药物分离纯化技术制备色谱分离技术培训课件

105-120℃活化
药物分离纯化技术制备色谱分离技术
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制备色谱技术
薄层色谱条件选择
流速 展开模式 分离距离 样品量
开放型 操作不连续
质量 颗粒大小 固定相 薄层厚度
操作参数 流动相
蒸气相
展开缸类型
薄层板和 展开缸空 腔体积比 值
温度
溶剂强度药物分离纯选化技择术制性备色谱分黏离技度术
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制备色谱技术
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制备色谱技术
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制备色谱技术
离心制备CTLC
离心力加速流动相，分离速度快，操作简单， 占用空间小，使用溶剂少，可反复使用，可进行梯 度洗脱，进样量大，一次分离量0.1-0.2g.
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制备色谱技术
Leabharlann Baidu
不同制备TLC方法的比较
参数
PTLC OPLC
流动相迁移方法 毛细作用 加压
薄层厚度/mm
将铺板干燥后再用展开剂展开。？
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样品检测 a. 有色物质直接观察斑点； b. 荧光物质在紫外灯下观察； c. 无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显
示暗斑； d. 喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以
用碘蒸气显色，可逆；
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常用溶剂
(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等； (2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙 醇等； (3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等； (4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等； (5)偶极作用溶剂：二氯甲烷 (6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。
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上样和展开
1. 先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；
2. 低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此
选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯
等），且溶剂极性尽可能小。
3. 样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，
5-10%；
4. 带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极
性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后
常用显色剂：
a. 硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤5
分钟，不同有机物显不同的颜色；
b. 0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，
背景淡红色；
c. 酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，
必要时150℃烤薄层；
d. 5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原
性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。
Si Cl + RNH2
Si NHR
Si Cl + RX M g
Si R
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(3) 氧化铝
碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10，常用于碳氢化 合物的分离，从碳氢化合物中除去含氧化合物。 中性氧化铝：5%乙酸处理，水提取液为pH7.5，适 用于醛、酮、醌、某些苷以及酸碱溶液中不稳定成 分如酯、内酯等化合物的分离。 酸性氧化铝：2MHCl溶液处理，水提取液pH为4-4.5， 适合于天然及合成酸性色素以及某些醛、酸的分离。
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样品收集：
a. 切割：刮刀或与真空相连的管型刮离器；
b. 回收：极性尽可能低的溶剂洗脱，通常1g
吸附剂用5mL溶剂，丙酮和氯仿常用，甲
醇因溶解硅胶及其中含有的杂质不常用。
c. 4型玻璃沙芯漏斗过滤洗脱液，再用0.2-
0.45m滤膜过滤。
d. 硅胶的黏合剂以及荧光指示剂等杂质，可
掺杂硅胶：如硝酸银处理，对不饱和烃有好 的分离效果。1%-10%的添加剂的水或丙酮溶 液与硅胶混合，稍干后110℃干燥即可。
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(2) 健合硅胶
Si OH + R3SiX
R Si OSi R
R
Si O H+RO H
Si O R
Si OH + SOCl2
Si Cl
0.5-2
0.5-2
分离长度/cm
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18
分离模式
线形
线形
组分分开方法
离线
在线
典型上样量/mg 50-150 50-300
分离谱带数
2-5
2-7
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CTLC 离心 1-4 12 环形 在线 50-500 2-12
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常规柱色谱技术： 可使用较大直径的色谱柱，更多的固定相，
用Sephadex LH-20过滤纯化。 药物分离纯化技术制备色谱分离技术
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常规制备TLC速度慢，效率低，如何提高？
加压 离心
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加压制备OPLC 弹性气垫，外压使没有气相存在，展开剂
强制流动，展开速度加快
更细的固定相颗粒、更长的薄层板 药物分离纯化技术制备色谱分离技术
常规制备薄层色谱PTLC 薄层板制备
为了增大上样量，增加了吸附剂用量。 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18 等反相健合硅胶 支撑：玻璃板或铝箔
平均25m, 5~40 m
硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P
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制备色谱技术
硅胶粒径范围影响： 1. 越细越均匀，分离度越高，但？ 2. 粒径范围宽，分离效率低，怎么办？
------薄层厚度的渐变
薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂 的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富 集，可保持较窄的谱带。
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薄层板的制作方法： 常采用湿法：平铺法和涂铺法。
硅胶 黏合剂
平铺 混合
涂铺器
自然干燥一夜
煅石膏 或羧甲基纤维素钠水溶液
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制备色谱技术
制备薄层色谱法
a. 设备简单，操作方便、分离快速、灵敏度 及分辨率高；
b. 切割谱带更加方便； c. 自动化：自动点样仪、自动程序展开仪、
薄层扫描仪、多种强制流动技术、多种联 用技术如傅立叶变换红外、拉曼、质谱等。
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因此样品量可以更大； 分离速度较慢，样品可能被不可逆吸附； 不适合小颗粒的吸附剂？ 改进方法：减压、加压等
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柱色谱常用固定相 (1)硅胶：官能团和分子的几何形状，对异构 体的分离选择性远大于其他色谱方法。
烷基<卤素（F<Cl<Br<I）<醚<硝基混合物<腈<叔胺 <酯<酮<醛<醇<酚<伯胺<酰胺<羧酸<磺酸