 大 鼠的 30 天 存 活 率达 72% 。 结论 本 方法 为一 种稳 定 可靠 , 操 作简 单的 大鼠 脊髓 全 横断 模型 制作 法 。 关键 词 :大鼠 ;脊 髓损 伤 ;全 横断 ;模 型
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Establishmentoftransectedspinalcordinjurymodelinrats
HuangChun-Hai, LiXue-Jun, HuangJun, YuanXian-Rui＊ DepartmentofNeurosurgery, XiangyaHospital, CentralSouthUniversity,
0.01).Moreover, intSCIgroup, thedecreaseofneurons, thehyperplasiaofgliacellsandthelargenumberofcavitiesweredetected
ingraymatter, especiallyinventralhorn.ThenumberofneuronsinventralhornwassignificantlydecreasedintSCIgroupcompared
Changsha, Hunan, 410008, P.R.China
Abstract:Objective Toestablishasimpleandstabletransectedspinalcordinjury(tSCI)model.Methods 55 SD ratswereat
randomlydividedintosham groupandtSCIgroup.IntSCIgroup, therat'sspinalcordswerecompletelytransectedinT12.TheBasso, BeattieandBresnahanlocomotortatingscale(BBBscores)wasemployedtoevaluatetherat'slocomotorfunctionofhindlimbs.Thespi-
用 SPSS10.0 统 计 分 析 软 件 包 处理 数 据 , 分 别 求 得各组 数据 的均 值 和标 准 差 。根 据 数据 资 料 的特 征 组间同 时间段采用 成组 t检验 ;组 内用单 因素 方差 分 析进行 显著性检验 , 两两比较 用 SNK法 (α=0 .05)。
图片 1 假手术组 L2 脊髓 HE染色 , 脊髓结构及细胞形态均正常 . ×200
5 5 只 雌 性 健 康 SD大 鼠 , 体 重 为 2 0 0 g±1 0 g, 购 自中 南 大 学 湘雅 医 学 院实 验 动 物 中心 , 购 回 后给 予 充足 的 营 养及 水 份 , 于 安 静 通 风 环 境 下 12 小 时
基金项目 :湖南省卫生厅资助项目 (NOB2006 -O34) 收稿日期 :2008 -01 -15;修回日期 :2008 -03 -05 作者简介 :黄纯海 , 男 (1972 -), 在读博士 , 主治医师 , 主要从事中枢神经系统损伤与再生研究 。 ＊通讯作者 :袁贤瑞 (1953 -), 教授 , 博导 , 主要从事显微神经外科临床与基础研究 , Email:xyr69@163.com.cn.
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国 际 神 经病 学 神 经 外 科 学 杂 志 2 0 0 8 年 第 3 5 卷 第 2 期
2 结 果
天 BBB评 分 均 明显 低 于 假 手术 组 (P<0.001 )。 横
2 .1 脊髓 形 态 学变 化
断 组 7 d后 双 下 肢 BBB评 分 有所 恢 复 (P<0.001 )。
假手 术 组 除 2 4 h局 部 脊髓 有 轻 度 水 肿 外 , 其 余 一 直到 30 天 双 下 肢 自 主 运 动 均 未 恢 复 。 术 后 1 0
各 时 间 段 脊 髓 外 观 形 态 均 正 常 。 手 术 组 术 后 2 4h ～ 15 天 大鼠 排 便 功能 渐 恢 复 至 正 常 。 实 验 前 检 查
图片 2 脊髓全 横断后 7 天 L2 脊髓 HE染色 , 脊髓空洞 加重 , 胶 质细胞增生明显 .×200
图片 3 脊髓全横断后 7天 L2 脊髓 HE染色 , 腹角神经元数目明显 减少 .×200
图片 4 脊髓全横断后 21天 L2 脊髓 HE染色 , 胶质细胞增生则更 明显 ×200
硬 脊膜 , 但 不 损伤 脊 髓 。 1 .2 .4 全 横 断 术 后 的 护 理 针 对 大 鼠 生 活 习 性 及 大鼠 脊 髓 全 横断 后 易 出现 的 并 发 症 , 制 定 规 范的 大 鼠护 理 日 程表 , 将 每 天 的 护 理 分 为 三 个 时 间 段 : 8 ∶3 0 AM ～ 9 ∶3 0 AM为 晨 间 护 理 ;3 ∶00 PM为 午 间 护 理 ;8 ∶0 0 PM ～ 9 ∶0 0 PM为 晚 间 护 理 。 内 容 包 括 排 尿排 便 、换 垫 料 、伤 口 换 药 、注 射 抗 生 素 及 营 养 液 灌胃 。 午 间 仅需 排 尿 。 1 .3 形 态 学 观察
withthatinsham groupatthesametime(P<0.01).30dsurvivalrateoftSCIgroupwere72%.Conclusions Thismethodcanbe
regardedasasimpleandstablewaytoestablishtSCImodelofrat.
取 L2 节 段 脊 髓 制 作 横 行 冰 冻 切 片 , 片 厚 2 0 μm。 常 规 HE染 色 , 观察 脊 髓 的组 织 病 理 变化 。 1 .4 运 动 功 能检 测
采 用 BBB法 [ 4, 5] 对 大 鼠 双 侧后 肢 进 行 评 分 。 三 人 独立 观 察 记 录 , 每 只 大 鼠的 评 分 为双 侧 后 肢 评分 的 均值 。 所 有 行 为 学 评 估 均 在 单 盲 情 况 下 进 行 。 评 分时 间 为 晚 上 8 ～ 9 点 , 最 后 取 三人 均 值 为准 。 1 .5 数 据 分 析和 处 理
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JournalofInternationalNeurologyandNeurosurgery 2 0 0 8, 3 5(2)
明 暗 交 替 饲 养 , 室 内 温 度 18 ～ 2 2 ℃ , 湿 度 50 % ～ 65% 。饲 养 一 周 后手 术 。
动物 随 机 分 为 手术 组 40 只 和 假 手术 组 15 只 。 分 别 于 术后 2 4 h、 3 d、 7 d、 1 4 d、2 1 d各 组随 机 选 取 5 只 大 鼠 用 于 后 肢 运 动 功 能 评 分 , 其 中 术 后 2 4 h、 7 d、 2 1 d三 个 时 间点 的 大 鼠 评分 后 处 死用 于 病 理 学 检 查 及 腹角 神 经 元计 数 。 1 .2 模型 的 制 作及 护 理 1 .2 .1 术 前 准 备 及 麻 醉 右 腹 股 沟 中 点 上 方 0.5 cm进 针 , 氯 胺 酮 (5 0 mg/kg)+安 定 (2 .5 mg/kg)腹 腔 注 射 麻醉 。 将 大鼠 俯 卧 固 定 、备 皮 、消毒 。 1 .2 .2 皮 肤 切 口 及 定 位 扪 及 两 侧 胸 斜 方 肌 腱 交 点 (约 对 胸 1 2 ～ 1 3 椎 ), 以 此 点 为 标 志 , 分 别 向 上 下 各 纵 行 切 开 皮 肤 约 0 .5 ～ 0 .8 cm。 逐 层 钝 性 分 离 。 显露 胸 10、 11、 12 三 个 棘 突 及 其 椎 板 。 切 断 棘 间 韧带 , 蚊 式 钳咬 除 棘 突 , 用 尖 刀挑 开 胸 10 ～ 1 1 间 的 黄 韧带 , 咬 除 胸 10 椎 板 约 1 /2 或 全 部 。 显 露脊髓 。用自制的银针钩 从腹侧穿过 , 挑 起脊髓 , 用 显 微 剪剪 断 脊 髓 , 银 针 自 然 脱 出 即 可 , 然 后 横 断 处 尾 端 切除 2 mm。 止 血 、逐层 缝 合 。 1 .2 .3 假 手 术 对照 按 上 述 方 法 显 露 脊 髓 , 剪 开
Keywords:rat;spinalcordinjury;transection;model
脊 髓损 伤 (Spinalcordinjury, SCI)是 一 种 较 常 见 的 严 重 致 残 的 病 变 , 给 个 人 、家 庭 、社 会 均 带 来 了 沉 重 的负 担 [ 1] 。 由 于 损 伤 之 后 的 神 经 再 生 相 当 困 难 , 故 尚无 根 本 解决 办 法 以促 进 其 形 态重 建 及 功 能恢复 。研究脊髓损 伤最基本的条 件就是要 建立 标 准 的 实验 性 脊 髓损 伤 模 型 。目 前 , 脊 髓损 伤 模 型 繁 多 , 但 尚无 统 一 的 分 型 [ 2, 3] 。 脊 髓 全 横 断 损 伤 在 研 究 神 经再 生 方 面 无 疑 具 有 其 它 模 型 无 可 比 拟 的 优 点 , 但由 于 这 种 模 型 难 以 保 证 手 术 的 一 致 性 , 可
nalcordsfrom
L 2
wereremovedoutandcuttedinto20μmslicesforHEstainingat2
4h,
7dand21dafteroperation,
respectively.Re-
sults TheresultsshowedthatthedifferenceofBBBscoresbetweensham groupandtSCIgroupatthesametimewassignificant(P<
重 复性 差 , 且 脊髓 全 横 断 后 动 物 很 难 护 理 , 死 亡 率 非 常高 , 故 也 限制 了 其 应 用发 展 。 本研 究 对 此 模型 包 括从 手 术 到 护理 进 行 了一 些 改 进 , 以 期 建 立 一种 结 果稳 定 可 靠 , 操 作 简 便 的大 鼠 脊 髓全 横 断 模 型 。 1 材料 与 方 法 1 .1 动 物 及 分组