花生壳中木犀草素等抑菌活性成分的提取、纯化与研究
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84 2003, Vol. 24, No. 5
食品科学
※工艺技术
表８ 正交试验极差分析
试验号
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ 优水平 Ｒｊ 主次顺序
Ａ ０．０１ ０．０１ ０．０１ ０．０５ ０．０５ ０．０５ ０．０９ ０．０９ ０．０９ ３．０４８ ３．１８８ ３．４０５ １．０１６ １．０６３ １．１３５
采用圆形滤纸片法跟踪测定各种粗提取物和纯 化组分对测试菌的抑菌活性大小。以相对应的溶剂 为对照，抑菌活性大小以减去对照后的抑菌圈直径 大小表示。
２ 结果与讨论
２．１ 分离纯化结果 乙酸乙酯提取液，以丙酮做展开剂，薄层层析后，
用 ＦｅＣｌ３ 显色，分出三个点。自下而上依次为黑绿、 蓝黑、黄色，显然 ３ 并非多酚或黄酮类，其结果如
１．１．２ 试剂 所用试剂均为分析纯。 １．２ 实验方法
１．２．１ 活性成分的提取 将小心清洗过的花生壳晾干，用粉碎机粉碎至
４０ 目，称取 ２００ｇ 花生壳粉，分装于 ２ 个 １０００ｍｌ 圆
１．２．３ 活性成分的结构确认 移取样品溶液 ５ ０μｌ 于蒸发皿中室温挥发干后，
用甲醇转移并最终定容为 ５０ｍｌ，制成甲醇溶液，再 用滴加方式配制其他测定溶液，分别对其进行紫外光 谱扫描。 １．２．４ 抑菌活性测定
86 2003, Vol. 24, No. 5
食品科学
图 １ 所示： 计算三个点的 Ｒ ｆ 值分别为： Ｒｆ（１）＝ ０．２６ Ｒｆ（２）＝ ０．８７ Ｒｆ（３）＝ ０．９４
２．１．１ 取一份乙酸乙酯提取液直接经硅胶柱层析得三 组分，根据洗脱的先后顺序分别标号为 １＃、２＃、３＃；
２．１．２ 另一份经碱液萃取、酸化、乙酸乙酯反萃 后，同样用硅胶柱层析，得单一色带，编号为 ４ ＃ ， 贮存。柱层析结果如图 ２ 所示。
［７］ 赵哲勋．天然色素稳定剂研究［Ｊ］．农牧产品开发，１９９９， （４）：１７－１８．
［８］ 李健，吴春，聂芊等．提高赤豆皮色素稳定性的方法研究 ［Ｊ］．黑龙江商学院学报，２０００，１６（２）：２８－３１．
花生壳中木犀草素等抑菌活性成分的 提取、纯化与研究
陈春涛，马庆一，高玉美，孙红艳 （郑州轻工业学院食品与生物工程系，郑州 ４５０００２）
木犀草素［１］是一种有代表性的天然黄酮。利用其 底烧瓶，注入占烧瓶 １ ／ ２ 体积的甲醇，接上回流冷
具有的抗氧化性，可用来抑制含油食品的哈变［２］［４］。 凝管，于水浴中加热回流 ３ｈ，滤去残渣，滤液真空
虽有报道披露其可用于食品防腐保鲜［４］，但一般描述 浓缩至干，转移至滤纸包，移入索氏提取器，依次
措词简略，缺少细节。木犀草素的天然源植物尽管 用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇分别提取 ５ ｈ ，
很多，不过皆含量稀少，提取不易，故鲜见其提纯 浓 缩 ， 定 容 。
和应用的详细报道。 农业废弃物花生壳中化学成分非常复杂，除含有
少量黄酮类物质如木犀草素外，还有约３．３４％～７．１３％ 的多酚类物质［３，４］ 、大量碳水化合物及粗纤维。根据 黄酮类的性质，我们将花生壳用甲醇粗提、溶剂梯 度萃取并辅以同步抑菌活性跟踪检测，从而得到了抑 菌活性较强、富含黄酮类的组分，并用酸碱沉淀法 富集其强酸性成分以及柱层析纯化得到三种活性化合 物包括木犀草素，显而易见，本实验的结果不仅使 我们更加认识了有关天然抑菌防腐剂，还有利于农产 品废物的综合利用，减轻环境污染。
收稿日期：２００２－１１－２２ 作者简介：陈春涛（ １ ９ ６ ９ － ） ，女，硕士，讲师，主要从事微生物学教学与技术研究。
※工艺技术
食品科学
2003, Vol. 24, No. 5 85
的抑制作用。它的紫外图谱具有二氢黄酮的特点，其结构有待进一步实验认证。 关键词：木犀草素；柱层析法；滤纸片法；抑菌活性 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｐｅａｎｕｔ ｈｕｌｌｓ ｗｉｔｈ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｂｙ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ ｐｏｌａｒｉｔｙ－ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ． Ｔｈｒｏｕｇｈ ｂａｓｅ－ａｃｉｄ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ， ａｎｄ ＴＬＣ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ （１＃ ２＃ ３＃） ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ２＃ ｗａｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ＵＶ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｓ Ｌｕｔｅｏｌｉｎ （ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ ０．５３ ％） ｔｏ ｈａｖｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ， ｗｈｉｌｅ ３＃ ｔｏ ｈａｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ ａｎｄ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ． １＃ ｓｈｏｕｌｄ ｅｖｅｎ ｂｒｏａｄｅｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ，Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ，ａｎｄ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉａｍ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＵＶ， １＃ ｍｉｇｈｔ ｂｅｌｏｎｇ ｔｏ ｆｌａｖａｎｏｎｅｓ， ａｎｄ ｎｅｅｄ ｔｏ ｂｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ． Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：Ｌｕｔｅｏｌｉｎ；ＴＬＣ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ 中图分类号：ＴＳ２０１．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００３）０５－００８４－０５
Ａ３ ０．１１９
因 素
Ｂ
Ｃ
０．０３ ０．０８
０．０５
０．１
０．０７ ０．１２
０．０３
０．１
０．０５ ０．１２
０．０７ ０．０８
０．０３ ０．１２
０．０５ ０．０８
０．０７
０．１
３．３５１ ３．３１７
２．９９７ ３．０１８
３．２９３ ３．３０６
１．１１７ １．１０６
０．９９９ １．００６
１．０９８ １．１０２
３．１ 越桔天然色素短时受热和光照不变色，但较长
时间的加热和光照有较强的降解作用，耐氧化性差， 对普通还原剂较稳定。越桔色素在酸性条件下稳定， 在碱性条件下变色，蔗糖对越桔色素无不良影响。 除 Ｆｅ３＋ 外，其他金属离子对越桔色素无不良影响，且 有一定的护色作用。Ｆｅ３＋ 对色素溶液有很大影响，易 使色素发生褪色或沉淀。 ３ ． ２ 食品添加剂中苹果酸、丁二酸、阿魏酸、芦 丁、柚皮苷、对羟基苯甲酸对提高越桔色素稳定性有一 定的作用。其中丁二酸、阿魏酸、对羟基苯甲酸、柚皮 苷等四种物质作用效果较强，它们的组合使用效果更 明显，正交试验表明，最优水平组合为：丁二酸０．０９％、 阿魏酸 ０．０３％、对羟基苯甲酸０．０８％、柚皮苷０．０１％。
２．２．１．１ 测定样品在甲醇溶液中的 ＵＶ 光谱，将对
１＃ 在 ２８５ｎｍ 有一吸收峰，说明分子中有 Ａ 环苯甲
层析纯化后各组分样品的 ０．０１％ 甲醇溶液紫外扫描、 酰基，具二氢黄酮结构；２＃ 在 ２４０～４００ｎｍ 区间出现
记录，并以吸光度 Ａ、波长λ为纵、横坐标作图，见图 两个吸收峰，分别为 ２５８ｎｍ（Ⅱ），３３６ｎｍ（Ⅰ），因而
［４］ 章建浩，陈松，刘海斌等．食用玫瑰茄红色素的稳定性研究 ［Ｊ］．食品科技，２００１，（１）：４９－５５．
［５］ Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｆ．Ｔｈｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｏｓｅｌｌｅ，１９９８，８２（４）： ７１５－７２８．
［６］ Ａｎｄｏ Ｊ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ Ｒｏｓｅｌｌｅ ｗｏｏｄ，１９８７，１３： ７９－８０．
参考文献：
［１］ 程素美，胡正强．食用天然色素的开发技术及前景初探［Ｊ］． 江苏科技信息，１９９５，（１２）：３１－３３．
［２］ 李丹，林琳．越桔食品资源的开发与利用［Ｊ］．食品与发酵 工业，２０００，２６（４）：７６－８１．
［３］ 孔书敬，殷丽君，王萍．越桔色素的性质研究［Ｊ］．黑龙江商 学院学报，２０００，（１６）：２５－２８ ．
Ｂ１
Ｃ１
０．１１８ ０．１
ＤＡＢＣ
试验结果 Ｄ 吸光度（Ａ） ０．０１ １．１８３ ０．０３ ０．７９８ ０．０７ １．０６７ ０．０７ １．０３７ ０．０１ １．１０８ ０．０３ １．０４３ ０．０３ １．１３１ ０．０７ １．０９１ ０．０１ １．１８３ ３．４７４ ２．９７２ ３．１９５ １．１５８ ０．９９１ ∑＝９．６４１ １．０６５ Ｄ１ ０．１６７
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 供试菌种 供试的六种菌如下，由本系微生物实验室提供 大肠杆菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ．ｃｏｌｉ； 枯草杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ； 金黄色葡萄球菌 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ； 青霉 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉａｍ ； 黑曲霉 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ； 酿酒酵母 Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ。
※工艺技术
图４ ２＃ 样液的光谱图
图１ 薄层层析示意图 图２ 柱层析示意图
经薄层层析验证 ２＃ 和 ４＃ 具有相同的 Ｒｆ 值，它们可 能是同一物质。 ２．２ 组分的结构确认［１］
图 ５ ３＃样液的光谱图
２．２．１ 紫外（ＵＶ）分光光度计法分析
基系统电子跃迁所引起的吸收［１］ 。
摘 要：本实验以甲醇粗提、溶剂梯度萃取、配合抑菌活性跟踪检测，得到了抑菌活性较强、富含黄酮类的花 生壳乙酸乙酯组分，并用酸碱沉淀、柱层析等法纯化得到三种化合物（１＃，２＃，３＃）。其中 ２＃ 从紫外光谱法确认为 木犀草素，得率为 ０．５３％。它对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的抑制效果。实验还发现３＃ 对金黄色葡萄球菌、酿 酒酵母有一定的抑菌活性；１＃ 则具有更广的抑菌谱，它对金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、枯草杆菌和青霉均有较强
１．２．２ 活性成分的分离纯化 取少量乙酸乙酯提取液点样，用自制的硅胶 Ｇ分
析板层析，选用丙酮为展开剂，以 １％ ＦｅＣｌ３ 溶液显 色。
ａ） 取 ５０ｍｌ 提取液真空浓缩到约 １０ｍｌ 进行硅胶柱 层析，丙酮洗脱，最后阶段使用甲醇。
ｂ）另取 ５０ｍｌ乙酸乙酯提取液，用２０ｍｌ ５％ＮａＨＣＯ３ 水溶液萃取两次，合并水相，ＨＣｌ 酸化至 ｐＨ２．０，以 １５ｍｌ 乙酸乙酯反萃两次，合并有机相， 无水 Ｎａ２ＳＯ４干 燥，过滤，浓缩至约 １ ０ ｍ ｌ ，硅胶柱层析，分别接 取分开的色带浓缩并定容。
其紫外扫描结果见图 ６ 。
２．２．１．３ 于 ＭｅＯＨ／ＮａＡｃ 溶液中再加一滴 ２％硼酸溶液， 紫外扫描结果见图 ７ 。
由图 ６ 、图 ７ 光谱图可观察到峰值的红移现象， 结果如表 １ 、表 ２ 所示。
３、４ 和 ５。
初步断定，组分 ２ ＃ 具有黄酮类化合物的结构；３ ＃ 在
多 数 黄 酮 类 化 合 物 由 两 吸 收 带 组 成 ， 带Ⅰ在 ０～４００ｎｍ 无吸收峰，而且 ＦｅＣｌ３ 显色为阴性，进一
３００～４００ｎｍ 区间，由 Ｂ 环桂皮Βιβλιοθήκη Baidu基系统的电子跃迁所 步说明它不是黄酮或多酚类。
引起的；带Ⅱ位于 ２４０～２８５ｎｍ 区间，由 Ａ 环苯甲酰 ２．２．１．２ ２＃ 的１０倍甲醇稀释液加一滴１％ ＮａＡｃ溶液，
由表 ８ 可见，影响越桔天然色素吸光度因素的主 次顺序为：Ｄ ＞ Ａ ＞ Ｂ ＞ Ｃ ，即柚皮苷＞丁二酸＞阿 魏酸＞对羟基苯甲酸。根据 Ｋ１、Ｋ ２、Ｋ ３ 确定各因素 的最优水平组合为 Ａ３Ｂ１Ｃ１Ｄ１，即丁二酸 ０．０９％、阿魏 酸 ０．０３％、对羟基苯甲酸 ０．０８％、柚皮苷 ０．０１％。
３ 结 论
食品科学
※工艺技术
表８ 正交试验极差分析
试验号
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ 优水平 Ｒｊ 主次顺序
Ａ ０．０１ ０．０１ ０．０１ ０．０５ ０．０５ ０．０５ ０．０９ ０．０９ ０．０９ ３．０４８ ３．１８８ ３．４０５ １．０１６ １．０６３ １．１３５
采用圆形滤纸片法跟踪测定各种粗提取物和纯 化组分对测试菌的抑菌活性大小。以相对应的溶剂 为对照，抑菌活性大小以减去对照后的抑菌圈直径 大小表示。
２ 结果与讨论
２．１ 分离纯化结果 乙酸乙酯提取液，以丙酮做展开剂，薄层层析后，
用 ＦｅＣｌ３ 显色，分出三个点。自下而上依次为黑绿、 蓝黑、黄色，显然 ３ 并非多酚或黄酮类，其结果如
１．１．２ 试剂 所用试剂均为分析纯。 １．２ 实验方法
１．２．１ 活性成分的提取 将小心清洗过的花生壳晾干，用粉碎机粉碎至
４０ 目，称取 ２００ｇ 花生壳粉，分装于 ２ 个 １０００ｍｌ 圆
１．２．３ 活性成分的结构确认 移取样品溶液 ５ ０μｌ 于蒸发皿中室温挥发干后，
用甲醇转移并最终定容为 ５０ｍｌ，制成甲醇溶液，再 用滴加方式配制其他测定溶液，分别对其进行紫外光 谱扫描。 １．２．４ 抑菌活性测定
86 2003, Vol. 24, No. 5
食品科学
图 １ 所示： 计算三个点的 Ｒ ｆ 值分别为： Ｒｆ（１）＝ ０．２６ Ｒｆ（２）＝ ０．８７ Ｒｆ（３）＝ ０．９４
２．１．１ 取一份乙酸乙酯提取液直接经硅胶柱层析得三 组分，根据洗脱的先后顺序分别标号为 １＃、２＃、３＃；
２．１．２ 另一份经碱液萃取、酸化、乙酸乙酯反萃 后，同样用硅胶柱层析，得单一色带，编号为 ４ ＃ ， 贮存。柱层析结果如图 ２ 所示。
［７］ 赵哲勋．天然色素稳定剂研究［Ｊ］．农牧产品开发，１９９９， （４）：１７－１８．
［８］ 李健，吴春，聂芊等．提高赤豆皮色素稳定性的方法研究 ［Ｊ］．黑龙江商学院学报，２０００，１６（２）：２８－３１．
花生壳中木犀草素等抑菌活性成分的 提取、纯化与研究
陈春涛，马庆一，高玉美，孙红艳 （郑州轻工业学院食品与生物工程系，郑州 ４５０００２）
木犀草素［１］是一种有代表性的天然黄酮。利用其 底烧瓶，注入占烧瓶 １ ／ ２ 体积的甲醇，接上回流冷
具有的抗氧化性，可用来抑制含油食品的哈变［２］［４］。 凝管，于水浴中加热回流 ３ｈ，滤去残渣，滤液真空
虽有报道披露其可用于食品防腐保鲜［４］，但一般描述 浓缩至干，转移至滤纸包，移入索氏提取器，依次
措词简略，缺少细节。木犀草素的天然源植物尽管 用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇分别提取 ５ ｈ ，
很多，不过皆含量稀少，提取不易，故鲜见其提纯 浓 缩 ， 定 容 。
和应用的详细报道。 农业废弃物花生壳中化学成分非常复杂，除含有
少量黄酮类物质如木犀草素外，还有约３．３４％～７．１３％ 的多酚类物质［３，４］ 、大量碳水化合物及粗纤维。根据 黄酮类的性质，我们将花生壳用甲醇粗提、溶剂梯 度萃取并辅以同步抑菌活性跟踪检测，从而得到了抑 菌活性较强、富含黄酮类的组分，并用酸碱沉淀法 富集其强酸性成分以及柱层析纯化得到三种活性化合 物包括木犀草素，显而易见，本实验的结果不仅使 我们更加认识了有关天然抑菌防腐剂，还有利于农产 品废物的综合利用，减轻环境污染。
收稿日期：２００２－１１－２２ 作者简介：陈春涛（ １ ９ ６ ９ － ） ，女，硕士，讲师，主要从事微生物学教学与技术研究。
※工艺技术
食品科学
2003, Vol. 24, No. 5 85
的抑制作用。它的紫外图谱具有二氢黄酮的特点，其结构有待进一步实验认证。 关键词：木犀草素；柱层析法；滤纸片法；抑菌活性 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｐｅａｎｕｔ ｈｕｌｌｓ ｗｉｔｈ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｂｙ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ ｐｏｌａｒｉｔｙ－ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ． Ｔｈｒｏｕｇｈ ｂａｓｅ－ａｃｉｄ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ， ａｎｄ ＴＬＣ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｈｒｅｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ （１＃ ２＃ ３＃） ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ２＃ ｗａｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ＵＶ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｓ Ｌｕｔｅｏｌｉｎ （ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ ０．５３ ％） ｔｏ ｈａｖｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ， ｗｈｉｌｅ ３＃ ｔｏ ｈａｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ ａｎｄ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ． １＃ ｓｈｏｕｌｄ ｅｖｅｎ ｂｒｏａｄｅｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ，Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ，ａｎｄ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉａｍ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＵＶ， １＃ ｍｉｇｈｔ ｂｅｌｏｎｇ ｔｏ ｆｌａｖａｎｏｎｅｓ， ａｎｄ ｎｅｅｄ ｔｏ ｂｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ． Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ：Ｌｕｔｅｏｌｉｎ；ＴＬＣ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ 中图分类号：ＴＳ２０１．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００３）０５－００８４－０５
Ａ３ ０．１１９
因 素
Ｂ
Ｃ
０．０３ ０．０８
０．０５
０．１
０．０７ ０．１２
０．０３
０．１
０．０５ ０．１２
０．０７ ０．０８
０．０３ ０．１２
０．０５ ０．０８
０．０７
０．１
３．３５１ ３．３１７
２．９９７ ３．０１８
３．２９３ ３．３０６
１．１１７ １．１０６
０．９９９ １．００６
１．０９８ １．１０２
３．１ 越桔天然色素短时受热和光照不变色，但较长
时间的加热和光照有较强的降解作用，耐氧化性差， 对普通还原剂较稳定。越桔色素在酸性条件下稳定， 在碱性条件下变色，蔗糖对越桔色素无不良影响。 除 Ｆｅ３＋ 外，其他金属离子对越桔色素无不良影响，且 有一定的护色作用。Ｆｅ３＋ 对色素溶液有很大影响，易 使色素发生褪色或沉淀。 ３ ． ２ 食品添加剂中苹果酸、丁二酸、阿魏酸、芦 丁、柚皮苷、对羟基苯甲酸对提高越桔色素稳定性有一 定的作用。其中丁二酸、阿魏酸、对羟基苯甲酸、柚皮 苷等四种物质作用效果较强，它们的组合使用效果更 明显，正交试验表明，最优水平组合为：丁二酸０．０９％、 阿魏酸 ０．０３％、对羟基苯甲酸０．０８％、柚皮苷０．０１％。
２．２．１．１ 测定样品在甲醇溶液中的 ＵＶ 光谱，将对
１＃ 在 ２８５ｎｍ 有一吸收峰，说明分子中有 Ａ 环苯甲
层析纯化后各组分样品的 ０．０１％ 甲醇溶液紫外扫描、 酰基，具二氢黄酮结构；２＃ 在 ２４０～４００ｎｍ 区间出现
记录，并以吸光度 Ａ、波长λ为纵、横坐标作图，见图 两个吸收峰，分别为 ２５８ｎｍ（Ⅱ），３３６ｎｍ（Ⅰ），因而
［４］ 章建浩，陈松，刘海斌等．食用玫瑰茄红色素的稳定性研究 ［Ｊ］．食品科技，２００１，（１）：４９－５５．
［５］ Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｆ．Ｔｈｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｏｓｅｌｌｅ，１９９８，８２（４）： ７１５－７２８．
［６］ Ａｎｄｏ Ｊ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ Ｒｏｓｅｌｌｅ ｗｏｏｄ，１９８７，１３： ７９－８０．
参考文献：
［１］ 程素美，胡正强．食用天然色素的开发技术及前景初探［Ｊ］． 江苏科技信息，１９９５，（１２）：３１－３３．
［２］ 李丹，林琳．越桔食品资源的开发与利用［Ｊ］．食品与发酵 工业，２０００，２６（４）：７６－８１．
［３］ 孔书敬，殷丽君，王萍．越桔色素的性质研究［Ｊ］．黑龙江商 学院学报，２０００，（１６）：２５－２８ ．
Ｂ１
Ｃ１
０．１１８ ０．１
ＤＡＢＣ
试验结果 Ｄ 吸光度（Ａ） ０．０１ １．１８３ ０．０３ ０．７９８ ０．０７ １．０６７ ０．０７ １．０３７ ０．０１ １．１０８ ０．０３ １．０４３ ０．０３ １．１３１ ０．０７ １．０９１ ０．０１ １．１８３ ３．４７４ ２．９７２ ３．１９５ １．１５８ ０．９９１ ∑＝９．６４１ １．０６５ Ｄ１ ０．１６７
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 供试菌种 供试的六种菌如下，由本系微生物实验室提供 大肠杆菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ．ｃｏｌｉ； 枯草杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ； 金黄色葡萄球菌 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ａｕｒｏｕｓ； 青霉 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉａｍ ； 黑曲霉 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ； 酿酒酵母 Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ。
※工艺技术
图４ ２＃ 样液的光谱图
图１ 薄层层析示意图 图２ 柱层析示意图
经薄层层析验证 ２＃ 和 ４＃ 具有相同的 Ｒｆ 值，它们可 能是同一物质。 ２．２ 组分的结构确认［１］
图 ５ ３＃样液的光谱图
２．２．１ 紫外（ＵＶ）分光光度计法分析
基系统电子跃迁所引起的吸收［１］ 。
摘 要：本实验以甲醇粗提、溶剂梯度萃取、配合抑菌活性跟踪检测，得到了抑菌活性较强、富含黄酮类的花 生壳乙酸乙酯组分，并用酸碱沉淀、柱层析等法纯化得到三种化合物（１＃，２＃，３＃）。其中 ２＃ 从紫外光谱法确认为 木犀草素，得率为 ０．５３％。它对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的抑制效果。实验还发现３＃ 对金黄色葡萄球菌、酿 酒酵母有一定的抑菌活性；１＃ 则具有更广的抑菌谱，它对金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、枯草杆菌和青霉均有较强
１．２．２ 活性成分的分离纯化 取少量乙酸乙酯提取液点样，用自制的硅胶 Ｇ分
析板层析，选用丙酮为展开剂，以 １％ ＦｅＣｌ３ 溶液显 色。
ａ） 取 ５０ｍｌ 提取液真空浓缩到约 １０ｍｌ 进行硅胶柱 层析，丙酮洗脱，最后阶段使用甲醇。
ｂ）另取 ５０ｍｌ乙酸乙酯提取液，用２０ｍｌ ５％ＮａＨＣＯ３ 水溶液萃取两次，合并水相，ＨＣｌ 酸化至 ｐＨ２．０，以 １５ｍｌ 乙酸乙酯反萃两次，合并有机相， 无水 Ｎａ２ＳＯ４干 燥，过滤，浓缩至约 １ ０ ｍ ｌ ，硅胶柱层析，分别接 取分开的色带浓缩并定容。
其紫外扫描结果见图 ６ 。
２．２．１．３ 于 ＭｅＯＨ／ＮａＡｃ 溶液中再加一滴 ２％硼酸溶液， 紫外扫描结果见图 ７ 。
由图 ６ 、图 ７ 光谱图可观察到峰值的红移现象， 结果如表 １ 、表 ２ 所示。
３、４ 和 ５。
初步断定，组分 ２ ＃ 具有黄酮类化合物的结构；３ ＃ 在
多 数 黄 酮 类 化 合 物 由 两 吸 收 带 组 成 ， 带Ⅰ在 ０～４００ｎｍ 无吸收峰，而且 ＦｅＣｌ３ 显色为阴性，进一
３００～４００ｎｍ 区间，由 Ｂ 环桂皮Βιβλιοθήκη Baidu基系统的电子跃迁所 步说明它不是黄酮或多酚类。
引起的；带Ⅱ位于 ２４０～２８５ｎｍ 区间，由 Ａ 环苯甲酰 ２．２．１．２ ２＃ 的１０倍甲醇稀释液加一滴１％ ＮａＡｃ溶液，
由表 ８ 可见，影响越桔天然色素吸光度因素的主 次顺序为：Ｄ ＞ Ａ ＞ Ｂ ＞ Ｃ ，即柚皮苷＞丁二酸＞阿 魏酸＞对羟基苯甲酸。根据 Ｋ１、Ｋ ２、Ｋ ３ 确定各因素 的最优水平组合为 Ａ３Ｂ１Ｃ１Ｄ１，即丁二酸 ０．０９％、阿魏 酸 ０．０３％、对羟基苯甲酸 ０．０８％、柚皮苷 ０．０１％。
３ 结 论