反向间接血凝试验

1、用反向间接血凝试验进行仔猪大肠埃希氏菌病三价（k88,k99,987P）灭活苗的效力检验1.1抗体致敏绵羊红血球：由中国兽医药品监察所提供

1.2方法

将疫苗放－20℃中反复冻融8次。每次融化后充分振荡，使三种纤毛抗原释放于液体中，最后一次融化后经2000r/min离心20分钟，除去菌体和铝胶，得到含有三种抗原的上清液。测定上清液中三种纤毛抗原的RIHA效价。取0.2ml上清液加到装有0.8ml稀释液即1%健康兔血清生理盐水（1%NRS）的小试管中，然后作倍比稀释，既5×、10×、20×……1280×,每批上清液占3排管，分别加等量的0.75%三种纤毛抗原致敏血球。同时设对照管，（1）抗体致敏血球对照：0.1ml 0.75%抗体致敏绵阳红血球+0.1ml 1%健康兔血清生理盐水；

（2）血球对照：0.1ml 0.75%健康兔血清致敏红血球+0.1ml 1%健康兔血清生理盐水；（3）抗原对照：0.1ml 1﹕5稀释的上清液+0.1ml 0.75%健康兔血清致敏红血球。

试验术如下表。

各种成分加完后，充分摇匀，置室温90分钟，结果判定：按照红血球在管底的凝集程度，分别计为“++++”、“+++”、“++”、“+”、“±”、“－”。对照管无凝集现象。

“++++”――红血球凝集成坚实的凝块。

“+++”――红血球凝集成平铺管底，边缘卷边或锯齿状。

“++”――红血球凝集成平铺管底，面积比上者大。

“+”――红血球大部分沉于管底，周边有少量凝集。

“±”――红细胞凝集于管底，中间出现空心。

“－”――红细胞沉于管底，周边光滑。

以出现“++”的样品最大稀释度数作为样品的RIHA效价。