第09章 维生素类药物的分析312[可修改版ppt]

第二法：用于有杂质的干扰的情况，需 要预处理：
1．皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤 提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。
2．净化：供试液A经液相色谱分离，准 确收集含有维生素D及前维生素D混合物 的全部流出液，制备成供试液B。
3．含量测定：取供试液B按第一法测定。
第三法：用于经第二法处理后仍有杂质 的干扰的情况，预处理后还要处理：
维生素D的含量测定的高效液 相色谱法（ChP方法简介）
方法提要：
NP-HPLC(VitD2、 VitD3均以本法测定) 硅胶柱 流动相：正己烷—正戊醇（997:3） 检测波长:254nm 定量方法：内标法，(测定维生素D的
总量.) 内标物：邻苯二甲酸二甲酯
该法分为三个方法 : 第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰
结构。
R2
O
R3
2. 促进血红素的合
成：能提高血红
素合成过程中的
关键酶ALA合成
酶和ALA脱水酶
的活性
一、结构及性质
维生素E为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙 酰化的酚羟基，又称生育酚。α-异构体活性最强。
C3H
CH3
O CH3 CH3
CH3
C3H CH3
CH3 CO
★ ★[结构特点]:
O CH3
的情况，直接进样测定：
1．系统适用性试验：测定重复性和分离度。 维生素D3 、前维生素D3 、反式维生素D3 、 速甾醇D3 （R>1.0)
2．测定前维生素D折算维生素D的校正因子：
f 2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS）
3．含量测定：用维生素D及前维生素D折算维 生素D的总量.
mi=（f1 Ai1+ f 2 Ai2）mS /AS
1．芳环：具弱紫外吸收，可用于鉴别。
2．乙酰化的酚羟基：水解后生成生育酚，可发生三氯化 铁反应和氧化还原反应，用于鉴别。
3. 分子中无亲水基，不溶于水。
4. 酯键易水解
一、结构及性质
★[理化性质]:
1. 溶解性 微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶 于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。
2. 水解性：在酸性或碱性溶液中，加热可水解生 成游离生育酚。
二、鉴别试验
★ 1.硝酸反应 ChP，JP
★[原理]:维生素E在硝酸酸性溶液中，加热可
水解生成生育酚，生育酚继续被氧化成为邻醌
结构的生育红。（橙红色）
H3C
CH3 O
HO CH3
生育酚
CH3
HNO3 H3C
C16H33
CH3 O
CH3 C16H33
O
O
生育红 （橙红色）
强氧化剂
Vi tEH or O H 生育酚 醌 型 化 合物 [ O]
1．预处理后在经提取分离制备供试液 C。供试液C用于进样测定：
2．含量测定：在第一法的色谱条件下， 交替精密进样对照液和供试液C，按外 标法定量。
维生素E的分析 生物效价
主要生理功能：
右旋体 ： 消旋体 = 1.4 :10 （天然品） （合成品）
1. 抗氧化作用：清
R1
除自由基保护膜 CH3CO O
H3C HO
CH3 O
CH3 C16H33
[O]
H3C
CH3
生育酚
O
CH3 O
OH
CH3 C16H33
CH3 对-生育醌
3. 易氧化性：维生素E水解后的产物，在有氧或 其他氧化剂存在时，则进—被氧化生成醌， 碱性条件下加热则更易反应，应避光、避氧 保存。
4.弱紫外吸收:本品的无水乙醇溶液在 284nm波长处测定吸收度时，其吸收 系数E1%1cm为41.0—45.0。(0.1mg／ mL溶液测定)
（此性质可用于鉴别，但不能用于含量 测定！）
[方法]：取本品约30mg，加无水乙醇 10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在 75℃加热约15min，溶液应显鲜红色， 逐步转为橙红色。
[特点]： 简便、快速、呈色明显
★ 2. 三氯化铁反应: ★[原理]: 维生素E在碱性溶液中加热水解
生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对 生育醌，同时生成亚铁离子。后者与联吡 啶生成血红色的配离子。
★鉴别试验
★ （一）显色反应： 1.醋酐-浓硫酸反应： D2: 黄 红 紫 绿。 D3: 黄 红 紫 、蓝绿 绿 2.三氯化锑反应 :橙红色，渐变粉红 3.三氯化铁反应 :橙黄色
鉴别试验
（二）维生素D的比旋度
药物 溶剂
浓度 比旋度值
维生素D2 无水乙醇 40mg/ml +102.5°～+107.5° 维生素D3 无水乙醇 5mg/ml +105°～+112°
第09章 维生素类药 物的分析312
甾醇衍生物
HO
胆甾醇
-2H
HO
B
7-脱氢胆甾醇
UV
HO
维生素 D3
HO
B
麦角甾醇
UV
HO
维生素 D2
结构及性质
维生素D2、维生素D3 （ChP收录）
H H CH3 CH3
CH3 CH3
H H CH3 CH3
CH2
H CH3
CH2
CH3 CH3
HO
H
HO
H
H
H
★[结构特点与分析方法的关系]
源自文库
1．开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。 2．手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。 3．多烯：可进行紫外检测, 不稳定.
结构及性质
性质： 1.性状: 无色针晶或白色结晶状粉末 2.溶解性: 脂溶性 3.不稳定性: 易氧化, 对酸也不稳定. 4.旋光性: 具手性碳 5.可发生甾类化合物的显色反应 6.紫外吸收:265nm E1%1cm（VitD2：460-490 ,VitD3：465-495）
注意事项
应 于 容 器 开 启 30 分 钟 内 取 样 ， 在溶液配制后30分钟内测定，否则会有变旋 光现象。
鉴别试验
（三）其他鉴别方法 TLC、HPLC、制备衍生物测熔点 UV、IR ★ （四） VitD2、 VitD3区别反应： Kober反应：85%浓硫酸—乙醇显色
甾类化合物的显色反应
VitD2：红色， max=570nm VitD3：黄色， max=495nm
杂质检查
（一）麦角甾醇 ChP规定VitD2中必须检查项目
试剂：洋地黄皂苷溶液 混合放置18小时，不得发生浑浊或沉淀
（二）前VitD（5，7—二烯甾醇）的光照产物
（三）有关物质：NP-HPLC
含量测定
方法种类： 化学法 光谱法 色谱法 微生物法 生化法—竞争蛋白结合法（特异性最高） 中国药典——正相高效液相色谱法