HIV检测技术 ppt课件

样本 初筛检测 阳性反应
重复检测
选用初筛试剂 阴性反应 阴性报告
均阳性反应
一阴一阳
均阴性反应
送确认
阴性报告
HIV抗体筛查检测流程图
(1)酶联免疫吸附试验（ELISA）
可使用血液、唾液、尿液样品
单纯HIV抗体检测试剂
HIV抗原抗体联合检测试剂：同时检测血液中HIV-1P24 抗原和HIV-1/2抗体。
（3）快速检测（RT）及其它检测试验
优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急 诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在 10～30分钟内得出结果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保 存。
快速诊断试剂
（1）明胶颗粒凝集试验（PA） 将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作
用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有 HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗 原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判 读结果。
复检试验
对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一 种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理 或不同厂家的试剂进行复检试验。
如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包 括一种抗原抗体联合试剂。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品， 确证实验室可以直接进行确证试验。
原有试剂＋另一 种原理初筛试剂
加样 温育 洗板 显色
标准化操作及流程
试剂准备、标本收集、测定方法和仪器操 作写出正确的“标准操作程序”(SOP)，所有 的实验技术人员在进行相关测定时，必须严格 按相应的SOP进行操作。
ELISA法结果判断
临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的 OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性 结果的界值
HIV抗体筛查试验
筛查方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验（CLIA）：采用发光
或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。 快速检测（RT）及其它检测试验
(1)明胶颗粒凝集试验(PA) (2)斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验 (3)免疫层析试验
初筛试验
对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告 ；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确 证试验。
血液筛查：防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员 筛查和原料血浆筛查。
HIV抗体检测程序
筛查试验
初筛 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、
在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批 检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异 性高的试剂。 HIV抗体筛查样品 血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。
PA法原理
快速诊断试剂
（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）
以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上, 加血清样品。
斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金
（或胶体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应
双抗原夹心法检测抗体
固相抗原
标本（含抗体）
E
底物
E
酶标抗原
E
ELISA测定中的干扰因素
内源性干扰因素 外源性干扰因素
内源性干扰因素
类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗 性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药 物小分子等
外源性干扰因素
溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、 凝固不全、反复冻融
操作中的注意事项
时间在10 min以内，使用抗原量少。
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
第二代 重组抗原合成肽
Байду номын сангаасHIV-1 / -2
IgG抗体
IgG 抗体 HIV-1 / -2
间接
病毒裂解液
第三代 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O
IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O
夹心
第四代
病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
间接法检测抗体
酶标二抗
E
E
标本（含抗体）
固相抗原
E
底物
吸附－穿入－脱壳－生物合成－组装成熟和释放
HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合
HIV感染后的血清学改变
HIV抗体检测目的
诊断：确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检 测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体 检等。
监测：了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检 测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记 的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有 效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代 病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
用途：流行病学监测及临床大量标本的 检测
(2)化学发光或免疫荧光试验
采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可 联合检测抗原抗体。
HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检 样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加 发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。 有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒 规定。
HIV抗体检测技术
艾滋病诊断的特殊性
高度依赖实验室诊断 HIV检测的严肃性：
保证输血、器官移植的安全 错误结果将导致严重的法律问题 结果严格保密
艾滋病病毒的形态
HIV颗粒
❖ HIV的逆转录酶缺乏3’—5’核酸外切酶活性 ，无 法修复逆转录和复制过程中发生的错误 。
艾滋病病毒的结构
HIV生活周期
判断标准:标本OD值与临界值的比值大于等于 1(S/CO≥1)为阳性（对间接法及双抗原夹心法）
注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同
cutoff=NC+0.1(0.15,0.12) cutoff=NC*2.1
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、判断结果 标准客观、结果便于记录和保存