滑膜肉瘤的分子诊断进展
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困难 。 目前 ， 内滑膜 肉瘤 的病 理诊断 主要建立 在 临 国
胞遗传学方法在任何恶性周围神经鞘膜瘤及纤维肉 瘤 中均未 检测 到 ｔ １） ｌ ．ｑ １ １ Ｓ Ｔ Ｓ Ｘ融 （ ８（ １ ；ｌ ． 及 Ｙ — Ｓ ｘ； ｐ ２ ２ 合 基 因…２ ］ 。因此 ， 目前 比较 公 认 的 看 法是 ：Ｘ１） ｔ ；８ （
根 据 杂 交 靶 的差 异 ，ＩＨ 可 以分 为 中期 ＦＳ ＦＳ ＩＨ 与间期 ＦＳ 中期 ＦＳ ＩＨ。 ＩＨ的杂 交靶 是 中期 染 色体 ， 与
显带技术结合 ，可以将信号定位于某条染色体的某 个 区带 。但是 ， 在细胞 周 期 中 ， 多数 细胞 的绝 大部 大 分 时间处 于间期 ，获 得 间期 细胞要 比获得 中期染 色 体容易得多， 间期 ＦＳ ＩＨ的应用空间更大。初期的间
固定 、石 蜡包 埋 组织 中提 取全 基 因组 Ｄ Ａ非 常 困 Ｎ
易位及 Ｓ Ｔ ＳＸ融合基因。Ｌｄｎｉ 对 ０ Ｓｌｖｎ Ｙ —Ｓ ａａｙ㈣ ’ｕ ｉ ｌａ 等 的结果 提 出了强烈 质疑 ，因为依据 组织形 态学 及
免疫组化染色结果不能有效地鉴别滑膜肉瘤与纤维 肉瘤、 恶性周围神经鞘膜瘤 ， 因此 Ｏ Ｓｌｖｎ ’ｕ ｉ 等选择 ｌａ 的 “ 维 肉瘤 和恶性 周 围神 经鞘 膜瘤 ”可能 就是 滑 纤 膜肉瘤 ；另外 ，不能排除 Ｏ Ｓｌｖｎ ’ｕ ｉ 等研究 中 Ｐ Ｒ ｌａ Ｃ
（ 天津 医科 大学肿瘤 医 院病 理科 ， 天津 市肿瘤 防治重 点实验 室 ， 津 ３０ ６ ） 天 ０ ００
［ 关键词 】 滑膜 肉瘤 ； 诊断 ； 染色体 易位 ； 融合基 因； 荧光原位杂交 ； 逆转 录一 聚合酶链反应 ［ 中图分类号］ ７ ８ Ｒ ３． ５ ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号 ］０ ６ ８４ （０ ９ ０ — ７ ４ ０ １０ — １７ ２０ ）４ ０ ３ — ４
理 是 使 用两 种 颜 色 的荧 光分 别 标 记 １ 染 色体 和 ８号
方法快速、 简洁、 背景干扰很少 ， 但杂交信号较弱。 间 接 标记法 是采用 一些 中间分 子标记 探 针 ．杂交 后再 用 中间分 子对应 的亲和物 或抗 体进 行 检测 。 目前 采 用 的 中间 分子 有 ： 物 素 、 高辛 配 基 、一 生 地 ２ 乙酰 氨基
规的缺 口平移法 、随机引物法 、Ｃ Ｐ Ｒ或 Ｒ Ａ体外转 Ｎ
录法进 行标记 ， 最为 常用 。 故 根据标 记荧 光素 的产 色 数 量 ，ＩＨ可 以分为单 色 、 色 和多色 ＦＳ ＦＳ 双 ＩＨ。 目前 ，
许多 ＦＳ ＩＨ探针 已经商 品化 ， 大大加速 了 ＦＳ ＩＨ在临 床诊断 中的应 用 。
染 色 体 计 数 探 针 ｃｒｍｏｏ ｅｅｕ ｒｔｎｐｏｅ ｈｏ ｓｍ ｎｍｅａｏ ｒｂ， ｉ Ｃ Ｐ ， 用 于 检 测 非整 倍 体 。 （） 点 特 异 性 探 针 Ｅ ）常 ３位 （ ｃｓ ｐｃ ｃｄｎｉｅ ｒ ｅＬ Ｉ， １ ｕ ｅｉ ｅｔ ｒ ｏ ，Ｓ）又称 单一 序列 探 ｏ ｓ ｆｉ ｆ ｐｂ ｉ ｉ 针 （ｉｇｅ ｅｕｎｅｐｏｅ ， 用 于 检 测 特 异 性 染 色 ｓ ｌｓｑｅｃ ｒｂ ）常 ｎ 体易位 和基 因异常 。探 针 的荧光标 记 包括 直接 标记 法和 间接标记 法 。直接 标记 是将 荧光 分子 直 接标记 于探针 上 ， 杂交 后可 直接 在荧光 显微 镜下检 测 。 这种
异 性 探 针 （ｅ ｔ ｍ ｒ ｓｅｉｃｉｅ ｔ ｅ ｒｂ ） 又 称 ｃ ｎｒ ｅｅ ｐ ｃ ｎｉ ｒ ｏ ｅ ， ｏ ｉ ｆ ｄ ｆ ｐ ｉ
体更易进人细胞核 ， 使用蛋 白水解酶如蛋 白酶 Ｋ 胃 、 蛋白酶消化标本 ， 通过去除细胞浆和部分核蛋白， 可 增加探针、 抗体与靶 Ｄ Ａ的结合机会而产生良好 的 Ｎ 杂交信号 。近来 ，一些研 究者也尝试 在组织芯片 （ ｓ ｅ ｃｏｒ ｙ 上 进 行 ＦＳ 取 得 了较 理 想 的效 ｔｓ ｒａｒ ） ｉ ｕ ｍｉ ａ ＩＨ，
基金项 目： 国家 自然科学基金资助项 目（０ ７ ０ ７ ３５２９ ） 作者简介 ： 孙燕（ ９ ８ ）女 ， 师 ， 士， 究方 向： １７一 ， 讲 博 研 肿瘤病理 ； 孙保存 （ ９０ ） 男 ， ， １５ 一 ， 教授 硕士 ， 博士生导师 ， 研究方向 ： 肿瘤病理。
难 ，难 以在常规病理诊断工作中推广应用 。因此 ， ＦＳ 和 Ｒ — Ｃ ＩＨ Ｔ Ｐ Ｒ检 测 ｔ ；８（１ ．；ｌ ． 及其 导 致 （ １） ２ｑ ２ Ｘ ｐ１ １） 的 ｓ Ｔ ＳＸ融合转录体有望成为诊断滑膜 肉瘤的 Ｙ —Ｓ
滑 膜 肉瘤 （ｙ ｏｉ ｒｏ ） 占软组 织 肉瘤 的 ｓｎ ｖａ ｓ ｃｍａ 约 ｌａ
污染 的可 能 ， 因为他 们不仅 在 滑膜 肉瘤 、 恶性 周围神 经鞘膜 瘤 和纤 维 肉瘤 中检测 到 Ｓ Ｔ ＳＸ， Ｙ — Ｓ 而且 在先 天性纤 维 肉瘤 、恶 性纤维 组 织细胞 瘤及 神经纤 维瘤 等肿 瘤 中也 检 测 到 Ｓ Ｔ ＳＸ。但 是 均 未使 用 Ｒ — Ｙ —Ｓ Ｔ Ｐ Ｒ以外的方法证实 ；而其他研究者用多种分子细 Ｃ
ｔ ｎ ｐ ｌｍ ｒｓ ｈ ｉ ａｔ ｎ Ｒ — Ｃ ｉ — ｏｙ ｅａｅｃ ａ ｒ ｃｉ ， Ｔ Ｐ Ｒ） 和 基 因 组 ｏ ｎｅ ｏ
文献报道 ， ％以上的滑膜 肉瘤 中存在染色体 ９ ０ 易 位 ｔ ；８（１．；ｌ． ， 致 位 于 １ｑ ２的 Ｓ Ｔ （ １） ２ｑ ２ 导 Ｘ ｐ１ １） ８ ｌ． １ Ｙ
芴、 二硝基 苯酚 、 汞分 子 和硫化 基 团 。前 两者 以标 记 核苷 酸类 似物 的形式被 渗 入探 针 ， 因此 ， 以采用 常 可
ｘ染色体 ， 与细胞杂交后 ， 通过两种荧光信号 的数量
来 判 断是 否发 生 了染色 体 易位【。 因为涉 及 ｘ染 色 Ｊ ５ １ 体 ， 在 性别 差异 ， 析起 来 比较麻 烦 。ｓ Ｔ双色 断 存 分 Ｙ 裂分 离探 针 的出现 ，使 ＦＳ ＩＨ结 果 的判读更 加 容易 。 它 使 用 两 种颜 色 的荧 光 素 分 别 标 记 Ｓ Ｔ断 裂 位 点 Ｙ 的 ５ 端 和 ３ 端 ， 无 Ｓ Ｔ异常 的 细胞 中 ， 在 Ｙ 两种 颜色 的信 号 是邻 近 或部 分 重叠 的 ： 出现 Ｓ Ｔ断裂 易位 在 Ｙ
基本 步 骤包 括 靶样 本 的制 备 、 性 、 变 与探 针 杂交 、 杂 交后洗 涤 、 复染和 观测 。
第４ 期 孙 燕 ． 滑膜肉瘤 Fra bibliotek分子诊断进展 等．
７５ ３
ＦＳ 探针 的类 型 十分 广 泛 ，大 小 可 以从 几 百 ＩＨ ｂ ～ Ｍｂ 探 针 的获 得可通 过 克隆 、 ｐ几 。 酶扩增 及化 学方 法 合成 。目前 ， 应用 比较广 泛 的探针有 以下 ３ ：１ 种 （） 染 色 体 涂 染 探 针 ｃｒｍｏｏ ｅｐｉｔ ｇｐｏｅ ， 称 ｈｏ ｓｍ ａ ｉ ｒｂ ）又 ｎｎ 全 染色 体探 针 （ｈｌ ｃｒｍｏｏ ｅｐｏｅｗｃ ） 常用 ｗ ｏｅ ｈｏ ｓｍ ｒｂ ， Ｐ ， 于检测染 色体结 构 畸变和标 记染 色体 。 ２ 着丝 粒特 （）
果， 节省 了时间 ， 降低 了费用 【】 ７。 ｆ １ ４ 探 针与靶 细胞 可 以各 自变性 或 共变 性 ，然后 杂 交 。 适 的变性 、 最 杂交 条件 主要取 决 于探针 与靶 的性 质 。 交结 束后 ， 本 经杂交 后清 洗去 除非 特异性 杂 杂 标
交或 未发 生杂 交 的探针 ， 然后进 行荧 光检 测 。 显微 镜 的质量及 滤 片的选 择 ， 对满 意结 果 的获得 至关 重要 。 应严 格按 照所 用 荧 光 的激发 ／ 光 波 长 ， 择 最适 发射 选
７４ ３
第 １ 卷 ４期 ５ ２０ ０ ９年 １ ２月
天 津 医 科 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ耵 ＡＮ Ｉ ＭＥＤＩ ＪＮ ＣＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳＴＹ Ｉ
Ｖ １１ ， ． ｏ ． ５ Ｎｏ ４
Ｄｅ ． ０ ９ ｃ ２ ０
滑膜 肉瘤的分子诊 断进展
孙 燕 综述 ． 孙保存 审校
７ ～ ０ 具有高度恶性。近来的研究结果显示滑膜 ％ １％， 肉瘤并 非起 源 于 滑膜 。最 新 的 ＷＨ Ｏ组织 学分 类将 其 归为组 织起 源未 明的软组 织肿瘤 『 滑膜 肉瘤 的重 】 】 。
要 特征是 能够 向间 叶和上 皮方 向分 化 。 由于上 皮样
与梭形肿瘤细胞的比例、 分布和分化程度存在差异 ， 所 以滑膜 肉瘤呈 现多 样性 的组 织学形 态 ．导致 诊 断
有效 的辅 助工具 。 ２１ ＦＳ ． ＩＨ在 滑膜 肉瘤诊 断 中的作 用
２１ ＦＳ ． １ ＩＨ技术 ．
ＦＳ Ｉ Ｈ技术是利用荧光标记的核
酸分子作为探针 ， 经变性解链后 ， 在适当条件下与细 胞 内互 补 的核酸 分子进行 杂 交 。从 而检 测后 者存在 的情况以及数量、 结构等变化的一种方法。ＦＳ Ｉ Ｈ的
的激发／ 阻挡滤片组合 。 摄影记录系统由于固态电荷 耦联扫 描装 置及 图像 分析 仪 的应 用 ，可 以使背 景着 色很大程度的减低。最后 ，使用分析软件或人工计 数 。 断 ＦＳ 判 ＩＨ结 果 。 ２１ 滑 膜 肉瘤 的 ＦＳ ．． ２ ＩＨ检 测 在早 期 的滑 膜 肉瘤 ＦＳ ＩＨ检测 中， 主要应用双色荧光的 Ｃ Ｐ Ｅ 探针。其原
Ｄ Ａ聚合 酶链 反 应 （ｅｏ ｉ Ｄ ＡＰ Ｒ） 。Ｇ显 带 Ｎ ｇｎｍｃ Ｎ Ｃ 等 需要 培养 细胞 ， 显然 不适合 临床病理 诊 断 。Ｓｕｈｒ ｏｔｅｎ 印迹分 析 和 基 因组 Ｄ Ａ聚合 酶 链 反 应 的研 究对 象 Ｎ 为全基 因组 ， 以从新 鲜组 织 中提取 ， 可 但从 福尔 马林
（１．；ｌ． 与 Ｓ Ｔ ＳＸ融合 基 因是 滑膜 肉瘤 的分 ｐ ２ｑ ２ １ １） Ｙ —Ｓ 子遗传学 特征 ，可 以用 于滑膜 肉瘤 的诊 断和鉴 别诊
断［。 埘
床表现、 组织学形态和免疫组化染色结果的基础上 ， 客 观性 与特异性 较差 固 。新 近 的研究 显示 ． 色体 易 染 位 ｔ ；８（ｌ．；ｌ．１ 导 致 的 Ｓ Ｔ ＳＸ融合 基 （ １） ２ ２及其 Ｘ ｐ１ ｑ１ Ｙ —Ｓ 因是滑膜肉瘤的分子遗传学特征［１ ３。 １ 因此 ， ４ 利用分子 遗 传学 技 术检 测 ｔ １） ｌ．；ｌ． 或 Ｓ Ｔ ＳＸ融 （ ８（ １２ １ ） Ｙ — Ｓ Ｘ； ｐ ｑ ２ 合基因。 可以提高滑膜 肉瘤诊断的客观性和特异性 ， 可 能具有 广 阔的应用 空间 。
（ 称 Ｓ１ 又 Ｓ８或 ＳＸ ）基 因和 位 于 Ｘ ｌ． ＳＸ基 ＳＴ ｐ１ ２的 Ｓ 因融合［１其 中 ，Ｓ ５。 ￣ ７ ＳＸ为一个 基 因家族 ，ｘ１），１ ； ｔ ；８ｑ１． （ ２ ｑ ２ ｌ． １ ）涉及 的 ＳＸ基 因包括 Ｓ Ｘ１ＳＸ Ｓ Ｓ 、Ｓ ２或 ＳＸ ｔ Ｓ ４ｌ Ｓ 。 目前 ， Ｏ’ｕｌａ 除 Ｓｌｖｎ等 ｉ 个别 报道纤 维 肉瘤 和恶 性周 围神经 鞘膜 瘤 中也 存在 ｔ １） ｌ．；ｌ．） ， 大 （ ８（ １ ｑ １ 外 绝 Ｘ； ｐ ２ ２ 多数 研究未 发现 任何 非滑膜 肉瘤 中存 在这 种染 色体
１ 滑膜 肉瘤 的分子 遗传学 特征
２ 滑膜 肉瘤 的分子诊 断进展 目前 。用 于检测 肿瘤 染色 体易 位或基 因融 合 的 手 段 主要 有 以下几 种 ： Ｇ显 带分 析 、荧 光 原 位杂 交 （ｕｒｓｅｃ ｉ ｙｒ ｉ ｔｎ ＦＳ 、ｏｔｅ 印 ｆ ｏｅｃｎｅｉ ｓｕｈｂ ｄｚ ｉ ，ＩＨ）Ｓｕｈｒ ｌ ｎ ｔ ｉ ａｏ ｎ 迹 分 析 、逆 转 录一 合 酶链 反应 聚 ｒｖｒ ａｓｒ ． ｅｅｓ ｔ ｎｃｉ ｅｒ ｐ
胞遗传学方法在任何恶性周围神经鞘膜瘤及纤维肉 瘤 中均未 检测 到 ｔ １） ｌ ．ｑ １ １ Ｓ Ｔ Ｓ Ｘ融 （ ８（ １ ；ｌ ． 及 Ｙ — Ｓ ｘ； ｐ ２ ２ 合 基 因…２ ］ 。因此 ， 目前 比较 公 认 的 看 法是 ：Ｘ１） ｔ ；８ （
根 据 杂 交 靶 的差 异 ，ＩＨ 可 以分 为 中期 ＦＳ ＦＳ ＩＨ 与间期 ＦＳ 中期 ＦＳ ＩＨ。 ＩＨ的杂 交靶 是 中期 染 色体 ， 与
显带技术结合 ，可以将信号定位于某条染色体的某 个 区带 。但是 ， 在细胞 周 期 中 ， 多数 细胞 的绝 大部 大 分 时间处 于间期 ，获 得 间期 细胞要 比获得 中期染 色 体容易得多， 间期 ＦＳ ＩＨ的应用空间更大。初期的间
固定 、石 蜡包 埋 组织 中提 取全 基 因组 Ｄ Ａ非 常 困 Ｎ
易位及 Ｓ Ｔ ＳＸ融合基因。Ｌｄｎｉ 对 ０ Ｓｌｖｎ Ｙ —Ｓ ａａｙ㈣ ’ｕ ｉ ｌａ 等 的结果 提 出了强烈 质疑 ，因为依据 组织形 态学 及
免疫组化染色结果不能有效地鉴别滑膜肉瘤与纤维 肉瘤、 恶性周围神经鞘膜瘤 ， 因此 Ｏ Ｓｌｖｎ ’ｕ ｉ 等选择 ｌａ 的 “ 维 肉瘤 和恶性 周 围神 经鞘 膜瘤 ”可能 就是 滑 纤 膜肉瘤 ；另外 ，不能排除 Ｏ Ｓｌｖｎ ’ｕ ｉ 等研究 中 Ｐ Ｒ ｌａ Ｃ
（ 天津 医科 大学肿瘤 医 院病 理科 ， 天津 市肿瘤 防治重 点实验 室 ， 津 ３０ ６ ） 天 ０ ００
［ 关键词 】 滑膜 肉瘤 ； 诊断 ； 染色体 易位 ； 融合基 因； 荧光原位杂交 ； 逆转 录一 聚合酶链反应 ［ 中图分类号］ ７ ８ Ｒ ３． ５ ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号 ］０ ６ ８４ （０ ９ ０ — ７ ４ ０ １０ — １７ ２０ ）４ ０ ３ — ４
理 是 使 用两 种 颜 色 的荧 光分 别 标 记 １ 染 色体 和 ８号
方法快速、 简洁、 背景干扰很少 ， 但杂交信号较弱。 间 接 标记法 是采用 一些 中间分 子标记 探 针 ．杂交 后再 用 中间分 子对应 的亲和物 或抗 体进 行 检测 。 目前 采 用 的 中间 分子 有 ： 物 素 、 高辛 配 基 、一 生 地 ２ 乙酰 氨基
规的缺 口平移法 、随机引物法 、Ｃ Ｐ Ｒ或 Ｒ Ａ体外转 Ｎ
录法进 行标记 ， 最为 常用 。 故 根据标 记荧 光素 的产 色 数 量 ，ＩＨ可 以分为单 色 、 色 和多色 ＦＳ ＦＳ 双 ＩＨ。 目前 ，
许多 ＦＳ ＩＨ探针 已经商 品化 ， 大大加速 了 ＦＳ ＩＨ在临 床诊断 中的应 用 。
染 色 体 计 数 探 针 ｃｒｍｏｏ ｅｅｕ ｒｔｎｐｏｅ ｈｏ ｓｍ ｎｍｅａｏ ｒｂ， ｉ Ｃ Ｐ ， 用 于 检 测 非整 倍 体 。 （） 点 特 异 性 探 针 Ｅ ）常 ３位 （ ｃｓ ｐｃ ｃｄｎｉｅ ｒ ｅＬ Ｉ， １ ｕ ｅｉ ｅｔ ｒ ｏ ，Ｓ）又称 单一 序列 探 ｏ ｓ ｆｉ ｆ ｐｂ ｉ ｉ 针 （ｉｇｅ ｅｕｎｅｐｏｅ ， 用 于 检 测 特 异 性 染 色 ｓ ｌｓｑｅｃ ｒｂ ）常 ｎ 体易位 和基 因异常 。探 针 的荧光标 记 包括 直接 标记 法和 间接标记 法 。直接 标记 是将 荧光 分子 直 接标记 于探针 上 ， 杂交 后可 直接 在荧光 显微 镜下检 测 。 这种
异 性 探 针 （ｅ ｔ ｍ ｒ ｓｅｉｃｉｅ ｔ ｅ ｒｂ ） 又 称 ｃ ｎｒ ｅｅ ｐ ｃ ｎｉ ｒ ｏ ｅ ， ｏ ｉ ｆ ｄ ｆ ｐ ｉ
体更易进人细胞核 ， 使用蛋 白水解酶如蛋 白酶 Ｋ 胃 、 蛋白酶消化标本 ， 通过去除细胞浆和部分核蛋白， 可 增加探针、 抗体与靶 Ｄ Ａ的结合机会而产生良好 的 Ｎ 杂交信号 。近来 ，一些研 究者也尝试 在组织芯片 （ ｓ ｅ ｃｏｒ ｙ 上 进 行 ＦＳ 取 得 了较 理 想 的效 ｔｓ ｒａｒ ） ｉ ｕ ｍｉ ａ ＩＨ，
基金项 目： 国家 自然科学基金资助项 目（０ ７ ０ ７ ３５２９ ） 作者简介 ： 孙燕（ ９ ８ ）女 ， 师 ， 士， 究方 向： １７一 ， 讲 博 研 肿瘤病理 ； 孙保存 （ ９０ ） 男 ， ， １５ 一 ， 教授 硕士 ， 博士生导师 ， 研究方向 ： 肿瘤病理。
难 ，难 以在常规病理诊断工作中推广应用 。因此 ， ＦＳ 和 Ｒ — Ｃ ＩＨ Ｔ Ｐ Ｒ检 测 ｔ ；８（１ ．；ｌ ． 及其 导 致 （ １） ２ｑ ２ Ｘ ｐ１ １） 的 ｓ Ｔ ＳＸ融合转录体有望成为诊断滑膜 肉瘤的 Ｙ —Ｓ
滑 膜 肉瘤 （ｙ ｏｉ ｒｏ ） 占软组 织 肉瘤 的 ｓｎ ｖａ ｓ ｃｍａ 约 ｌａ
污染 的可 能 ， 因为他 们不仅 在 滑膜 肉瘤 、 恶性 周围神 经鞘膜 瘤 和纤 维 肉瘤 中检测 到 Ｓ Ｔ ＳＸ， Ｙ — Ｓ 而且 在先 天性纤 维 肉瘤 、恶 性纤维 组 织细胞 瘤及 神经纤 维瘤 等肿 瘤 中也 检 测 到 Ｓ Ｔ ＳＸ。但 是 均 未使 用 Ｒ — Ｙ —Ｓ Ｔ Ｐ Ｒ以外的方法证实 ；而其他研究者用多种分子细 Ｃ
ｔ ｎ ｐ ｌｍ ｒｓ ｈ ｉ ａｔ ｎ Ｒ — Ｃ ｉ — ｏｙ ｅａｅｃ ａ ｒ ｃｉ ， Ｔ Ｐ Ｒ） 和 基 因 组 ｏ ｎｅ ｏ
文献报道 ， ％以上的滑膜 肉瘤 中存在染色体 ９ ０ 易 位 ｔ ；８（１．；ｌ． ， 致 位 于 １ｑ ２的 Ｓ Ｔ （ １） ２ｑ ２ 导 Ｘ ｐ１ １） ８ ｌ． １ Ｙ
芴、 二硝基 苯酚 、 汞分 子 和硫化 基 团 。前 两者 以标 记 核苷 酸类 似物 的形式被 渗 入探 针 ， 因此 ， 以采用 常 可
ｘ染色体 ， 与细胞杂交后 ， 通过两种荧光信号 的数量
来 判 断是 否发 生 了染色 体 易位【。 因为涉 及 ｘ染 色 Ｊ ５ １ 体 ， 在 性别 差异 ， 析起 来 比较麻 烦 。ｓ Ｔ双色 断 存 分 Ｙ 裂分 离探 针 的出现 ，使 ＦＳ ＩＨ结 果 的判读更 加 容易 。 它 使 用 两 种颜 色 的荧 光 素 分 别 标 记 Ｓ Ｔ断 裂 位 点 Ｙ 的 ５ 端 和 ３ 端 ， 无 Ｓ Ｔ异常 的 细胞 中 ， 在 Ｙ 两种 颜色 的信 号 是邻 近 或部 分 重叠 的 ： 出现 Ｓ Ｔ断裂 易位 在 Ｙ
基本 步 骤包 括 靶样 本 的制 备 、 性 、 变 与探 针 杂交 、 杂 交后洗 涤 、 复染和 观测 。
第４ 期 孙 燕 ． 滑膜肉瘤 Fra bibliotek分子诊断进展 等．
７５ ３
ＦＳ 探针 的类 型 十分 广 泛 ，大 小 可 以从 几 百 ＩＨ ｂ ～ Ｍｂ 探 针 的获 得可通 过 克隆 、 ｐ几 。 酶扩增 及化 学方 法 合成 。目前 ， 应用 比较广 泛 的探针有 以下 ３ ：１ 种 （） 染 色 体 涂 染 探 针 ｃｒｍｏｏ ｅｐｉｔ ｇｐｏｅ ， 称 ｈｏ ｓｍ ａ ｉ ｒｂ ）又 ｎｎ 全 染色 体探 针 （ｈｌ ｃｒｍｏｏ ｅｐｏｅｗｃ ） 常用 ｗ ｏｅ ｈｏ ｓｍ ｒｂ ， Ｐ ， 于检测染 色体结 构 畸变和标 记染 色体 。 ２ 着丝 粒特 （）
果， 节省 了时间 ， 降低 了费用 【】 ７。 ｆ １ ４ 探 针与靶 细胞 可 以各 自变性 或 共变 性 ，然后 杂 交 。 适 的变性 、 最 杂交 条件 主要取 决 于探针 与靶 的性 质 。 交结 束后 ， 本 经杂交 后清 洗去 除非 特异性 杂 杂 标
交或 未发 生杂 交 的探针 ， 然后进 行荧 光检 测 。 显微 镜 的质量及 滤 片的选 择 ， 对满 意结 果 的获得 至关 重要 。 应严 格按 照所 用 荧 光 的激发 ／ 光 波 长 ， 择 最适 发射 选
７４ ３
第 １ 卷 ４期 ５ ２０ ０ ９年 １ ２月
天 津 医 科 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ耵 ＡＮ Ｉ ＭＥＤＩ ＪＮ ＣＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳＴＹ Ｉ
Ｖ １１ ， ． ｏ ． ５ Ｎｏ ４
Ｄｅ ． ０ ９ ｃ ２ ０
滑膜 肉瘤的分子诊 断进展
孙 燕 综述 ． 孙保存 审校
７ ～ ０ 具有高度恶性。近来的研究结果显示滑膜 ％ １％， 肉瘤并 非起 源 于 滑膜 。最 新 的 ＷＨ Ｏ组织 学分 类将 其 归为组 织起 源未 明的软组 织肿瘤 『 滑膜 肉瘤 的重 】 】 。
要 特征是 能够 向间 叶和上 皮方 向分 化 。 由于上 皮样
与梭形肿瘤细胞的比例、 分布和分化程度存在差异 ， 所 以滑膜 肉瘤呈 现多 样性 的组 织学形 态 ．导致 诊 断
有效 的辅 助工具 。 ２１ ＦＳ ． ＩＨ在 滑膜 肉瘤诊 断 中的作 用
２１ ＦＳ ． １ ＩＨ技术 ．
ＦＳ Ｉ Ｈ技术是利用荧光标记的核
酸分子作为探针 ， 经变性解链后 ， 在适当条件下与细 胞 内互 补 的核酸 分子进行 杂 交 。从 而检 测后 者存在 的情况以及数量、 结构等变化的一种方法。ＦＳ Ｉ Ｈ的
的激发／ 阻挡滤片组合 。 摄影记录系统由于固态电荷 耦联扫 描装 置及 图像 分析 仪 的应 用 ，可 以使背 景着 色很大程度的减低。最后 ，使用分析软件或人工计 数 。 断 ＦＳ 判 ＩＨ结 果 。 ２１ 滑 膜 肉瘤 的 ＦＳ ．． ２ ＩＨ检 测 在早 期 的滑 膜 肉瘤 ＦＳ ＩＨ检测 中， 主要应用双色荧光的 Ｃ Ｐ Ｅ 探针。其原
Ｄ Ａ聚合 酶链 反 应 （ｅｏ ｉ Ｄ ＡＰ Ｒ） 。Ｇ显 带 Ｎ ｇｎｍｃ Ｎ Ｃ 等 需要 培养 细胞 ， 显然 不适合 临床病理 诊 断 。Ｓｕｈｒ ｏｔｅｎ 印迹分 析 和 基 因组 Ｄ Ａ聚合 酶 链 反 应 的研 究对 象 Ｎ 为全基 因组 ， 以从新 鲜组 织 中提取 ， 可 但从 福尔 马林
（１．；ｌ． 与 Ｓ Ｔ ＳＸ融合 基 因是 滑膜 肉瘤 的分 ｐ ２ｑ ２ １ １） Ｙ —Ｓ 子遗传学 特征 ，可 以用 于滑膜 肉瘤 的诊 断和鉴 别诊
断［。 埘
床表现、 组织学形态和免疫组化染色结果的基础上 ， 客 观性 与特异性 较差 固 。新 近 的研究 显示 ． 色体 易 染 位 ｔ ；８（ｌ．；ｌ．１ 导 致 的 Ｓ Ｔ ＳＸ融合 基 （ １） ２ ２及其 Ｘ ｐ１ ｑ１ Ｙ —Ｓ 因是滑膜肉瘤的分子遗传学特征［１ ３。 １ 因此 ， ４ 利用分子 遗 传学 技 术检 测 ｔ １） ｌ．；ｌ． 或 Ｓ Ｔ ＳＸ融 （ ８（ １２ １ ） Ｙ — Ｓ Ｘ； ｐ ｑ ２ 合基因。 可以提高滑膜 肉瘤诊断的客观性和特异性 ， 可 能具有 广 阔的应用 空间 。
（ 称 Ｓ１ 又 Ｓ８或 ＳＸ ）基 因和 位 于 Ｘ ｌ． ＳＸ基 ＳＴ ｐ１ ２的 Ｓ 因融合［１其 中 ，Ｓ ５。 ￣ ７ ＳＸ为一个 基 因家族 ，ｘ１），１ ； ｔ ；８ｑ１． （ ２ ｑ ２ ｌ． １ ）涉及 的 ＳＸ基 因包括 Ｓ Ｘ１ＳＸ Ｓ Ｓ 、Ｓ ２或 ＳＸ ｔ Ｓ ４ｌ Ｓ 。 目前 ， Ｏ’ｕｌａ 除 Ｓｌｖｎ等 ｉ 个别 报道纤 维 肉瘤 和恶 性周 围神经 鞘膜 瘤 中也 存在 ｔ １） ｌ．；ｌ．） ， 大 （ ８（ １ ｑ １ 外 绝 Ｘ； ｐ ２ ２ 多数 研究未 发现 任何 非滑膜 肉瘤 中存 在这 种染 色体
１ 滑膜 肉瘤 的分子 遗传学 特征
２ 滑膜 肉瘤 的分子诊 断进展 目前 。用 于检测 肿瘤 染色 体易 位或基 因融 合 的 手 段 主要 有 以下几 种 ： Ｇ显 带分 析 、荧 光 原 位杂 交 （ｕｒｓｅｃ ｉ ｙｒ ｉ ｔｎ ＦＳ 、ｏｔｅ 印 ｆ ｏｅｃｎｅｉ ｓｕｈｂ ｄｚ ｉ ，ＩＨ）Ｓｕｈｒ ｌ ｎ ｔ ｉ ａｏ ｎ 迹 分 析 、逆 转 录一 合 酶链 反应 聚 ｒｖｒ ａｓｒ ． ｅｅｓ ｔ ｎｃｉ ｅｒ ｐ