植物病理学实习报告

植物病理学教学实习报告专业：森林与观赏植物保护

姓名：孙赛金

学号：092001110

日期：2012年6月1日

目录

实习一培养基的制作及灭菌

实习二植物病原菌的分离培养

实习三植物病害的接种

实习四林木种子的病理检验

实习五野外植物病害调查报告

实习六参观江苏省检验检疫局报告实习七：实习总结报告

实习一培养基的制作及灭菌

一.目的要求

1.了解培养真菌及细菌最常用的两种培养基制作的方法和选择的不同培养基的意义。

2.了解培养基和实验室常用玻璃器皿灭菌方法的要领和原理。

二.内容步骤

1.培养基的制作：

制作马铃薯、葡萄糖（蔗糖）、琼脂培养基（P、D、A培养基）和牛肉汁、蛋白胨、琼脂培养基。

（1）马铃薯、蔗糖、琼脂培养基的配制：

去皮马铃薯 100g

蔗糖 10g

琼脂 9g

水 500ml

按组为单位，每组500ml。将马铃薯切成片，加足水煮沸半小时，用纱布滤去马铃薯渣，滤液内加入糖和琼脂完全溶化，并加入适量的水保持原体积，分装在试管中，12毫升30管。分装时注意不要将培养基滴到试管口上，加棉塞等待灭菌。

该培养基的营养成份适应大多数真菌的生长，且配置后呈微酸性，所以也无需调节PH值。（2）牛肉汁、蛋白胨、琼脂培养基的制作：

牛肉浸膏 1.8g

蛋白胨 6g

琼脂 10.8g

水 600ml

按组为单位，每组600ml。在600ml水中加入一定量的牛肉浸膏和蛋白胨，溶化后用0.1N NaOH溶液和0.1N HCL溶液试纸3L酸度计指示下，调节PH值到微碱性7.2~7.4。加入琼脂，溶化后分装在试管中加棉塞等待灭菌。分装还是12毫升的30管。

2.灭菌

（1）干热灭菌：

是利用热空气杀死微生物的作用。适用于干热灭菌的物品有玻璃器皿等。灭菌之前用纸包好，放在烘箱内。调节温度，是温度上升到160~180摄氏度之间，保持一小时。注意：不要超过180摄氏度，以免使包装纸燃烧。物品要清洁、干燥，以防器皿破裂和以后难以洗涤；灭菌过程中不得开烘箱门，结束时待温度自然下降至50摄氏度一下，再开门取物，否则器皿容易破裂；具橡胶部件的仪器不得以此法灭菌。

（2）高压蒸汽灭菌：

主要利用穿透力强的高温水蒸汽杀死微生物。待灭菌物品用纸或其它东西密封，放入锅内。灭菌锅在排除了空气的情况下，水汽的温度会超过100摄氏度。当压力在两个大气压时蒸汽可达121摄氏度。此种压力保持20~30分钟可基本上杀死一切微生物及孢子。如进行土壤灭菌，因其孔隙多，需2小时才行。

高压蒸汽灭菌的步骤下：

（1）锅内加水到止水点。

（2）将物品放入灭菌锅内，盖上盖子并拧紧螺丝。

（3）下面加热，待指针到5磅时，打开气门排除空气，标志是见到白色蒸汽有力冲出为止。

（4）关闭气门继续加热，压力上升到15磅，减小火力，保持在15磅压力下20~30分钟。（5）灭火。打开排气门排除蒸汽，使压力约在5分钟内降到零。启盖、取物。做斜面的趁热将试管斜靠在别的物体上，冷凝后即成斜面培养基。

三作业

1.配置两种培养基并灭菌，制作灭菌水，留给下面实验用。

2.哪种培养基要调节PH值？

牛肉汁、蛋白胨、琼脂培养基需要调节PH值

马铃薯、蔗糖、琼脂培养基的配制

实习二植物病原菌的分离培养

一．目的要求：

1.了解植物病原真菌和细菌分类培养的一般培养，理解和掌握无菌操作的要领。将人们所需要的病原菌与寄住或杂菌分开，并供给适当的环境，使它们生长繁殖成为纯培养的工作。

二．内容步骤：

1.准备工作：分离培养一般在无菌操作中或超净工作台上进行，但也可以在洁净而空气宁静的房间内进行。为避免尘埃，可以用喷雾等办法使空气略加净化。工作是桌上铺一块湿纱布，将实验所用的器皿放在纱布上。

2.材料的选择：分离能否成功，与分离材料的选择有很大关系。一般从感病组织的边缘取材，可以减少腐生性微生物污染的机会，并且微生物也处于较为活跃的状态而容易生长。

3.组织的表面消毒：在分离工作中，一适当的消毒剂清除或减少病组织表面的腐生菌，分离得到的纯培养的机率就大。最常用的表面消毒剂是千分之一升汞溶液。一般配成原液，使用时再稀释。原配的配方如下：

升汞 20克

浓盐酸 100毫升

使用时取5毫升原液，加水995毫升即可。消毒时为了使组织全部在消毒液中侵透，往往将病组织在70 %酒精中浸一下，取出后立即投入升汞消毒液中，这样组织表面就不会有气泡存在，然后再以无菌操作在无菌水中换洗三次。

4.分离方法：分离培养的方法一般分为组织分离和稀释分离两种，细菌以及能产生大量孢子的真菌用稀释分离法，一般真菌病害用组织分离法。本次实习稀释分离所用的材料是杉细菌病，组织分离所用材料是马褂木炭疽病叶子。

（1）.稀释分离的具体步骤：

A.取灭菌过的培养皿三套，小心平放在湿纱布上，再在皿侧面编好号，并注明日期，姓名，班级和分离材料。

B.用灭菌的吸管以无菌操作的方法吸取灭菌水，小心向每皿注入0.5毫升。

C.用消毒的刀切取病健交界处5*5毫米组织一块，在70%酒精中浸泡一下后，立即在

0.1%升汞中消毒2分钟，然后在无菌水中无菌操作3次，第一次5分钟，然后每次2—3分钟。

D.将洗过的病组织移入第一皿的灭菌水中，用灭过菌的镊子将病组织捣碎，静置5分钟，等病组织中的细菌扩散到灭菌水中。

E.用灭菌的接种环从第一个培养皿中沾取菌液在第二个中洗下菌液，如此连续三次，再从第二皿中挑三次到第三皿中，这样细菌就被大大稀释了。

F.将三管经过水浴化的牛肉汁培养基冷却至45度左右，以无菌操作分别侵入以上三个培养皿中，每倒一皿立即轻轻摇动培养皿，使其在凝固前能与细菌充分混合并平铺在皿底上。等培养基完全凝固，翻转培养基底朝上，放到26——30度的温箱中培养。

G.二.三日后，长出菌落，理想的结果是第三皿中有为数不多且分布均匀的菌落出现。以无菌操作法，用接种环将菌落移植到斜面上，待菌落长成即为细菌的纯培养菌种了。（2）组织分离法的步骤：

A.取灭菌培养皿一套，在皿侧面编好号，并注明日期，姓名，班级和分离材料。

B.取一管经过水浴后的马铃薯培养基以无菌操作法倾入皿内轻轻摇晃，使分布均匀成