任务2培养基的制备技术

培养乳酸菌？
2020/3/30
添加生长因子
（三）营养协调
●营养物质的浓度及配比合适 浓度过小—— 浓度过高——
水＞碳源＞氮源＞P 、S＞K、Mg＞生长因子
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（三）营养协调
一般培养基中C/N比为（100:0.5~2） 但谷氨酸生产中较特殊： C/N ＝4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； C/N＝3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。
d.鉴别培养基：利用微 生物的代谢产物与指示 剂的显色反应，快速鉴 别不同微生物的营养基 质。
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鉴别培养基(differential medium)
伊红-美蓝培养基（EMB）：伊红和美蓝二种染料，可 用于鉴别食品、水源、乳制品等待检样品中是否含有大 肠杆菌。 如果有大肠杆菌，则其代谢产物能与伊红与美蓝结合， 使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。
求较高的研究工作。 举例：高氏一号培养基，查氏培养基等
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(一)按照培养基成分来源分： c.半合成培养基：用天然有机物和化学药品制成的 培养基。 特点：能充分满足微生物的营养要求，适合于大多数 微生物的培养。
举例：牛肉膏蛋白胨培养基
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可溶性淀粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4·7H2O NaCl FeSO4 ·7H2O 蒸馏水
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天然培养基
优点：原料来源充足、营养丰富、经济简便 缺点：成分和含量不确定，重复性差 用途：适用于实验室粗放性实验和大规Biblioteka Baidu生产之用。
举例：麦芽汁培养基
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b. 合成培养基：用化学成分和量都确切知道的纯 化学试剂制成的培养基。
优点：成分精确、稳定、重复性好 缺点：价格较贵，微生物生长缓慢 用途：适用于做分类鉴定，生物测定、选种育种等要
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理想的凝固剂应具备以下条件：
①不被微生物液化、分解和利用； ②在微生物生长的温度范围内保持固体状态； ③凝固点温度对微生物生长无害； ④不因灭菌而被破坏； ⑤透明度好、黏着力强； ⑥配制方便，价格低廉。
琼脂：胶体多糖，熔点96℃，凝固点40-50 ℃
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三、培养基应具备的条件
• 具有合适的营养物质，满足微生物对六大营养 物质的需求；
• 应始终保持在微生物发育的pH值范围内； • 任何培养基一旦配成，须立即灭菌后才能使用
。
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四、配制培养基的原则
（一）目的明确 （二）营养协调 （三）营养适宜 （四）条件适宜 （五）经济节约
分离G- 细菌 分离酵母、霉菌
染料
胆盐：抑制G+ 孟加拉红：抑制
分离G分离
用于选择性的物理因素有：温度，氧气，pH值，渗 透压等
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混合样品 富集培养基 中劣势菌 选择培养基
目的：增殖少数 手段：“投其所好”
成为 优势菌
目的：抑制多数菌 手段：“取其所抗”
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(三)按照培养基的用途：
外源调节：流加酸或碱
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2. pH
☆磷酸缓冲液：pH值从6.４~7.２之间
K2HPO4+HCl KH2PO4+KOH
KH2PO4+KCl K2HPO4+H2O
☆加入CaCO3+H“+备用碱”：+H+ CO32 – –H– HCO3 – –H– H2CO3
CO2+H2O
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碳源是什么？ 空气中的CO2
也可补加一部分碳酸钠。
MgSO4
FeSO4
盐
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• 培养一种大肠杆菌的培养基配方如下：
葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g
MgSO4 0.2g
NaCl 5g 1000mL
NH4H2PO4 0.4g 水
• 大肠杆菌的营养类型？
化能异养型。
• 培养基的基本要求？
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（四）条件适宜
1. 渗透压 等渗溶液 高渗溶液 细胞发生（ ） 低渗溶液 细胞（ ）
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2. pH
细 菌：7.0~8.0 放线菌：7.5~8.5 酵母菌：3.8~6.0 霉 菌：4.0~5.8
pH 调节方式
内源调节 缓冲液：K2HPO4/KH2PO4（pH 6.4~7.2） 固体碳酸盐：CaCO3
卜条、木屑等；
◆凝固剂(1.5～2％琼脂) ，可用于微生物的分离、鉴定、
计数、保藏等
半固体培养基(semi-solid medium)
凝固剂(0.3～0.6％琼脂)。常用于观察细菌运动特征，噬 菌体效价鉴定等。
液体培养基(liquid medium)
微生物能充分接触养料，有利于生长繁殖及代谢产物积累， 常用于微生物大规模工业发酵生产。
20.0克 1.0克 0.5克 0.5 克 0.5克 溶液2滴（10%） 1000毫升
牛肉膏
3.0 克
蛋白胨
10.0 克
食盐
5.0 克
蒸馏水（自来水） 1000 毫升
合成培养基
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天然培养基
（二）按照培养基的物理性状分
固体培养基(solid medium)
◆天然的固体培养基——如马铃薯块、麸皮、米糠、胡萝
• 学以致用——养细菌
任务2 培养基的制备技术
———人工配制的适合微生物生长繁殖 或积累代谢产物所需的混合营养基质。
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一、认识
• 化能自养菌能氧源化硫杆菌的培养基
• 粉末状硫 10g
KH2PO4 4g
0.5g 氮源
• CaCl2 0.5g
(NH4)2SO4 0.4g
0.01g •• 提水问：1其00中0各mL组（分自作来用水是即什可么）？
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（一）目的明确
培养何物？ 培养菌体？ 积累代谢产物？ 实验室或大规模发酵？
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（二）营养适宜
自养微生物——简单的无机物 异养微生物——至少提供一种有机物
细菌 放线菌 霉菌
生理特点不同 营养要求不同
（ ）培养基 （ ）培养基 （ ）培养基
培养自生固氮微生物？ 无氮培养基
至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖
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二、培养基的分类
按成分不同划分
培养基类型
按用途划分
按物理形态划分
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合成培养基 半合成培养 天然培养基
基本培养基 富集培养基 鉴别培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基
(一)按成分划分：
• 天然培养基 • 合成培养基 • 半合成培养基
(三)按照培养用途分：
• 基础培养基 • 加富培养基 • 选择培养基 • 鉴别培养基 • 生产用培养基
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(三)按照培养用途：
a. 基本培养基：能满足一般微生物生长繁殖所 需要培养基。
b. 加富培养基：根据待分离微生物的特殊营养要求配制 的营养物质。使目标微生物能在其中旺盛生长，逐步占优 势，从而达到与杂菌分离的目的。
（五）经济节约
• 价格低廉 • 货源充足 • 运输方便 • 无毒环保
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总结
➢◆6大类营养物质： ➢◆4大类营养类型： ➢◆常用的培养基分类别包括： ➢◆培养基应具备的3个条件： ➢◆配制培养基的5大原则：
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培养时要同时考虑营养成分和培养环境两个因素，才能 达到预期的目的
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(三)按照培养基的用途分：
C.选择培养基 在培养基中加入抑制
剂以杀死或抑制不需要 的菌种，而目标微生物 因对该抑制剂有抗性而 正常生长繁殖的一类培 养基。
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抑制剂： 青霉素（抑制 G+ 细菌）
抗生素 氯霉素，链霉素（抑制细 菌