α硫酸锌在大鼠急性脊髓损伤中的保护作用
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王 鑫 ，王 云飞 ，张 守丹 ，姜凤伟 ，陆双
辽 宁医学院附属 第一 医院急诊科（ 辽 宁锦 州 １ ２ １ ０ ０ １ ）
【 摘要 】 目的
研 究 ｄ硫酸锌在 大鼠急性脊髓损 伤 中的保护作 用。方法 采 用改 良的 Ａ ｌ ｌ ｅ ｎ ｓ 打 击模 型对
２ ４只成年 ｓ Ｄ雄性大 鼠制作 急性脊 髓损 伤模 型 ， 模 型制作 成功后 ， 将 大鼠随机分 为 ３组 ， 于各组动物腹膜 内分别缓
广东 医学 ２ ０ １ ３年 １ 月 第３ ４卷第 １ 期 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ．１
・
４５ ・
仪硫 酸锌 在大 鼠急性脊髓损伤 中的保护作用
【 关键词 】 ０ ｌ 硫 酸锌 ； 脊髓损伤 ；甲泼尼龙
近年来 ， 脊 髓损伤 （ ｓ ｐ ｉ ｎ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ） 的发病 率不 断升高 ， 但其损 伤机制研究进 展相对缓慢 ， 治疗 效果不 佳 。在脊髓原发损伤后最初 的 ６～８ ｈ内 ， 受损组 织便 发生一 系列 的病理 生理变 化 ， 随 即产生一 系列 因子及 炎性介质 ， 导致 损伤组 织 的水肿 、 出血 、 脂 质过 氧化 和 钙离子 内流 ， 造成神经 细胞死 亡和轴 突结构 的改变 ， 这 种损伤被称作二次损伤 ¨ 。 目前研究 提示 ， 自由基 、 脂 质过 氧 化 反 应 和 凋 亡 在 二 次 损 伤 中具 有 重 要 作 用 。 。脊髓损伤后 治 疗越 早 ， 预 后越 好 。根据 相 关 研究 结果 ， 我们 注 意到 仅硫酸 锌 （ ａ ｌ ｐ ｈ ａ ｌ ｉ ｐ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ） 其 本身 的抗 氧化作用及清除作用可能会 降低 或阻止脊髓 的二 次损伤 。我们于 ２ ０ １ １ 年 ３月至 ２ ０ １ ２年 ３月通 过 实验研 究 仅硫酸锌在大 鼠脊髓损伤模 型中的神经保 护 作用 。现报告 如下。
硫 酸 锌 购 自德 国 Ｍ Ｅ Ｄ Ａ
１ ． ３ ． ３ Ｈ Ｅ染 色
脊髓组织 冠状切 面切片 ， 常规 石蜡
。
Hale Waihona Puke Baidu
Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ Ｇ ｍ ｂ ｈ＆ Ｃ ｏ ． Ｋ Ｇ公 司 ， 浓 度 配置 为 １ ２ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ； 甲泼尼 龙 （ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｐ ｒ ｅ ｄ ｎ ｉ ｓ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ） 购 自辉 瑞 公 司 ， 浓度 配 置为 ４ ０ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ； 过氧化脂质／ 乳 过氧化 物酶 （ Ｌ Ｐ Ｏ） 、 髓 过氧化物酶 （ ＭＰ Ｏ） 测 试盒 购 于南 京建 成 生物 工程 研 究所 ； 组织匀浆器 （ Ｄ Ｉ Ａ Ｘ ９ ０ ０ ， Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ ） ， 紫外 一分光光 度计 （ Ｕ Ｖ ３ ０ ０ ， Ｕ ｎ ｉ ｃ ａ ｍ） ， 电子天平 （ Ｒ ２ ０ ０ Ｄ， Ｓ ａ ｒ ｔ ｏ ｒ ｉ ｏ ｕ ｓ ） ， Ｏ Ｌ Ｙ Ｍ Ｐ Ｕ Ｓ显微镜 。
度神 经组织损伤 ， 巨噬细胞浸润 ， 白质减 少， 中央形 成空洞。过氧化脂质／ 乳过氧化 物酶与髓过 氧化物酶检 测结果
提示， Ａ Ｌ Ｐ组脂 质过 氧化 水平显著低 于 ＭＰ组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， Ｍ Ｐ组 的髓过 氧化水 平显著低 于对 照组 ， 差异有 统计 学
意义（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ； 但Ａ Ｌ Ｐ组 与对照组髓过氧化水平 比较 ， 差异无 统计 学意义 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） 。结 论 ０ 【 硫 酸锌和 甲泼 尼龙 均无法改变 大鼠脊髓损伤 节段 的组织坏死程度 ， 然而， ｄ硫 酸锌却可 以降低脊髓损伤后 的脂质过氧化水平 。
１ 材 料 与 方 法
置以５ ０ ｇ ／ ｃ ｍ（ 重量 为 １ ０ ｇ 的铁锤从 ５ ｃ ｍ高处 自由落 下） 的致伤 能量造 成 急性脊 髓损 伤 作为模型制备成功 的标志 。 。 以大 鼠尾 巴 痉挛性摆动 、 双下肢及躯体的 回缩 、 苏醒后双下肢瘫痪
１ ． ３ ． ２ 药物 干预 与取材
慢 注射 ０ 【 硫 酸锌 （ Ａ Ｌ Ｐ组 ） 、 甲泼尼龙 （ ＭＰ组 ） 、 生理 盐水（ 对照组 ） 各０ ． ３ ｍ Ｌ 。取材 ， 收集脊髓组织 ， 行病理 学及 生
化检 测。结果
组 织病理 学检 测发 现 ， Ａ Ｌ Ｐ组轻度 神 经组织损 伤 ， 无神 经细胞减 少 ， 脊 髓后侧 无受影 响 ； ＭＰ组 中
模型制作 成功后 ， 立 即采用
２ ２ Ｇ针头于各组动物腹膜 内分 别缓慢 注射药 物各 ０ ． ３ ｍ Ｌ ： Ａ Ｌ Ｐ组 为 硫酸锌 ， ＭＰ组为 甲泼尼 龙 ， 对 照组 为 生理盐水 。随后放入笼 中饲养。６ ｈ后 ， 取各组大 鼠麻 醉后 ， 剖开胸部 ， 剪开右心耳 作为血 液灌 注和灌注液 的 出 口， 经左心室 注入肝 素化 生理 盐 水 １ ５ ０ ｍ Ｌ ， 之 后注 入４ ％多聚 甲醛的磷 酸盐 缓 冲液 １ ５ ０～２ ０ ０ ｍ Ｌ进 行在
体脊髓 组织固定 ， 完整 离段损 伤的 Ｔ ８ 圳 阶段脊髓 组织
节段 约 １ ｃ ｍ， 分成 ２份 ， １ 份 在室温 固定 于 ４ ％多 聚 甲 醛溶液中 ２ ４ ｈ ， 留做 Ｈ Ｅ染色 ； 另１ 份冻于 一 ２ ０ ℃， 检测
Ｌ Ｐ Ｏ及 ＭＰ Ｏ。
１ ． １ 材 料 和 实验 仪 器
包埋 ， ５ ｍ连续切 片 ， 行Ｈ Ｅ染 色 ， 观察脊髓 组织病 理
损伤情况 。采用 Ｂ ｌ ａ ｃ ｋ 分级 系统分级 １ ． ３ ． ４ Ｌ Ｐ Ｏ及 Ｍ Ｐ Ｏ水平的检测 标本称 重后置 于匀
辽 宁医学院附属 第一 医院急诊科（ 辽 宁锦 州 １ ２ １ ０ ０ １ ）
【 摘要 】 目的
研 究 ｄ硫酸锌在 大鼠急性脊髓损 伤 中的保护作 用。方法 采 用改 良的 Ａ ｌ ｌ ｅ ｎ ｓ 打 击模 型对
２ ４只成年 ｓ Ｄ雄性大 鼠制作 急性脊 髓损 伤模 型 ， 模 型制作 成功后 ， 将 大鼠随机分 为 ３组 ， 于各组动物腹膜 内分别缓
广东 医学 ２ ０ １ ３年 １ 月 第３ ４卷第 １ 期 Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｊ ａ ｎ ． ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ．１
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４５ ・
仪硫 酸锌 在大 鼠急性脊髓损伤 中的保护作用
【 关键词 】 ０ ｌ 硫 酸锌 ； 脊髓损伤 ；甲泼尼龙
近年来 ， 脊 髓损伤 （ ｓ ｐ ｉ ｎ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｊ ｕ ｒ ｙ ） 的发病 率不 断升高 ， 但其损 伤机制研究进 展相对缓慢 ， 治疗 效果不 佳 。在脊髓原发损伤后最初 的 ６～８ ｈ内 ， 受损组 织便 发生一 系列 的病理 生理变 化 ， 随 即产生一 系列 因子及 炎性介质 ， 导致 损伤组 织 的水肿 、 出血 、 脂 质过 氧化 和 钙离子 内流 ， 造成神经 细胞死 亡和轴 突结构 的改变 ， 这 种损伤被称作二次损伤 ¨ 。 目前研究 提示 ， 自由基 、 脂 质过 氧 化 反 应 和 凋 亡 在 二 次 损 伤 中具 有 重 要 作 用 。 。脊髓损伤后 治 疗越 早 ， 预 后越 好 。根据 相 关 研究 结果 ， 我们 注 意到 仅硫酸 锌 （ ａ ｌ ｐ ｈ ａ ｌ ｉ ｐ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ） 其 本身 的抗 氧化作用及清除作用可能会 降低 或阻止脊髓 的二 次损伤 。我们于 ２ ０ １ １ 年 ３月至 ２ ０ １ ２年 ３月通 过 实验研 究 仅硫酸锌在大 鼠脊髓损伤模 型中的神经保 护 作用 。现报告 如下。
硫 酸 锌 购 自德 国 Ｍ Ｅ Ｄ Ａ
１ ． ３ ． ３ Ｈ Ｅ染 色
脊髓组织 冠状切 面切片 ， 常规 石蜡
。
Hale Waihona Puke Baidu
Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ Ｇ ｍ ｂ ｈ＆ Ｃ ｏ ． Ｋ Ｇ公 司 ， 浓 度 配置 为 １ ２ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ； 甲泼尼 龙 （ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｐ ｒ ｅ ｄ ｎ ｉ ｓ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ） 购 自辉 瑞 公 司 ， 浓度 配 置为 ４ ０ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ； 过氧化脂质／ 乳 过氧化 物酶 （ Ｌ Ｐ Ｏ） 、 髓 过氧化物酶 （ ＭＰ Ｏ） 测 试盒 购 于南 京建 成 生物 工程 研 究所 ； 组织匀浆器 （ Ｄ Ｉ Ａ Ｘ ９ ０ ０ ， Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ ） ， 紫外 一分光光 度计 （ Ｕ Ｖ ３ ０ ０ ， Ｕ ｎ ｉ ｃ ａ ｍ） ， 电子天平 （ Ｒ ２ ０ ０ Ｄ， Ｓ ａ ｒ ｔ ｏ ｒ ｉ ｏ ｕ ｓ ） ， Ｏ Ｌ Ｙ Ｍ Ｐ Ｕ Ｓ显微镜 。
度神 经组织损伤 ， 巨噬细胞浸润 ， 白质减 少， 中央形 成空洞。过氧化脂质／ 乳过氧化 物酶与髓过 氧化物酶检 测结果
提示， Ａ Ｌ Ｐ组脂 质过 氧化 水平显著低 于 ＭＰ组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， Ｍ Ｐ组 的髓过 氧化水 平显著低 于对 照组 ， 差异有 统计 学
意义（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ； 但Ａ Ｌ Ｐ组 与对照组髓过氧化水平 比较 ， 差异无 统计 学意义 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） 。结 论 ０ 【 硫 酸锌和 甲泼 尼龙 均无法改变 大鼠脊髓损伤 节段 的组织坏死程度 ， 然而， ｄ硫 酸锌却可 以降低脊髓损伤后 的脂质过氧化水平 。
１ 材 料 与 方 法
置以５ ０ ｇ ／ ｃ ｍ（ 重量 为 １ ０ ｇ 的铁锤从 ５ ｃ ｍ高处 自由落 下） 的致伤 能量造 成 急性脊 髓损 伤 作为模型制备成功 的标志 。 。 以大 鼠尾 巴 痉挛性摆动 、 双下肢及躯体的 回缩 、 苏醒后双下肢瘫痪
１ ． ３ ． ２ 药物 干预 与取材
慢 注射 ０ 【 硫 酸锌 （ Ａ Ｌ Ｐ组 ） 、 甲泼尼龙 （ ＭＰ组 ） 、 生理 盐水（ 对照组 ） 各０ ． ３ ｍ Ｌ 。取材 ， 收集脊髓组织 ， 行病理 学及 生
化检 测。结果
组 织病理 学检 测发 现 ， Ａ Ｌ Ｐ组轻度 神 经组织损 伤 ， 无神 经细胞减 少 ， 脊 髓后侧 无受影 响 ； ＭＰ组 中
模型制作 成功后 ， 立 即采用
２ ２ Ｇ针头于各组动物腹膜 内分 别缓慢 注射药 物各 ０ ． ３ ｍ Ｌ ： Ａ Ｌ Ｐ组 为 硫酸锌 ， ＭＰ组为 甲泼尼 龙 ， 对 照组 为 生理盐水 。随后放入笼 中饲养。６ ｈ后 ， 取各组大 鼠麻 醉后 ， 剖开胸部 ， 剪开右心耳 作为血 液灌 注和灌注液 的 出 口， 经左心室 注入肝 素化 生理 盐 水 １ ５ ０ ｍ Ｌ ， 之 后注 入４ ％多聚 甲醛的磷 酸盐 缓 冲液 １ ５ ０～２ ０ ０ ｍ Ｌ进 行在
体脊髓 组织固定 ， 完整 离段损 伤的 Ｔ ８ 圳 阶段脊髓 组织
节段 约 １ ｃ ｍ， 分成 ２份 ， １ 份 在室温 固定 于 ４ ％多 聚 甲 醛溶液中 ２ ４ ｈ ， 留做 Ｈ Ｅ染色 ； 另１ 份冻于 一 ２ ０ ℃， 检测
Ｌ Ｐ Ｏ及 ＭＰ Ｏ。
１ ． １ 材 料 和 实验 仪 器
包埋 ， ５ ｍ连续切 片 ， 行Ｈ Ｅ染 色 ， 观察脊髓 组织病 理
损伤情况 。采用 Ｂ ｌ ａ ｃ ｋ 分级 系统分级 １ ． ３ ． ４ Ｌ Ｐ Ｏ及 Ｍ Ｐ Ｏ水平的检测 标本称 重后置 于匀