茎尖培养脱毒技术
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植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 2．茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最 大 直 径 0.lmm ； 通 常 是 带 1 ～ 3 个 叶 原 基 的 茎 尖 （ 约 0.3 ～ 0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过 小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖 分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3 个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而 带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒 效果差。
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一、茎尖培养脱毒
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一、茎尖培养脱毒 （二）茎尖脱毒的方法 1．取样：用于脱毒的植株应是患病群体中病害相对较轻的 植株。可直接从选定的植株上取梢段进行消毒接种。也可从室 内培养 1～2月并进行热处理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消 毒接种。 2．消毒：剪取梢段（也可用侧芽）3～5cm，剥去大叶片， 用自来水冲洗干净，在75％酒精中浸泡 30s左右，用1％～ 3％ 次氯酸钠或 5％～ 7％的漂白粉溶液消毒 10～20min （或用 0.1 ％HgCl2消毒数分钟），最后用无菌水冲洗材料 4～5次。
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一、茎尖培养脱毒
茎 尖 分 生 组 织 剥 离
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 4．培养 接种后材料臵 252℃，光照度 1500 ～5000lx，每日光照 10～16h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植 物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比暗 培养效果好。 培养两个月左右，大的茎尖再生出绿芽，小的（ 0.1 ～ 0.5mm）茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。 其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度，可形成大量 丛生芽。
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 2．培养方式 茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养，但去掉 琼脂的液体培养基效果（滤纸桥）更好。
植物来自百度文库毒技术
一、茎尖培养脱毒 3．剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养 皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固 定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。 用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖 针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接 1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时 更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。
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一、茎尖培养脱毒
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一、茎尖培养脱毒 （三）培养基与培养方式 1．培养基 响。 合适的培养基对茎尖诱导成完整植株有重要影
MS 培养基适于多种植物茎尖培养。 White 、 Morel 等培养基 也有广泛的应用。植物应严格控制培养基中糖的浓度。培养基 中加入生长素（IAA、NAA ）和细胞分裂素（KT、BA ）或椰乳， 对促进不同大小的茎尖外植体生长和分化是必要的。GA3的适当 配合，促进效果良好。2,4-D常导致愈伤组织发生，应避免使用。
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一、茎尖培养脱毒 5．生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而 另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成 为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根 培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培 养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹 果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。 如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖）， 再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。
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一、茎尖培养脱毒 2．茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最 大 直 径 0.lmm ； 通 常 是 带 1 ～ 3 个 叶 原 基 的 茎 尖 （ 约 0.3 ～ 0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过 小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖 分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3 个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而 带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒 效果差。
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一、茎尖培养脱毒 （二）茎尖脱毒的方法 1．取样：用于脱毒的植株应是患病群体中病害相对较轻的 植株。可直接从选定的植株上取梢段进行消毒接种。也可从室 内培养 1～2月并进行热处理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消 毒接种。 2．消毒：剪取梢段（也可用侧芽）3～5cm，剥去大叶片， 用自来水冲洗干净，在75％酒精中浸泡 30s左右，用1％～ 3％ 次氯酸钠或 5％～ 7％的漂白粉溶液消毒 10～20min （或用 0.1 ％HgCl2消毒数分钟），最后用无菌水冲洗材料 4～5次。
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茎 尖 分 生 组 织 剥 离
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一、茎尖培养脱毒 4．培养 接种后材料臵 252℃，光照度 1500 ～5000lx，每日光照 10～16h条件下培养。温度对茎尖培养的影响不及光照。不同植 物茎尖培养适宜的光强与光照时间不同，但一般光照培养比暗 培养效果好。 培养两个月左右，大的茎尖再生出绿芽，小的（ 0.1 ～ 0.5mm）茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时间才发生绿芽。 其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度，可形成大量 丛生芽。
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一、茎尖培养脱毒 2．培养方式 茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养，但去掉 琼脂的液体培养基效果（滤纸桥）更好。
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一、茎尖培养脱毒 3．剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养 皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固 定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。 用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖 针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接 1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时 更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。
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一、茎尖培养脱毒
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一、茎尖培养脱毒 （三）培养基与培养方式 1．培养基 响。 合适的培养基对茎尖诱导成完整植株有重要影
MS 培养基适于多种植物茎尖培养。 White 、 Morel 等培养基 也有广泛的应用。植物应严格控制培养基中糖的浓度。培养基 中加入生长素（IAA、NAA ）和细胞分裂素（KT、BA ）或椰乳， 对促进不同大小的茎尖外植体生长和分化是必要的。GA3的适当 配合，促进效果良好。2,4-D常导致愈伤组织发生，应避免使用。
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一、茎尖培养脱毒 5．生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而 另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成 为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根 培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培 养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹 果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。 如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖）， 再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。