高效液相色谱法测定护肝宁胶囊中虎杖苷的含量

·论著·

护肝宁胶囊是由垂盆草、虎杖、丹参、灵芝4味中药组成的复方制剂，是护肝宁片的改剂型产品。具有清热利湿、益肝化淤、舒肝止痛、退黄、降低转氨酶的作用，临床用于治疗急、慢性肝炎，效果较好[1-2]。方中君药垂盆草的有效成分不明确，含量测定方法不成熟，臣药虎杖具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰之功，其主要有效成分为虎杖苷[3]，测定方法成熟。采用高效液相色谱（HPLC）法测定方中虎杖的主要有效成分虎杖苷的含量[4-12]，经方法学考察，该法简单、准确，可用于该制剂的质量控制。

1材料与方法

1．1仪器与试剂仪器为日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪、岛津SPD-10A紫外检测器、KQ-250E型医用超声波清洗器（500W，40kHz）等。试剂为虎杖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111575-200502，供含量测定用）、护肝宁胶囊（湖南德康制药股份有限公司，批号：110301、110302、110303）等，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1色谱条件色谱柱：kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈∶水（25∶75）；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：306nm；进样量：20μL。

1.2.2对照品溶液制备精密称取虎杖苷对照品3.2g，置于25mL 容量瓶中，加50%乙醇至刻度作为贮备液。精密吸取贮备液10mL 置于25mL容量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，制成每毫升含51.2μg的溶液，即为对照品溶液。

1.2.3供试品溶液制备取本品内容物约2g，研细，精密称定，置带塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，密塞，称定质量，超声处理30min，放至室温，用50%乙醇补足损失的质量，摇匀，用微孔滤膜过滤，即为供试品溶液。

按处方比例去掉虎杖，杖的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

1.2.5空白干扰实验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件进行测定，结果样品得到良好分离，阴性对照溶液在虎杖苷峰处无吸收，不干扰本品的测定。

1.2.6线性关系考察分别精密量取贮备液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0mL，置于10mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，制备成一系列浓度梯度的对照品溶液。分别精密吸取上述溶液20μL注入高效液相色谱仪，按1.2.1项色谱条件测得峰面积。以虎杖苷的含量（μg/mL）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.7精密度试验精密吸取虎杖苷对照品溶液每次20μL，按1.2.1项色谱条件重复测定6次，记录峰面积。

1.2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液20μL，分别在0、1、3、5、8、10h进样，按1.2.1项色谱条件测定，记录峰面积。

1.2.9重现性试验取供试品（批号：110302）6份，分别按1.2.3项供试品制备法制备并按照1.2.1项色谱条件测定，记录峰面积，计算含量。

1.2.10加样回收率试验取批号为110302的护肝宁胶囊约1.0g，共取6份，分别加入虎杖苷对照品，挥干溶剂，按1.2.3项供试品制备法制备，再按1.2.1项色谱条件测定含量。回收率=（实测虎杖苷总量-加入虎杖苷量）/样品中的虎杖苷含量×100%。1．2.11样品测定取3批样品（批号：110301、110302、110303）内容物，每批5份，按1.2.3项供试品制备法制备成供试品溶液，精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，按1.2.1项色谱条件测定，记录峰面积，以外标法计算样品中虎杖苷的含量。

2结果

2.1对照品、供试品和阴性对照品的HPLC图谱见图1、2、3。

2.2线性关系考察线性方程：Y=4.251×106X+2.567×103，相关

高效液相色谱法测定护肝宁胶囊中虎杖苷的含量

欧阳军（长沙市第一医院，湖南长沙410005）

【摘要】目的建立护肝宁胶囊中虎杖苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定虎杖苷含量，实验条件为色谱柱：kromasil C18柱；流动相：乙腈∶水（25∶75）；检测波长：306nm；流速：1.0mL/min。结果虎杖苷浓度线性范围为12.8～102.4μg/mL，相关系数（r）=0.9999，回收率为99.04％，相对标准偏差（RSD）为1.02％。结论该法简便、可靠、重现性较好，能起到控制护肝宁胶囊中虎杖苷含量的作用。

【关键词】色谱法，高压液相；胶囊；虎杖；护肝宁胶囊；含量测定

doi：10.3969/j.issn.1009-5519.2013.01.004文献标识码：A文章编号：1009-5519（2013）01-0009-02

Determination of polydatin in Huganning Capsules by HPLC Ouyang Jun（Changsha First Hospital，Changsha，Hunan 410005，China）

【Abstract】Objective To establish a HPLC method for the determination of polydatin in Huganning Capsules.Methods Polydatin in Huganning Capsules was determined by HPLC，using kromasil C18column as the chromatographic column，acetonitrile-water（25∶75）as the mobile phase，the detection wavelength was306nm and the flow rate was1.0mL/min.Results The linear range of polydatin was12.8-102.4μg/mL.The correlation coefficient（r）was0.9999.The average recovery of polydatin was99.04％and RSD was1.02%.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and repreatable，which can be used for the determination of polydatin in Huganning Capsules.

【Key words】Chromatography，high pressure liquid；Capsules；Polygonum cuspidatum；Huganning Capsules；Determination