水稻幼穗培养高效再生系统的建立
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在基本培养基 ＭＳ 中添加不同的营养物和激素，配制如下： 诱导（继代）培养基（ＹＳ－Ｙ）：ＭＳ基本培养基 ＋ Ｐｒｏ（脯氨酸）５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ＣＨ（水解酪蛋白）３００ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｇｌｎ（谷氨酰胺）５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ２，４－Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ ＋ ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ（蔗糖） ３０ ｇ／Ｌ ＋ Ｐｈｙｔａｇｅ（ｌ 植 物凝胶）３．０ ｇ／Ｌ，ｐＨ＝５．８。 预分化培养基（ＹＳ－ＹＦ） ： ＭＳ基本培养基 ＋ Ｐｒｏ ５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ＣＨ ３００ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｇｌｎ ５００ ｍｇ／Ｌ＋ ６－ ＢＡ ２ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ １ ｍｇ／Ｌ ＋ ＡＢＡ ５ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ ＋ Ｐｈｙｔａｇｅｌ ３．０ ｇ／Ｌ，ｐＨ＝５．８。 芽 分 化 培 养 基（ ＹＳ－Ｆ）， 其 中 出 芽 培 养 基（ ＹＳ－Ｆ１）：ＭＳ 基 本 培 养 基 ＋ Ｐｒｏ ５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ＣＨ ３００ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｇｌｎ ５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ６－ＢＡ ３ ｍｇ／Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ ＋ Ａｇａｒ（琼脂粉）８．６ ｇ／Ｌ； 长苗培养基（ＹＳ－Ｆ２） ：ＭＳ基本培养基 ＋ Ｐｒｏ ５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ＣＨ ３００ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｇｌｎ ５００ ｍｇ／Ｌ ＋ ＫＴ ３ ｍｇ／ Ｌ ＋ ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ ＋ Ａｇａｒ ８．６ ｇ／Ｌ，ｐＨ＝５．８。 生 根 培 养 基（ ＹＳ－ＳＧ）：１／２ ＭＳ 大 量 、微 量 元 素 及 铁 盐 ＋ １／２ 维 生 素 Ｂ５ ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ ＋ Ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ ＋ Ａｇａｒ ８．６ ｇ／Ｌ ，ｐＨ＝５．８。 １．３ 取 材 与 接 种 在水稻处于幼穗分化期间，按幼穗长度分成０．５￣１．０ ｃｍ（幼穗分化第１￣２期）、１．１￣２．０ ｃ（ｍ 幼 穗分化第３￣４期）、２．１￣４．０ ｃｍ（幼穗分化第５期）和４．１￣６．０ ｃｍ（幼穗分化第６期）（韦鹏霄等，１９９３； 吴殿星等，１９９６）四组， 取生长一致的植株，剥去主茎外层、叶鞘，保留两层幼叶包被，用消 毒纱布包好，在超净工作台上先用７０％酒精浸１ ｍｉｎ，再用０．５％次氯酸钾消毒２０ ｍｉｎ， 无菌水
当苗长至５￣８ ｃｍ时即可转入生根培养基ＹＳ－ＳＧ诱导生根，大约１￣２周根已长粗、长密时便 可除去瓶盖炼苗２￣３ ｄ，然后取出，细心洗净根部残留的培养基移植到无阳光直射的网盆中， 并罩以塑料薄膜，加水保持一定湿度，成活后可移至大田种植。
２ 实 验 结 果
２．１ 幼 穗 取 材 时 期 对 不 同 基 因 型 水 稻 愈 伤 组 织 诱 导 、芽 分 化 的 影 响 水稻幼穗接种一周左右开始膨大变形，两周后在幼穗颖花部位陆续产生愈伤组织（图
Efficient Regeneration from In Vitro Culture of Young Panicles of Rice (Oryza sativa L.)
１ＷＡＮＧ Ｙａ－Ｑｉｎ １ＤＵＡＮ Ｚｈｏｎｇ－Ｇａｎｇ ２ＨＵＡＮＧ Ｊｉａｎｇ－Ｋａｎｇ １ＬＩＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ－Ｙｅ
摘 要 本文测试了不同基因型幼穗取材时期、消毒方式、４℃下处理时间、愈伤组织诱导、分化及生 根条件等对水稻幼穗培养再生成株的影响，实验结果表明，在优化条件下，籼稻的绿苗分化率在８５％以 上，成苗率１１５％左右；粳稻的绿苗分化率在９０％以上，成苗率１３０％左右；粳型广亲和的绿苗分化率、成 苗率分别达到８５％和１１５％以上。由此建立了一套高效、可靠、重复性好的水稻组织培养再生系统，为 水稻遗传转化的顺利进行奠定了基础。 关 键 词 水稻，幼穗，组织培养，高效再生系统
２Ａ），大约２０ ｄ 后６种材料均能诱导出愈伤组织，但不同基因型对水稻幼穗愈伤组织的诱导、 绿苗的分化与幼穗长度有着很大的影响（表 １）。从表 １ 中看出，广亲和的品种的愈伤组织
表 １ 幼穗取材时期对不同基因型水稻愈伤组织诱导、芽分化的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
植物学通报 2004, 21 (1): 52￣60 Chinese Bulletin of Botany
研究论文
水 稻 幼 穗 培 养 高 效 再 生 系 统 的 建 立 ①
１ 王亚琴 １ 段中岗 ２ 黄江康 １ 梁承邺②
（１ 中国科学院华南植物研究所 广州 ５１０６５０） （２ 广东省科技厅 广州 ５１００７０）
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ
南胜１０号 （籼稻） Ｃ４１８ （粳稻） 零轮 （粳型广亲和）
５４
２１（１）
冲洗４￣５次（约２０￣３０ ｍｉｎ），然后在无菌滤纸上小心剥去外围幼叶，将幼穗水平置于诱导培养基ＹＳ－ Ｙ上（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ， ２０００），于２６℃暗培养。 １．４ 芽 分 化 与 苗 伸 长
暗培养约２０ ｄ左右的幼穗在颖花部位诱导出了愈伤组织，将愈伤组织剥离下来，转至预 分化培养基ＹＳ－ＹＦ进行培养，一周后大部分愈伤组织变得色泽淡黄，结构致密并呈颗粒状， 然后再转入芽分化培养基ＹＳ－Ｆ进行芽的诱导，待芽在出芽培养基ＹＳ－Ｆ１中长至约１￣３ ｃｍ时转 入 长 苗 培 养 基 ＹＳ－Ｆ２，光照１２￣１４ ｈ／ｄ，光照度 １ ５００￣２ ０００ Ｌｘ，温 度 约 ２６℃ 。 １．５ 生 根 、炼 苗 与 移 栽
①广东省自然科学基金资助项目（99 07 70 ）。 ②通讯作者。Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ．
作者简介：王亚琴，1972 年生，女，中国科学院华南植物研究所博士研究生，主要从事植物基因工程的研究工作， E－mail: wangyq@scib.ac.cn. 现在通讯地址：广州玉山华南理工大学食品与生物工程学院，５１０６４０。梁承邺，1938 年 生，男，研究员，博士生导师，主要从事水稻遗传育种和生物技术工作。 收稿日期：２００２－１１－１８ 接受日期：２００３－０１－０７ 责任编辑：崔郁英
１ 材 料 与 方 法
１．１ 植 物 材 料 供试水稻有典型籼稻、粳稻、粳型广亲和 ３ 种类型，其中籼稻‘南胜 １０ 号’、‘明
恢 ６３’由 中 国科学院华南植物研究所遗传 室 提 供；粳 稻‘ Ｃ４１８’由 辽 宁 省 农 业 科 学 院 提 供 ， 粳稻‘巴里拉’由湖北农学院提供；粳型广亲和‘零轮’、‘０２４２８’由中国科学院华南 植物研究所遗传室提供。 １．２ 培 养 基
２００４
王亚琴等：水稻幼穗培养高效再生系统的建立
５３
单子叶尤其是禾本科植物的组织培养一直是个难点，无论是愈伤组织的诱导还是再分化体系 的建立，单子叶作物都比双子叶作物困难得多。水稻是世界上重要的粮食作物之一，提高其抗 性、产量及改良品质有着重要的意义。目前转化基因技术已成熟，但由于受基因型的限制， 水稻的遗传转化率还很低。 贾士荣 （１９９３） 也认为目前在作物遗传工程中的一个关键性限制因子 是许多作物特别是单子叶作物缺乏高效的遗传转化和再生系统，而且在基因枪法转化过程中， 受体材料的细胞在经受高速金粉的轰击后，必然产生不同程度的损伤而影响绿苗再生能力。在 水稻众多的外植体（成熟胚、幼胚、花药、幼穗 ）中，幼穗外植体不仅具有较高的脱分化与 再分化能力，而且愈伤组织出现的时间也较早，一般在接种后第１０ ｄ即可产生愈伤组织，且 绿苗分化具有早、多、齐等特点，没有白化苗（韦鹏霄等，１９９３）。本文选取幼穗这一外植体， 研究了水稻幼穗的取材时期、不同的消毒方式、培养基中不同外源激素的添加等对水稻幼穗培 养植株再生的影响，此外，还针对幼穗的取材时间往往比较集中、实验室常采用４℃冰箱保存 而讨论了４℃下不同保存时间对水稻幼穗愈伤组织诱导、绿苗分化的影响。通过对上述因素的 研究，选用典型的籼稻、粳稻、粳型广亲和为材料，建立了水稻幼穗的高效再生系统。
１（ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６５０） ２（Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５Leabharlann Baidu００７０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｐｌａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ， ｓｕｃｈ ａｓ ｄｅｖｅｌｏｐ－ ｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ， ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ， ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ４℃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｅｔｃ．， ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｒｉｃｅ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ： ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ （ Ⅲ￣Ⅳ ｏｆ ｉｎｄｉｃａ，Ⅰ￣Ⅱ ｏｆ ｊａｐｏｎｉｃａ，Ⅴ ｏｆ ｗｉｄｅ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｖａｒｉｅｔｙ， ＷＣＶ） ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ａｔ ４℃ ｗｉｔｈｉｎ ５ ｄａｙｓ， ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ０．５％ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎｕｔｅｓ， ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ＹＳ－Ｙ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｕｔ ２０ ｄａｙｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃａｌｌｉ ， ｔｈｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｔｏ ＹＳ－ＹＦ、ＹＳ－ Ｆ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｕｔ １５ ｄａｙｓ ｔｏ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｓｈｏｏｔｓ ａｎｄ ＹＳ－ＳＧ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ １￣２ ｗｅｅｋｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ． Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｇｒｅｅｎ ｓｈｏｏｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８５％ （ｉｎｄｉｃａ）， ９０％ （ｊａｐｏｎｉｃａ）， ８５％ （ＷＣＶ）， ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｒｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｗａｓ ａｂｏｕｔ １１５％ （ｉｎｄｉｃａ）， １３０％ （ｊａｐｏｎｉｃａ）， １１５％ （ＷＣＶ）， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ａ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｒｏｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｒｉｃｅ， Ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅ， Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ， Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
幼 穗 长 度 （ ｃ ｍ ） Ｎａｎｓｈｅｎｇ Ｎｏ．１０ （ｉｎｄｉｃａ） Ｃ４１８ （ｊａｐｏｎｉｃａ） Ｌｉｎｇｌｕｎ （ＷＣＶ）
当苗长至５￣８ ｃｍ时即可转入生根培养基ＹＳ－ＳＧ诱导生根，大约１￣２周根已长粗、长密时便 可除去瓶盖炼苗２￣３ ｄ，然后取出，细心洗净根部残留的培养基移植到无阳光直射的网盆中， 并罩以塑料薄膜，加水保持一定湿度，成活后可移至大田种植。
２ 实 验 结 果
２．１ 幼 穗 取 材 时 期 对 不 同 基 因 型 水 稻 愈 伤 组 织 诱 导 、芽 分 化 的 影 响 水稻幼穗接种一周左右开始膨大变形，两周后在幼穗颖花部位陆续产生愈伤组织（图
Efficient Regeneration from In Vitro Culture of Young Panicles of Rice (Oryza sativa L.)
１ＷＡＮＧ Ｙａ－Ｑｉｎ １ＤＵＡＮ Ｚｈｏｎｇ－Ｇａｎｇ ２ＨＵＡＮＧ Ｊｉａｎｇ－Ｋａｎｇ １ＬＩＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ－Ｙｅ
摘 要 本文测试了不同基因型幼穗取材时期、消毒方式、４℃下处理时间、愈伤组织诱导、分化及生 根条件等对水稻幼穗培养再生成株的影响，实验结果表明，在优化条件下，籼稻的绿苗分化率在８５％以 上，成苗率１１５％左右；粳稻的绿苗分化率在９０％以上，成苗率１３０％左右；粳型广亲和的绿苗分化率、成 苗率分别达到８５％和１１５％以上。由此建立了一套高效、可靠、重复性好的水稻组织培养再生系统，为 水稻遗传转化的顺利进行奠定了基础。 关 键 词 水稻，幼穗，组织培养，高效再生系统
２Ａ），大约２０ ｄ 后６种材料均能诱导出愈伤组织，但不同基因型对水稻幼穗愈伤组织的诱导、 绿苗的分化与幼穗长度有着很大的影响（表 １）。从表 １ 中看出，广亲和的品种的愈伤组织
表 １ 幼穗取材时期对不同基因型水稻愈伤组织诱导、芽分化的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
植物学通报 2004, 21 (1): 52￣60 Chinese Bulletin of Botany
研究论文
水 稻 幼 穗 培 养 高 效 再 生 系 统 的 建 立 ①
１ 王亚琴 １ 段中岗 ２ 黄江康 １ 梁承邺②
（１ 中国科学院华南植物研究所 广州 ５１０６５０） （２ 广东省科技厅 广州 ５１００７０）
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ
南胜１０号 （籼稻） Ｃ４１８ （粳稻） 零轮 （粳型广亲和）
５４
２１（１）
冲洗４￣５次（约２０￣３０ ｍｉｎ），然后在无菌滤纸上小心剥去外围幼叶，将幼穗水平置于诱导培养基ＹＳ－ Ｙ上（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ， ２０００），于２６℃暗培养。 １．４ 芽 分 化 与 苗 伸 长
暗培养约２０ ｄ左右的幼穗在颖花部位诱导出了愈伤组织，将愈伤组织剥离下来，转至预 分化培养基ＹＳ－ＹＦ进行培养，一周后大部分愈伤组织变得色泽淡黄，结构致密并呈颗粒状， 然后再转入芽分化培养基ＹＳ－Ｆ进行芽的诱导，待芽在出芽培养基ＹＳ－Ｆ１中长至约１￣３ ｃｍ时转 入 长 苗 培 养 基 ＹＳ－Ｆ２，光照１２￣１４ ｈ／ｄ，光照度 １ ５００￣２ ０００ Ｌｘ，温 度 约 ２６℃ 。 １．５ 生 根 、炼 苗 与 移 栽
①广东省自然科学基金资助项目（99 07 70 ）。 ②通讯作者。Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ．
作者简介：王亚琴，1972 年生，女，中国科学院华南植物研究所博士研究生，主要从事植物基因工程的研究工作， E－mail: wangyq@scib.ac.cn. 现在通讯地址：广州玉山华南理工大学食品与生物工程学院，５１０６４０。梁承邺，1938 年 生，男，研究员，博士生导师，主要从事水稻遗传育种和生物技术工作。 收稿日期：２００２－１１－１８ 接受日期：２００３－０１－０７ 责任编辑：崔郁英
１ 材 料 与 方 法
１．１ 植 物 材 料 供试水稻有典型籼稻、粳稻、粳型广亲和 ３ 种类型，其中籼稻‘南胜 １０ 号’、‘明
恢 ６３’由 中 国科学院华南植物研究所遗传 室 提 供；粳 稻‘ Ｃ４１８’由 辽 宁 省 农 业 科 学 院 提 供 ， 粳稻‘巴里拉’由湖北农学院提供；粳型广亲和‘零轮’、‘０２４２８’由中国科学院华南 植物研究所遗传室提供。 １．２ 培 养 基
２００４
王亚琴等：水稻幼穗培养高效再生系统的建立
５３
单子叶尤其是禾本科植物的组织培养一直是个难点，无论是愈伤组织的诱导还是再分化体系 的建立，单子叶作物都比双子叶作物困难得多。水稻是世界上重要的粮食作物之一，提高其抗 性、产量及改良品质有着重要的意义。目前转化基因技术已成熟，但由于受基因型的限制， 水稻的遗传转化率还很低。 贾士荣 （１９９３） 也认为目前在作物遗传工程中的一个关键性限制因子 是许多作物特别是单子叶作物缺乏高效的遗传转化和再生系统，而且在基因枪法转化过程中， 受体材料的细胞在经受高速金粉的轰击后，必然产生不同程度的损伤而影响绿苗再生能力。在 水稻众多的外植体（成熟胚、幼胚、花药、幼穗 ）中，幼穗外植体不仅具有较高的脱分化与 再分化能力，而且愈伤组织出现的时间也较早，一般在接种后第１０ ｄ即可产生愈伤组织，且 绿苗分化具有早、多、齐等特点，没有白化苗（韦鹏霄等，１９９３）。本文选取幼穗这一外植体， 研究了水稻幼穗的取材时期、不同的消毒方式、培养基中不同外源激素的添加等对水稻幼穗培 养植株再生的影响，此外，还针对幼穗的取材时间往往比较集中、实验室常采用４℃冰箱保存 而讨论了４℃下不同保存时间对水稻幼穗愈伤组织诱导、绿苗分化的影响。通过对上述因素的 研究，选用典型的籼稻、粳稻、粳型广亲和为材料，建立了水稻幼穗的高效再生系统。
１（ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６５０） ２（Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５Leabharlann Baidu００７０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ ｐｌａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ， ｓｕｃｈ ａｓ ｄｅｖｅｌｏｐ－ ｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ， ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ， ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ４℃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｅｔｃ．， ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｒｉｃｅ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ： ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅ （ Ⅲ￣Ⅳ ｏｆ ｉｎｄｉｃａ，Ⅰ￣Ⅱ ｏｆ ｊａｐｏｎｉｃａ，Ⅴ ｏｆ ｗｉｄｅ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｖａｒｉｅｔｙ， ＷＣＶ） ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ａｔ ４℃ ｗｉｔｈｉｎ ５ ｄａｙｓ， ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ０．５％ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎｕｔｅｓ， ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ＹＳ－Ｙ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｕｔ ２０ ｄａｙｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｃａｌｌｉ ， ｔｈｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｔｏ ＹＳ－ＹＦ、ＹＳ－ Ｆ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｕｔ １５ ｄａｙｓ ｔｏ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｓｈｏｏｔｓ ａｎｄ ＹＳ－ＳＧ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ １￣２ ｗｅｅｋｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ． Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｇｒｅｅｎ ｓｈｏｏｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８５％ （ｉｎｄｉｃａ）， ９０％ （ｊａｐｏｎｉｃａ）， ８５％ （ＷＣＶ）， ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｒｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｗａｓ ａｂｏｕｔ １１５％ （ｉｎｄｉｃａ）， １３０％ （ｊａｐｏｎｉｃａ）， １１５％ （ＷＣＶ）， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ａ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｒｏｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅｓ ｏｆ ｒｉｃｅ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｉｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｒｉｃｅ， Ｙｏｕｎｇ ｐａｎｉｃｌｅ， Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ， Ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
幼 穗 长 度 （ ｃ ｍ ） Ｎａｎｓｈｅｎｇ Ｎｏ．１０ （ｉｎｄｉｃａ） Ｃ４１８ （ｊａｐｏｎｉｃａ） Ｌｉｎｇｌｕｎ （ＷＣＶ）