4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定

实验目的：

1．掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。 2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。 3．掌握生物碱的鉴定方法。

实验原理：

根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱。利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，再利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离。或者利用两者的极性不同，利用柱层析进行分离。

实验试药与器材：

试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧

化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等

器材：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、

烧杯、试管等

汉防己甲素 R=CH 3 汉防己乙素 R=H

实验内容与方法：

一、总生物碱的提取

取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。

二、精制

将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。

三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离

1．装柱取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。

2．上样取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g 色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。

3．洗脱将色谱柱活塞打开，以正己烷-丙酮（4∶1）洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～15ml/份）。

4．检查将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMC-Na薄层板上，用氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的R f值，合并相同R f值的流分。

5．结晶将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶。

四、检识

1．化学检识

将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小试管

储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸试剂，观察各试管中的变化，记录在如下表格中。

2．色谱检识

色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板

点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己乙素的0.1%醇溶液

展开剂：①氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）

②氯仿—乙醇（10∶1）

③甲苯—丙酮—乙醇（4∶5∶1）

显色剂：改良碘化铋钾试剂

观察记录：记录图谱及斑点颜色

实验注意事项：

1、提取装置的安装要小心，不能打碎仪器。

2、提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，过干时，当加入盐酸后会结成胶状团块，影响提取效果。

3、用1%氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分除酚性生物碱。汉防己乙素结构中的酚羟基由于空间效应和氢键的形成，呈隐性酚羟基性质，酸性减弱，不溶于强碱溶液中，在此步骤中仍留在氯仿液中。