--分子生物学1PPT课件
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模板： 亲代DNA单链 材料： dNTP 酶： DNA polymerase 等 方式： 半保留复制
不连续复制 符合碱基配对原则 方向： 模板3’－5’ 新链5’－3’ 引物： 需要
DNA sequencing
DNA 单链模板 dNTP 荧光标记的ddNTP DNA pol. 引物
DNA测序图谱
UAU 29.8(22) UAC 23.0(17) UAA 5.4( 4) UAG 0.0( 0) CAU 4.1( 3) CAC 0.0( 0) CAA 1.4( 1) CAG 13.5(10) AAU 59.5(44) AAC 32.5(24) AAA 46.0(34) AAG 18.9(14) GAU 33.8(25) GAC 2.7( 2) GAA 29.8(22) GAG 14.9(11)
End
Tail
3
3’-端非翻译区
从mRNA 5-侧起始密码子AUG到3-侧终止密 码子之间的核苷酸序列，称为开放阅读框架 (open reading frame, ORF)。
Reverse transcription
( RT,反转录）
模板： RNA单链 材料： dNTP 酶： Reverse transcriptase 方式： 符合碱基配对原则
现代分子生物学
Modern Molecular Biology
王艳林 fzswangyl@
Office: S-2706
1. 基因
遗传学中的一个功能单位； 染色体DNA上的一个功能片段； 指导蛋白多肽或RNA分子合成的模板； 结构上含启动子，转录调控区，编码区和转录终止序列等。
OD260/OD280 比值可用于分析核酸的纯度
纯DNA溶液： OD260/OD280 为1.8 纯RNA溶液： OD260/OD280 为2.0
5、 DNA的Tm值
Tm：能使50％DNA样品变性（解链）所需的温度
DNA变性与复性/核酸分子杂 交
核酸杂交可用于目的DNA的检测
6、DNA Replication（复制）
新链5’－3’ 转录后加工：需要
rRNA 转录后加工
tRNA转录后加工
一、mRNA的转录后加工
1. 在mRNA的5`末端加上帽子结构; 2. 在mRNA的3`末端加上PolyA尾巴; 3. 剪接: 真核的结构基因为断裂基因，由外显子和内含子交替排列而成。
它转录出的初始产物称为hnRNA，其分子中的内含子将被剪切掉, 外 显子则拼接成成熟的mRNA分子;
UGU 12.2( 9) UGC 0.0( 0) UGA 0.0( 0) UGG 2.7( 2) CGU 1.4( 1) CGC 0.0( 0) CGA 0.0( 0) CGG 0.0( 0) AGU 17.6(13) AGC 9.5( 7) AGA 4.1( 3) AGG 1.4( 1) GGU 33.8(25) GGC 5.4( 4) GGA 10.8( 8) GGG 14.9(11)
20 years ago ……
ACTGACTG ACTG ACTG ACTG ACTG ACTG ACTG
DNA sequencing
7、Transcription（转录）
模板: 单链DNA 原料：NTP（A，U，C，G） 酶： RNA polymerase，等 方式：需要启动子与终止子
碱基配对原则 方向： 模板3’－5’
DNA double helix 有多种类型
核酸分子内部的 高级结构
RNA的高级结构
4、核酸的光吸收特征
核酸分子对紫外光具有强吸收，260nm 处最强
OD260 可用于测定核酸浓度
在光径为1cm 时：
1 OD260 相当于 50ug/ml 双链DNA 40ug/ml 单链DNA/RNA 20ug/ml 寡聚核苷酸
2. 遗传学中心法则
3. DNA分子结构
Watson 和 Crick
Photograph Fifty-One
Rosalind Franklin
Maurice Wilkins
DNA Double Helix
DNA 双螺旋特征： 两条DNA单链反向平行； 两条单链之间碱基配对互补： A－T； G－C； 绕轴螺旋式盘绕 维系helix 结构的因素： 碱基配对形成的H键 A－T 2 个H键 （H Bond） G－C 3 个H键 碱基堆积力 (Stacking)
UCU 37.9(28) UCC 6.8( 5) UCA 35.2(26) UCG 9.5( 7) CCU 6.8( 5) CCC 0.0( 0) CCA 13.5(10) CCG 6.8( 5) ACU 36.5(27) ACC 27.1(20) ACA 16.2(12) ACG 13.5(10) GCU 29.8(22) GCC 9.5( 7) GCA 46.0(34) GCG 24.4(18)
UUU 25.7(19) UUC 4.1( 3) UUA 17.6(13) UUG 23.0(17) CUU 24.4(18) CUC 1.4( 1) CUA 0.0( 0) CUG 20.3(15) AUU 39.2(29) AUC 8.1( 6) AUA 8.1( 6) AUG 31.1(23) GUU 20.3(15) GUC 4.1( 3) GUA 16.2(12) GUG 8.1( 6)
Roberts
Sharp
1993年生理学与医学诺贝尔奖
mRNA 剪接
精胺氧化酶（SM构： 7’-甲基鸟嘌呤
mRNA的3`末端加上PolyA尾巴
成熟mRNA的基本结构
Start of genetic message Cap
5
5’-端非翻译区 开放阅读框架
U-A; A-T；C–G 方向： 模板3’－5’
新链5’－3’ 引物： 需要
cDNA
Translation (翻译）：蛋白质合成
遗传密码子表
稀有密码子 （rare codons）
Escherichia coli O157:H45 [gbbct]: 4 CDS's (739 codons) fields: [triplet] [frequency: per thousand] ([number])
不连续复制 符合碱基配对原则 方向： 模板3’－5’ 新链5’－3’ 引物： 需要
DNA sequencing
DNA 单链模板 dNTP 荧光标记的ddNTP DNA pol. 引物
DNA测序图谱
UAU 29.8(22) UAC 23.0(17) UAA 5.4( 4) UAG 0.0( 0) CAU 4.1( 3) CAC 0.0( 0) CAA 1.4( 1) CAG 13.5(10) AAU 59.5(44) AAC 32.5(24) AAA 46.0(34) AAG 18.9(14) GAU 33.8(25) GAC 2.7( 2) GAA 29.8(22) GAG 14.9(11)
End
Tail
3
3’-端非翻译区
从mRNA 5-侧起始密码子AUG到3-侧终止密 码子之间的核苷酸序列，称为开放阅读框架 (open reading frame, ORF)。
Reverse transcription
( RT,反转录）
模板： RNA单链 材料： dNTP 酶： Reverse transcriptase 方式： 符合碱基配对原则
现代分子生物学
Modern Molecular Biology
王艳林 fzswangyl@
Office: S-2706
1. 基因
遗传学中的一个功能单位； 染色体DNA上的一个功能片段； 指导蛋白多肽或RNA分子合成的模板； 结构上含启动子，转录调控区，编码区和转录终止序列等。
OD260/OD280 比值可用于分析核酸的纯度
纯DNA溶液： OD260/OD280 为1.8 纯RNA溶液： OD260/OD280 为2.0
5、 DNA的Tm值
Tm：能使50％DNA样品变性（解链）所需的温度
DNA变性与复性/核酸分子杂 交
核酸杂交可用于目的DNA的检测
6、DNA Replication（复制）
新链5’－3’ 转录后加工：需要
rRNA 转录后加工
tRNA转录后加工
一、mRNA的转录后加工
1. 在mRNA的5`末端加上帽子结构; 2. 在mRNA的3`末端加上PolyA尾巴; 3. 剪接: 真核的结构基因为断裂基因，由外显子和内含子交替排列而成。
它转录出的初始产物称为hnRNA，其分子中的内含子将被剪切掉, 外 显子则拼接成成熟的mRNA分子;
UGU 12.2( 9) UGC 0.0( 0) UGA 0.0( 0) UGG 2.7( 2) CGU 1.4( 1) CGC 0.0( 0) CGA 0.0( 0) CGG 0.0( 0) AGU 17.6(13) AGC 9.5( 7) AGA 4.1( 3) AGG 1.4( 1) GGU 33.8(25) GGC 5.4( 4) GGA 10.8( 8) GGG 14.9(11)
20 years ago ……
ACTGACTG ACTG ACTG ACTG ACTG ACTG ACTG
DNA sequencing
7、Transcription（转录）
模板: 单链DNA 原料：NTP（A，U，C，G） 酶： RNA polymerase，等 方式：需要启动子与终止子
碱基配对原则 方向： 模板3’－5’
DNA double helix 有多种类型
核酸分子内部的 高级结构
RNA的高级结构
4、核酸的光吸收特征
核酸分子对紫外光具有强吸收，260nm 处最强
OD260 可用于测定核酸浓度
在光径为1cm 时：
1 OD260 相当于 50ug/ml 双链DNA 40ug/ml 单链DNA/RNA 20ug/ml 寡聚核苷酸
2. 遗传学中心法则
3. DNA分子结构
Watson 和 Crick
Photograph Fifty-One
Rosalind Franklin
Maurice Wilkins
DNA Double Helix
DNA 双螺旋特征： 两条DNA单链反向平行； 两条单链之间碱基配对互补： A－T； G－C； 绕轴螺旋式盘绕 维系helix 结构的因素： 碱基配对形成的H键 A－T 2 个H键 （H Bond） G－C 3 个H键 碱基堆积力 (Stacking)
UCU 37.9(28) UCC 6.8( 5) UCA 35.2(26) UCG 9.5( 7) CCU 6.8( 5) CCC 0.0( 0) CCA 13.5(10) CCG 6.8( 5) ACU 36.5(27) ACC 27.1(20) ACA 16.2(12) ACG 13.5(10) GCU 29.8(22) GCC 9.5( 7) GCA 46.0(34) GCG 24.4(18)
UUU 25.7(19) UUC 4.1( 3) UUA 17.6(13) UUG 23.0(17) CUU 24.4(18) CUC 1.4( 1) CUA 0.0( 0) CUG 20.3(15) AUU 39.2(29) AUC 8.1( 6) AUA 8.1( 6) AUG 31.1(23) GUU 20.3(15) GUC 4.1( 3) GUA 16.2(12) GUG 8.1( 6)
Roberts
Sharp
1993年生理学与医学诺贝尔奖
mRNA 剪接
精胺氧化酶（SM构： 7’-甲基鸟嘌呤
mRNA的3`末端加上PolyA尾巴
成熟mRNA的基本结构
Start of genetic message Cap
5
5’-端非翻译区 开放阅读框架
U-A; A-T；C–G 方向： 模板3’－5’
新链5’－3’ 引物： 需要
cDNA
Translation (翻译）：蛋白质合成
遗传密码子表
稀有密码子 （rare codons）
Escherichia coli O157:H45 [gbbct]: 4 CDS's (739 codons) fields: [triplet] [frequency: per thousand] ([number])