猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离鉴定
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Key words: Porcine contagious pleurneumonia; PCR detection; Drug susceptibi1ity test; Mouse
pathogenicity experiment
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的 一种急性致死性呼吸道传染病，是威胁各国养猪业 的最重要的细菌病之一，其主要特征为出血性纤维 素性胸膜肺炎和纤维素性坏死性胸膜肺炎。胸膜肺 炎放线杆菌划分为巴氏杆菌科放线杆菌属，革兰氏 阴性小杆菌，有荚膜。现已鉴定的APP有18个血清 型，同一猪场可能存在不同血清型，血清型1型、5
1材料与方法
1. 1材料 1.1.1病料的来源及采集病料采自新疆奇台和昌 吉某猪场死亡的育肥猪。无菌采集肺脏、胸腔积液、 淋巴结等组织病料。 1.1.2标准菌株猪传染性胸膜肺炎标准菌株（血清 1型、2型、3型、5型、7型）和金黄色葡萄球菌标准 菌株，均购自中国兽医药品监察所。 1.1.3培养基与试剂TSA培养基和BHI培养基，均 购自BD公司；NAD,购自Roche公司；革兰氏染液和 微生物生化鉴定管，购自杭州天和微牛:物有限公司；
文章编号：1672-9692(2019)06-0009-06
Isolation and Identification of Actinobaccilus pleuropneumoniae serotype 5
Zheng Pei, Zhang Fei, He Sun*
(Tecon Biological Co. , Ltd. .Xingjiang Urumqi 830011)
收稿日期：2019-04-27 作者简介：郑培(1982-),女，预防兽医学专业，高级兽医师，动物细菌疫苗研发。 通讯作者：贺笋(1980-),男，预防兽医学硕士，高级兽医师，动物疫苗研发。
10
现代畜牧兽医
2019年第6期
替米wenku.baidu.com星等药物控制疾病，效果并不明显。同月在 新疆昌吉某猪场育肥舍也出现育肥猪急性死亡，临 床症状症状与奇台猪场相似。初步怀疑为猪传染性 胸膜肺炎，采集病料，进行细菌的分离鉴定。本试 验通过临床剖检、PCR检测、病理学等手段进行确 诊，分离获得APP血清5型菌株，并进行了药敏试验 和动物致病性试验，为该疾病的诊断和防控提供依 据。
2019年第6期
郑培:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离鉴定
9
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌
血清5型的分离鉴定
郑培，张飞，贺笋*
(天康生物股份有限公司，新疆乌鲁木齐830011)
摘要：新疆奇台和昌吉市规模化猪场发生育肥猪急性死亡，疑似猪传染性胸膜肺炎，采集病料进行细菌的分
离培养、PCR检测、药敏试验及小鼠致病性试验。结果分离获得猪胸膜肺炎放线杆菌奇台株2株，昌吉株1株。
TaqDNA 聚合酶、dNTPs、DL-2000 Marker,均购自 Thermo 公司。 1.1.4 引物 参见肖国胜等⑶、Stein A等⑷、 Jessing SG等⑸、Zhou L等同合成APP通用型鉴定 引物和APP血清1型、2型、3型、5型和7型分型鉴 定引物，如表1所示，由北京博迈德生物技术有限 公司合成。 1.1.5试验动物18〜22 g健康的雌性昆明小鼠， 购自新疆医科大学实验动物中心。 1.2方法 1.2.1临床症状和剖检观察通过观察临床症状和 剖检病死猪，进行初步诊断。 1.2.2细菌分离 无菌采集肺脏、胸腔积液、淋巴 结等病料，分别划线于TSA培养基和含10 Pg/mL NAD的TSA培养基，置37 °C培养18〜24 h,观察细 菌生长状况及菌落形态，并进行革兰氏染色镜检。 挑单菌落划线接种于TSA培养基，垂直于APP划线再 划…条金黄色葡萄球菌接种线，置37 °C培养24 h, 观察金黄色葡萄球菌周围是否存在卫星现象。挑取
型、9型和11型通常被认为强毒力菌株“切。不同血 清型之间的交叉保护力较弱，抗生物治疗效果有限， 且大量抗生素的使用，也会致使耐药菌株产生，致 使该疾病防控困难。
2018年9月中旬，新疆奇台某1 500头猪场，育 肥猪突发急性死亡，半个月内，死亡100头。临床 表现为患病猪食欲废绝，体温升高，呼吸困难，急 性死亡猪口鼻流出带血的红色泡沫。使用氟苯尼考、
PCR分型鉴定均为血清5型。致病性试验显示，分离株均可致死小鼠。对氟苯尼考、头胞■塞咲、恩诺沙星等抗生素
敏感。结论，确诊病原为猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型。血清5型已成为新疆地区致死率较高的流行血清型。
关键词：猪传染性胸膜肺炎;PCR鉴定；药敏试验；动物致病性试验
中图分类号：S852.62
文献标识码：B
Abstract: The fattening pigs acute died were happened in pig farms of Xinjiang Qi tai and Changji cities. PCR detection, antimicrobial susceptibility tests, and mouse pathogenicity experi ment were con ducted. As a result, 2 stra ins were isolated from Qitai farm, and 1 stra in from Changji farm. The result of PCR typing identification showed al 1 isolated strains were actinoba cillus pleuropneumoniae serotype 5. The isolate strains were sensitive to florfenicol, cefotaxime and enrofloxacin, Conclusion, combined with clinical symptoms, pathological necropsy and labora tory diagnosis, The strains confirmed as Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 and serotype 5 has become a popular serotype in Xinjiang.
pathogenicity experiment
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的 一种急性致死性呼吸道传染病，是威胁各国养猪业 的最重要的细菌病之一，其主要特征为出血性纤维 素性胸膜肺炎和纤维素性坏死性胸膜肺炎。胸膜肺 炎放线杆菌划分为巴氏杆菌科放线杆菌属，革兰氏 阴性小杆菌，有荚膜。现已鉴定的APP有18个血清 型，同一猪场可能存在不同血清型，血清型1型、5
1材料与方法
1. 1材料 1.1.1病料的来源及采集病料采自新疆奇台和昌 吉某猪场死亡的育肥猪。无菌采集肺脏、胸腔积液、 淋巴结等组织病料。 1.1.2标准菌株猪传染性胸膜肺炎标准菌株（血清 1型、2型、3型、5型、7型）和金黄色葡萄球菌标准 菌株，均购自中国兽医药品监察所。 1.1.3培养基与试剂TSA培养基和BHI培养基，均 购自BD公司；NAD,购自Roche公司；革兰氏染液和 微生物生化鉴定管，购自杭州天和微牛:物有限公司；
文章编号：1672-9692(2019)06-0009-06
Isolation and Identification of Actinobaccilus pleuropneumoniae serotype 5
Zheng Pei, Zhang Fei, He Sun*
(Tecon Biological Co. , Ltd. .Xingjiang Urumqi 830011)
收稿日期：2019-04-27 作者简介：郑培(1982-),女，预防兽医学专业，高级兽医师，动物细菌疫苗研发。 通讯作者：贺笋(1980-),男，预防兽医学硕士，高级兽医师，动物疫苗研发。
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现代畜牧兽医
2019年第6期
替米wenku.baidu.com星等药物控制疾病，效果并不明显。同月在 新疆昌吉某猪场育肥舍也出现育肥猪急性死亡，临 床症状症状与奇台猪场相似。初步怀疑为猪传染性 胸膜肺炎，采集病料，进行细菌的分离鉴定。本试 验通过临床剖检、PCR检测、病理学等手段进行确 诊，分离获得APP血清5型菌株，并进行了药敏试验 和动物致病性试验，为该疾病的诊断和防控提供依 据。
2019年第6期
郑培:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5型的分离鉴定
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌
血清5型的分离鉴定
郑培，张飞，贺笋*
(天康生物股份有限公司，新疆乌鲁木齐830011)
摘要：新疆奇台和昌吉市规模化猪场发生育肥猪急性死亡，疑似猪传染性胸膜肺炎，采集病料进行细菌的分
离培养、PCR检测、药敏试验及小鼠致病性试验。结果分离获得猪胸膜肺炎放线杆菌奇台株2株，昌吉株1株。
TaqDNA 聚合酶、dNTPs、DL-2000 Marker,均购自 Thermo 公司。 1.1.4 引物 参见肖国胜等⑶、Stein A等⑷、 Jessing SG等⑸、Zhou L等同合成APP通用型鉴定 引物和APP血清1型、2型、3型、5型和7型分型鉴 定引物，如表1所示，由北京博迈德生物技术有限 公司合成。 1.1.5试验动物18〜22 g健康的雌性昆明小鼠， 购自新疆医科大学实验动物中心。 1.2方法 1.2.1临床症状和剖检观察通过观察临床症状和 剖检病死猪，进行初步诊断。 1.2.2细菌分离 无菌采集肺脏、胸腔积液、淋巴 结等病料，分别划线于TSA培养基和含10 Pg/mL NAD的TSA培养基，置37 °C培养18〜24 h,观察细 菌生长状况及菌落形态，并进行革兰氏染色镜检。 挑单菌落划线接种于TSA培养基，垂直于APP划线再 划…条金黄色葡萄球菌接种线，置37 °C培养24 h, 观察金黄色葡萄球菌周围是否存在卫星现象。挑取
型、9型和11型通常被认为强毒力菌株“切。不同血 清型之间的交叉保护力较弱，抗生物治疗效果有限， 且大量抗生素的使用，也会致使耐药菌株产生，致 使该疾病防控困难。
2018年9月中旬，新疆奇台某1 500头猪场，育 肥猪突发急性死亡，半个月内，死亡100头。临床 表现为患病猪食欲废绝，体温升高，呼吸困难，急 性死亡猪口鼻流出带血的红色泡沫。使用氟苯尼考、
PCR分型鉴定均为血清5型。致病性试验显示，分离株均可致死小鼠。对氟苯尼考、头胞■塞咲、恩诺沙星等抗生素
敏感。结论，确诊病原为猪胸膜肺炎放线杆菌血清5型。血清5型已成为新疆地区致死率较高的流行血清型。
关键词：猪传染性胸膜肺炎;PCR鉴定；药敏试验；动物致病性试验
中图分类号：S852.62
文献标识码：B
Abstract: The fattening pigs acute died were happened in pig farms of Xinjiang Qi tai and Changji cities. PCR detection, antimicrobial susceptibility tests, and mouse pathogenicity experi ment were con ducted. As a result, 2 stra ins were isolated from Qitai farm, and 1 stra in from Changji farm. The result of PCR typing identification showed al 1 isolated strains were actinoba cillus pleuropneumoniae serotype 5. The isolate strains were sensitive to florfenicol, cefotaxime and enrofloxacin, Conclusion, combined with clinical symptoms, pathological necropsy and labora tory diagnosis, The strains confirmed as Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 and serotype 5 has become a popular serotype in Xinjiang.