肿瘤坏死因子(TNF-α)和肿瘤坏死因子受体(TNFR-Ⅰ)在胆管癌中的表达

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ—Ｑ）及肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ—Ｉ）
在胆管癌中的表达
硕士研究生：贾友鹏
指导教师：王忠裕教授
专业名称：外科学
摘要
胆管癌是消化系统的一种高度恶性肿瘤，来源于胆管上皮细胞。

在我国。

胆管癌的发病睾逐年增加。

由于缺乏有效的早期诊断方法以及对化疗药物敏感性差，胆管癌的预后也较差。

目前认为细胞因子失衡与胆管癌的发病有关，关于胆管癌与细胞因子的关系的研究也得到了广泛重视。

肿瘤坏死因子（咖ｏｒ艄＝ｌＤｓｉｓ正托ｃｏｆｌｎ疆）是细胞因子家族中最重要的成员之一，具有多种生物学功能。

它参与肿瘤细胞的生长、增殖和分化调控，同时在诱导肿瘤细胞调亡、杀伤胂癌细胞方面也具有特殊意义。

曰晤可分为两类；ｎ匹．ａ和曰哪艮墨。

在诱导肿瘤缅穗强亡的过程牵．ＴＮＦ．Ｑ的作用明显强于ｎ师．Ｂ。

ｎ盯的生物学功能主要是通过其相应的细胞膜受体嗍（ｎｌｍｏｒ姗ｓｉｓ纽自ｏｒ唧ｔｏｆ）介导的。

１ＮＦＲ也可分为两类：ｎ旺Ｒ—Ｉ和眦．ＩＪ．目前认为ｎ晒．口的细胞毒活性主要是由耵盯Ｒ．Ｉ介导的。

现在。

利
用ｎ妤治疗恶性肿瘤的研究较多，但１ｒｒ师与胆管癌之间的关系尚不明确。

目的探讨ｎ吓．ｑ及１ＮＦＲ－Ｉ在胆管癌中表达的情况，与胆管癌分化程度、漫润、转移倍况之间关系。

以及在胆管癌和先天性胆总管囊肿中ＴＮＦ．ｑ及ｎ昨Ｒ．Ｉ表达的差异．
方法选取经外科手术切除的胆管癌病例４８鲷，先天性胆总管囊肿病例１９例，采用ｓＰ免疫组织化学方法，检测ＴＮＦ，８取嘲．１镪表达镶况。

结果ＴＮＦ．ｎ主要在胞浆中表达。

了砸Ｒ．Ｉ在胞成和胞浆中均有表达。

胆罾癌的ｎ旺，ｄ表达阳性率为２５％（１２，４８），ｎ晒Ｒ．１的表达阳性率为７５％（３６，４８），ｎ虾．ｑ的表达明显低于１ＮＦＲ．Ｉ的表达，二者比较具有显著性差异。

Ｐ值＜ｏ．００５。

耵旺．ｄ的表达强度在胆臂痦不同的分化程度、不同的漫润深度。

有无淋巴结转移等情况中均无明显差异．ｐ值均＞Ｏ．０５：１Ｎｎｌ．Ｉ的表达强度与胆管癌的分化程度、淋巴结转移与否亦无相关性，Ｐ值均＞ｏ．０５，但在浸润深度方面・１－ＮＦＲ－Ｉ在未侵出浆膜（Ｔ沁ｋ）的癌组织中韵表达殇疑强于己侵出蓑谈‘．ｒ，）鲍癌组织，Ｐ值＜Ｏ，Ｏ晒。

在先天性靼总管囊肿的病例孛。

也见到ｎ丑乙口和删Ｆ舡２的表达。

其中
ｎ师－ａ表达的阳性率为５．３％，ｎ妤艮Ｉ表达的阳性率为４２．１％，与胆管癌中的表
达比较均有显著性差异，Ｐ值分别＜０，０ｓ和＜Ｏ００５。

结论１．胆管癌细胞可以表达ｎ捧．口及耵吁Ｒ．Ｉ。

２．胆臀癌组织ｎ听．ｏ表达水平与胆管癌的分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移等无关．１ＮＦＲ．Ｉ的表达
水平与胆管癌的分化程度、有无淋巴结转移等无关．与浸润深度呈负相关，３．在胆管癌韵组织中，ＴＮＦ－ａ的表达弱显住于曰婿哏一Ｉ的表达，４．试Ｆ．ｎ和口诹一Ｉ在胆管经中的表达明显强于先天性胆总管囊脾组织。

关键词：ＴＮＦ．ｏｎ疆Ｒ．Ｉ瞧管癌表达分纯浸混转移免疫组织化学
Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏ卜ａ（ＴＮＦ－ａ）、ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｉ（ＴＮＦＲ．Ｉ）
ｉｎｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＣＣＡ）
ｐｏｓｔｇｒａｄＨａｔｅ：ＪＩＡＹＯｕ・ｐｅｎ霉
Ｔｕｔ口ｒ：ＰｒＯ￡ＷＡＨＧＺｈｏｎ皇．ｙｕ
Ｓｐｅｃｉａｌｉ每；Ｓｕｒｇｅｒｙ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎ旺・ｎ咖－ＩＣｔｌｏｌ她百ｏｃａｒｃｉｒｍｍａ（ＣＣＡ）ｃｘｐｒｅ豁ｉ∞ｄｉ丘ｈ训ａｔｉ∞ｉｎｖａｓｉｏｎｍｅｔ钺幽璐ｉｓｉｍｍ咖ｈｉ咖ｃｈ锄ｉｓｔｒｙ
４
肿瘤坏死因子（ＴＮＦ—ａ）及肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦＲ．Ｉ）
在胆管癌中的表达
硕士研究生：贾友鹏
指导教师：王忠裕教授
专业名称：外科学
前言
胆管癌以其逐渐增高的检出率和较低的生存率危害着人们的生命，由于其位鼍特殊，一经发现多已为晚期，因此临床治愈率较低。

细胞因子失衡在胆管癌的发病机制中具有较重要作用．肿瘤坏死因子ｏ（ｎ心．ｎ）是一种具有多种生物学功能豹细艟因子，参与胂癌细穗的生长、增殖和分化谓控，在诱导肿痼缅胞请亡、杀伤肿瘤细胞方面也具有特殊意义”１．因此与胆道恶性肿瘤的发瘸、发展及预后也有较密切的关系。

ｎ呼・ａ主要通过相应的细胞骥受体１ＮＦＲ．Ｉ介导其，生物学活性忙ｌ，因此肿窟细胞的ＴⅫ：Ｒ．Ｉ的表达水平直接影响ＴＮＦ．口的生物掌功能。

Ｂｅ溉ｅｎ等ｐｌ对结直肠癌的研究发现，结直肠癌组织的ｎ旺・ａ蛋白呈阳性表达。

但ｎ忭．ｎ表达与肿瘤的临床分期、淋巴细胞浸润程度、肿瘤坏死程度等方面的关系尚不明确【４１。

近年来，细胞因子与恶性肿瘤的生物学行为之阃关系的研究增多．但对胆管癌中ｎ盯－ａ及砸ｑＦＲ．Ｉ表达的情况以及箕与胆管籍分化程度，浸澜、转移情况之间关系的研究尚属空白．我们用免疫组化方法对胆蕾癌中ｎ司艮ｎ及ｎ腰Ｒ．Ｉ的表达情况进行检测，探讨了两者在胆管癌的不同细巍分化程度、漫涡深度、转移慵况之闻的关系，以及Ｄ晒．ｏ和１ＮＦＲ．Ｉ在胆管癌中表达约扭关性．我们还利用先天性胆总管囊肿的组织进行对比研究．从丽探讨魍管良恶性瘸变中ｎ盯．ｏ及１ＮＦＲ．１表达的差异．
材料与方法
一．研究对象
选取ｌ钤４年４月￣２∞１年１２月筒．大连医科大孥附属第一医院行手术切除且经病理诊断为疆譬癌、宠天性胆总警囊脖约病人共计６７铡。

其中胆譬癌船伊ｊ，术前均未行放化疗，男性３３例，女性１５例．患者年龄３８０８岁。

平均年龄６０．６岁；先天性胆总管囊肿１９例，男性２饲，女性１７铡，患者年龄１２—５２岁，平均年龄２９．９岁。

二．试剂及仪器设备（一）试剂
１、鼠抗人ｎ讴．Ｑ（１Ｅ８．Ｇ６）单克隆抗体
２、鼠抗人ｎ旧Ｒ－Ｉ（Ｈ．５）单克隆抗体
３、Ｏ．０ｌＭ磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）ＰＨｉ７．２：氯化钠。

磷酸二氢钾，磷酸氢二钠；氯化钾４、超敏ｓＰ免疫组化试剂盒
（二）仪器设备
ｌ、石蜡包埋机
２、切片机
３、捞片机
４、摊片机
５、自动脱蜡机（自动染色机）
６、冷台
７、微量振荡罄
８、光学显徽镜
９、显徽照相系统Ｓ柚ｔａＣｎｌｚ公司
ＳａｒＩｔａＣｍｚ公司
均为分析纯沈阳化学试剂厂北京中山生物技术有限公司
Ｌｅｉｃａ公司ＥＧ儿６０型
妇公司ＲＭ２１４５型。

Ｌｅｉ６ａ公葡Ｈ１１２ｌＯ型
Ｌｅｉ商公司啦１２２０型Ｌ．ｅｉｃａ公司耻型
Ｌｅｉ矗公司
江苏金坛医疗仪器厂
Ｎｉｋ∞公司Ｅ；｜∞０型
Ｎ酗ｎ公司鲫塑
三．方法
（一ｊ常规病理掌捡查
手术切除标本均用祸尔马棼固定，石蜻包埋，４ｎｍ连续切片３张，一张行髓染色用。

另两张行免疫组化染色（载玻片用ＡＰＥｓ进行防脱片处理）。

胆管癌按组织分化程度区分为高、中、低分化组：依据肝外胆管癌的１ＮＭ分期标准ｎ１，浸润深度来爱出浆膜者为壁内组（Ｔｉ《∞）、最授出浆膜者为壁外组（Ｂ）；没有淋巴结转移者为非淋转缎（Ｎｏ）、有淋已绪转移者为淋转组（Ｎｌ她）・先天性胆总管囊肿组织均经虢理证实．
每种抗体均｛鐾阳饿及阴性对隳ｊ并摩同时、凰＿羲份下染售，
（二）ｓＰ免疫组织他学染色埘
１．主要步骤
（１＞石蜡切片常规Ａ凳蜡、水化。

６
（２）（３）（４）
（５）（６）（７）
（８）（９）（１０）（１１）３％过氧化氢液室温下湿盒孵育１０分钟。

阻断内源性过氧化物酶活性。

ｐＢＳ液（ＰＨ．７．２）振荡清洗３分钟ｘ３。

抗原修复：用ｏ’ＯｌＭ柠榱酸缓冲液为修复渡（ＰＨ＝６．０），高压修夏２分钟：ＰＢＳ液振荡清洗３分钟×３。

每张切片加入５０ｌＩｌ非免疫动物血清封闭，室温下湿盒孵育ｌＯ分钟。

ｐＢＳ液振荡清洗３分钟×ｌ。

分剐加入一抗（鼠抗人ｎ腰・ａ单克隆抗体，ｌ：ｇＯ倍稀释：鼠抗人ＴＮＦＲ．Ｉ单克隆抗体。

ｌ：１５０倍稀释），湿盒内４℃冰箱过夜后。

室温下再孵育ｌ小时。

髓Ｓ擐荡溥洗３分钟×３。

每张切片加入５０ｕｌ生物素标记的二抗，室摄下湿盒孵育ｌＯ分钟。

ＰＢＳ液振荡清洗３分钟×３。

每张切片加入５０ｐｌ链亲和索一过氧化物酶溶液，室温下湿盒孵育ｌＯ分钟。

（１２）ＰＢＳ液振荡清洗３分钟×３ａ
（１３）新配制的ＤＡ鱼液显色，显微镜下控制。

（１４）自来承冲洗终止反应，苏木素复染，盐酸谣籀分化。

寄来水冲泷返蓝。

（１５）梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。

２．结果判定标准州
ｎ再．ｏ定位于肿瘤细胞胞浆，ＴＮｎ℃，Ｉ定位于肿瘤缀飚胞浆及胞膜，根掘染色程度及染色细胞百分率进行评分：基本不着色者为Ｏ分，着淡黄色为１分，着棕色为２分．着深棕色为３分：着色细胞计数占计数细胞百分奉≤５％为０分，６—｝扣２５％为１分，２６％ｒ５Ｄ％为２分，Ｓ１％＿ｖ７５％为３分，≥７５—％为４分。

将每张切片著色程度得分与者色细胞百分率得分相乘，为其最后得分；∞１分为阴性（一），２～３分为（＋），和６分为（＋＋），７—９分为（卅），ｌ乳１２分为（＋＋Ｈ）。

（三）统计学方法：
采用秩和检验进行差异性检验，当ｐ＞ｏｔ０５时表明没有显著性差异，当Ｐ（Ｄ．０５时表明有显著性差异，当Ｐ＜Ｏ。

０１时表明有非常显著性差异。

结果
一．常规扁理学检查
首先将胆管癌标本的石蜡切片行Ｈ毫染色，并在显微镜下观察，确定高分化癌９例、中分亿寝１０饼、住分化癌２９俄。

壁内缀（Ｔｉｓ０２）１９例、整外组（Ｔ３）狰铡，非淋转缀（溺）３４例、涝转组（Ｎｌ粕）】４例・
７
二．ＴＮＦ—ｎ在胆管癌中的表达
ｎ师一ｎ在肿瘤细胞的胞浆中表达，阳性细胞呈散在、片状或灶状分布。

ＴＮＦ．ａ在１２例中有表达（＋—＋斗十＋），其表达阳性率为２５．Ｄ％，各分组表达情况如表１所示：
表１．胆管癌组织中ＴＮＦ．ｎ表达情况及与各病理指标分组的关系
ｎ盯．Ｑ表达情况：高分化组阳性率为２２．＿ｚ％、中分化组阳性率为２０．Ｏ％、低分化组阳性率为２７．６％，三者之间比较无统计学意义（Ｐ＞ｏ．０５）．壁内组（Ｔｉｓ－Ｔ２）阳性率为３１－６％、壁外组（ｂ）蹋蛀率为２ｎ７％，．二着之间无显著差异（Ｐ＞０．（妊）。

非淋转组（Ｎｏ）阳性率为２６．５％、淋转组（ＮＩ－Ｎ２）阳性率为２１．４％，二者之问无显著差异（Ｐ＞０．０５）。

三．耵心Ｒ．Ｉ在胆管癌中的表达
ｎ师Ｒ．Ｉ在肿瘤细胞的腿膜及胞浆中表达，阳性细胞亦呈散在、片状或灶状分布。

ｎ盯Ｒ．Ｉ在３６例中有表达（＋＾Ｈ＋＋），其表达阳性率为７５．Ｏ％，各分组表达
情况参见表２：
勰．ｆ表达情况：高分化组阳性率为７７．君％、中分转爨龋性率为９０．ｏ％－｛氐分化组阳性率为６７．Ｏ％，三者之间比较无统计学意义‘Ｐ＞０．０５）・壁内组（Ｔｉｓ‘Ｔ２）阳性率为１００％、壁外组（Ｔ，）阳性率为ｓ８固名，二者之间有显萋差异（Ｐ＞０・００５）・菲淤转组（№）阳性率为７５，５％、淋转组（Ｎｌ鹄）阳性率为７１．４％，二者之陶无
显著差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。

表２．胆管癌组织中ｎ吓Ｒ．Ｉ表达情况及与各病理指标分组的关系
例表达情况
Ｐ值阳性率数一＋＋＋Ｈ斗十Ｈ＋
分化程度
高分化组９２１中分化组１０１５低分纯组２９９９浸润深度
壁内组１９Ｏ８壁外组２９１２７淋巴转移
非淋转组３４８９２
３
６
４
７
６
Ｏ
１
３
７７．８％
＞Ｏ．０５９０．Ｏ％
６７．Ｄ％
１００．０％
＜Ｑ．ｏｏＳ
５８．６％
９４４７６．５％
＞ＯＤ５
淋转组１４４６２２Ｏ７ｌ－４％
四。

ｎ崾．Ⅱ与日旺Ｒ．Ｉ在胆謦癌中的表达情况对比研究（见表３）
表３．ｎ旺．Ⅱ与ｎ汴Ｒ．Ｉ在胆管癌中的表达情况
ｎ婚Ｒ．Ｉ表达情况
————————————————————一合计Ｐ值ＴＮＦ—ｑ表达一＋十＋
卅卅
一１２１２６４２３６
＋＋＋＋＋十０
Ｏ
Ｏ
３
Ｏ
Ｏ
５
Ｏ
０
＋＋＋＋ＯＯ００Ｏ９
Ｉｌ＜８伽Ｓ０ｌ
ｌ１
合计１２１５Ｕ６４４８
如表３所示，以每例胆管癌的ｎ旺．Ｑ和ｎ盯Ｒ・Ｉ的表达情况为配对资料进行分组，然后用配对资料的秩和检验法进行差异检验・Ｐ值＜Ｏ．ＯＯｓ－提示丁ＮＦ＾。

和
９
ＴＮＦＲ—Ｉ在胆管癌中的表达有显著性差异。

ＴＮＦＲ．Ｉ的表达明显高于ＴＮＦ．ａ的表达。

五ｔ耵师＾ｏ和＿Ｔ娜＿Ｒ—Ｉ在胆管痞、先天性胆总管曩肿中的表达
先天性胆总管囊肿组织中ｎ旺．ａ和姗．Ｉ的表达，阳性细胞均呈散在分布，未见片状或灶状分布，其中ｎ汀．ａ仅在Ｉ例中有表达（＋）。

其表达阳性率为ｊ，３％：ｎ昨Ｒ－Ｉ在８例中有表达（＋～＋＋），其表达阳性率为４２．１％。

参见表４。

——表！．ｎ旺一ａ和１ＮＦＲ—Ｉ在胆管癌及先天性胆总管囊肿表达情况———～—————————————————————————————一．一：：：：：：：：
例表达情况
数一十＋＋卅－Ｈ斗Ｐ值阳性翠ＴＮＥ．ｑ
胆管癌４８３６
胆管囊肿１９１８ＴＮＦＲ．Ｉ
瞧管癌４８１２
胆管囊肿１９ｌｌ９
１
１５
６
Ｉ
Ｄ
【Ｉ
２
ｌ
０
６
Ｏ
ｌ２５０％
＜Ｑ．ＯＳ
Ｏ５，３％
４７５．０％
＜０．００５
Ｏ４２，１％
从表４可Ｊ以看出：ｎ咂・ｏ在靼管癌中的表达阳性宰为２５．ｏ％－先天性胆总瞀囊肿中表达阳性率为５３％。

二者比较有显著性差异，Ｐ值＜Ｏ．∞，胆管癌中耵雌．ａ的表达较高。

１ＮＦＲ．Ｉ在胆管癌中的表达阳性率为７５．Ｏ％，先天性胆总管囊肿中表达阳性率为躲．１％。

二者比较有非常显著性差异，Ｐ值＜０．００５，１ＮＦＲ．ｉ在胆管癌中的表达显着增高。

讨论
胆譬癌是指发生与胆管上皮细胞的恶性肿瘤，由于其位置特殊，且缺乏准确有效的早期诊断方法，所以一经发现多已是晚期。

胆管癌以往被认为是一种少见的肿瘤，但近年来髓警穗床检查手段尤其是影像诊断技术上的发展以及人们对此病的认识加济．胆管癌在世界各国的发生都有增多的趋势．我国的肝外胆管癌尸检发现率约０．０７％～Ｏ．３０％。

发病年龄多在如～７０岁，且近年来有逐渐增加的趋势．国外尸检发现率约０．０１％～Ｏ．５口蟠７１．掘美国Ｎｍ擐道，美国每年新增腮管癌病例约２０００．３０００铡。

胆管癌的病因目前尚不完全清楚，大多数学者认为可能与绫石、胆汁淤积、
１０
胆道感染及胆管先天畸形等多种因素长期作用与胆道微环境导致局部失衡有关Ｉ８ｌ。

其发病机制可以认为有以下两个方面：①基因突变：癌基因激活及抑癌基因失活，如癌基因ｒａｓ、ｃ—ｍｙｃ、ｃ・ｅｒｂ－Ｂ２等基因突变或过度表达，抑癌基因Ｐ１５、Ｐ１６、Ｐ５３等基因表达缺失或下降等；②细胞因子失衡：局部微环境中。

抑制肿瘤生长的细胞因子如ｎ妤．ａ、口ＦＮ、ＩＬ．２、ＩＬ．６等水平的下降，促进肿瘤生长的细胞因子如ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦ、ｍ‘８等水平增高，而且ＥＧＦ、ｖＥＧＦ、ＩＬ－８、ＴＧＦ等不仅能促进肿瘤细胞的生长。

而且还可以促进肿瘤血管生长，在肿瘤的浸润、转移中起作用。

肿瘤坏死因子（ｔｌｌｍｏｒｎ∞ｒｏｓｉｓｆ缸ｏｒ，ｎ旺＞具有多种生物学功能，它主要由单核一巨噬细臆系统分泌，参与机体静免疫反应．ｎ旺可分为两类：一类是主要由激活的巨噬细胞产生的ｎ旺．ａ，另一类是由激活的Ｔ淋巴细胞产生的ｎ昨．Ｂ。

二者的氮基酸序列有３０％的同源性。

其活性形式为三聚体【’】。

ＴｂｊＦ．ａ基因位于人的第６号染色体（６Ｐ），全长为２．７６ｋｂ，由４个外显子和３个内含子组成。

两基因的第４个外显予高度同源，提示这两个基因来自～个共同的祖先【１０．¨ｌ。

但ｎ师．ａ和ｎ晒－８基因的前３个外显子和内含子都是不同源的，调节基因复制的５’端也有很大区别，又说明这两个基因是不同的。

人ＴＮＦ．ｎ萋因的表达产物为成熟型ｎ旺．ｎ。

含有１５７个氨基酸残基，分子量为１７ｋＤｆ”．虽然ｎ乔．口和订汴一８的氨基酸组成和细胞来源有所差异，但二者在染色体定位及基因结构上却极为相似，故二者表现为类似功能【ｌｌ。

但在诱导肿瘤细胞摄亡的过程中。

ＴＮＦ．ａ的作用明显强于ＴＮＦ－ｐ【１２】。

ｓ研站ｓ等【１３】对传代的上皮性瘤细胞幂进行ｎ晒表达研究．筛选
出３个细胞系可表达ｎ婚ｎ１］卧队，但未迸行ＴＮＦ蛋白表达的梭测．而在使用蛋白合成抑制物时则所有研究的细胞系均能表达ｎ旺Ⅱｌ】处ｉＡ。

我们可以认为，ｎ婚在肿瘤的发生、发展中的关系及其作用虽不完全明确，但ｎ晒在参与肿瘤的发生和发展过程、对肿瘤的进展和转移方面有藿重要影响．ｎ旺的生物学活性是通过相应的细胞膜受体介导的，、１珊Ｒ可分为两类：—粪称为，ｎ啊Ｒ．Ⅱ或称ａ型Ｔｒ婿Ｒ
（ｎ婚Ｒｄ）、Ｐ７５抗原，分子量为？５ＫＤｌ另一类称为１ＮＦＲ・ｉ或称Ｂ型ｎ妤Ｒ（订旺Ｒ８）、Ｐ５５抗原。

分子量为５５ＫＤｌ２’１４‘’５１．ＴＮＦＲ广泛分匆于多种正常细胞和肿瘤细胞表面，不同细胞表面存在的ｎ旺Ｒ数目、和亲和力羞黝很大，而且不同类型细胞的两类膜受体的相对密度也有较大差异。

例如髓性细胞系上以ＴＮＦＲ－ｌｉ为主，有些髓性细胞系如札．６０细胞上也表达少量的勰一Ｉ，但上皮细胞系上
只有ｎ旺Ｒ．Ｉ而检测不到ＴＮＦＲ．ＩＩ的存在。

大多数学者认为・１ＮＦＲ在介导ＴＮＦ生物学活性过程中，ｎ幛的细胞毒活性是由ｎ师Ｒ＇Ｉ介导的，如ＵｔａｉｓｉｒＩｃｈａｒｏｅｎ等ｎ６１对入的两种胆管癌细胞系（ＨｕｃｃＡ－ｌ和Ｈ’ｌｃｃＡ・１Ｎｕ）的研究中发现，ｎ婿・ｏ可以导致胆管癌细胞发生程序性死亡，并证实这种程序性死亡是由ｎ幔・ｏ与其受
体结合而诱导产生的癌细胞凋亡，而且这种凋亡是由ＴＮＦＲ．Ｉ介导的，与ｎ昨Ｒ．ＩＩ无关。

对于肿瘤细胞是否能产生ｎ旺曾有争议。

Ｊ孤ｉｃｋｅｆｌ７】认为癌细胞不表达ＴＮＦ基因：０ｃｃｌｅｓｔｏｎ等【１３】在对人非小细胞肺癌细胞株（ＩＴＦ）上清液的分析测定后，也未发现有ｎ婚存在。

但现在大多敷学者认为，肿瘤患者体内ｎ啦来源并不单一，它可以是由单核－巨噬细胞产生或肿癌细胞产生，亦或由二者共同产生限”Ｊ。

本次实验应用免疫组化ｓＰ法检测ｎ婿．ａ在４８例手术切除的胆管癌组织中的表达，结果显示：ＴＮＦ．ａ在胆管癌细胞的胞浆中表达。

阳性细胞亦呈散在、片状或谴状分布，简质细胞凡乎不表达，在先天性胆总管囊肿组织中也几乎不表达。

这与Ｍｉｌｅｓ等困ｌ对乳腺良恶性肿瘤组织表达ｎ汴Ⅱｌ】卧ｉＡ及ＴＮＦ蛋白的研究结果基本一致。

我们通过本次实验证实胆管癌组织中的ｎ师．口表达水平与胆管癌的分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移等均无明显关系。

另外根据Ｎａｙｌ一４Ｉ报道，结肠癌及直肠癌组织中有ｎ旺ｍＲＮＡ表达，表达细腿为单个核细胞、巨噬细胞或淋巴细胞亚群，但ＴＮＦｍ］阶ｎ表达水平与肿瘤的分期、淋巴细胞浸润程度、肿瘤坏死程度无相关性。

ＨｕＭＲ掣训对结肠癌患者血清及肿瘤组织内ＴＮＦ水平研究表明。

血清ｎ婚与肿瘤的稿床分期及大小无关，但癌组织及瘟周组织内ｎ旺水平明显高于正常组织及对应的血清水平。

且与肿瘤的分期及大小明显相关。

国内外有在进展期胃癌、妇科肿癌、肺癌等肿瘤组织的胞浆内检测到ＴＮＦ蛋白不同程度、不同范疆的衰达，但大多提示这辨表达情况与肿癌的生物学行为无关ｆＩ一¨。

但也有学者持苓阍观点。

Ｍｉｌ髓等｛抛发瑰，乳腺胂癯组织中ＴＮＦ蛋白的表达较离敌。

商且表达ｎ婿的细胞比例随肿瘤分缀增商而增加。

在本次实验中ｎ旺．ａ在胆道良怒性Ｉ芮变中的表达有显警性差异，显示在肿瘤组织中，的确存在ＴＮＦ．ａ’的水平增衙，但由于实验中ＴＮＦ一口表达阳性率较低，仅有２５．ｏ％，所以这种ｈ晾．ａ水平的增高尚不能作为判断胆道病变良恶性的标准。

我们可以认为，由于胆管癌组织中ＴＮＦ－ａ的表达较低，其抗胂癌、诱导肿瘤细
瞻谒亡的作用亦较弱，提示强后不莨．
眦是一种簇受律，理论上应在细胞表面表达．本次实验的结果显示，ｎ匹Ｒ－Ｉ在４８例胆管癌维腿的胞腆及胞浆中均可见表达，考虑与标本存放时间较长、抗原修复过程中抗原繇敏等臂关．．ｎｑＦＲ．１袭达阳性的细胞亦里散在、片状或灶状分
布，问质细胞几乎举衷达，在先天性胆总管囊肿组织中袭达较低，阳性率仅为４２．１％．统计学结果显示，嗍．Ｉ的表达水平与胆管癌的分化程度、有无淋巴结转移等均无明显关系，但在脆管癌没润深度方面，未侵出浆膜的壁内组（Ｔｉｓ‘Ｔ２）ＴＮＦＲ－Ｉ表达明显强于已侵出浆膜的壁外组（Ｔ３），二者之间比较有显著性差异・而且ｎ旺Ｒ．１的表达强度与浸润深度呈负相关。

从ｎ４Ｆ．ｑ和ｎｊＦＲ．Ｉ在胆管癌中
１２
表达的比较可以看出，在胆管癌的组织中，ＴＮＦ．ａ的表达明显低于ｎ旺Ｒ．Ｉ的表达，二者具有显著性差异。

Ｋｏｓｔ等【２２ｌ认为，ＴＮＦ“介导的肿瘤纽魁揭亡与靶细咆表面的ＴＮＦ艮Ｉ有关，ｎ晒．ｑ首先要与靶细胞膜上的ｎ妤Ｒ—Ｉ结合后爿。

能将信号传导进入细胞内，引发有Ｇ蛋白、ＰＣ．ｐＬＣ（磷酸胆碱特异性磷酸酯酶ｃ）、乳Ａ２（磷酸酯酶Ａ２）、ＰＫＡ（蛋白激酶Ａ）、ＰＫＣ（蛋白激酶ｃ）、ＤＡＧ（１，２．二酰基甘油）、ＮＦ．ｋＢ（核转录园子）等多种因子参与的传递反应Ｉ玎Ｍｌ。

因此，靶细胞表面ｎ旺Ｒ－Ｉ的质与量直接影响着ｎ旧一ａ的敏感性。

目前认为有多种因素能调节细胞表面的１ＮＦＲ的数量或（和）亲和力：能正向调节１ＮＦＲ的有植物血凝素、促甲状腺素、ＩＬ２、干扰素类（如匿Ｎ．Ｙ）等；能负岛调节ＴⅪＲ的有佛被醅、ＩＬ－ｌ、地塞米松、瘗基因明弧一２以及耵匹本身等。

通过调节了她瑕的数量和亲和力，可以促进或抑制ｎ师对某些靶细胞的生物学作用。

ｎ崾Ｒ．Ｉ在胆管癌中的表达增强，其阳性率达到了７５．０％，尤其ｎｑＦＲ—Ｉ在高、中分化的癌组织中的表达阳性率达到了８４．２％，也就是说，胆管癌细胞襄面并不缺少ｎ婚Ｒ．Ｉ，但由于组织中缺乏与之结合的ｎ师．Ｑ，因此无法有效地发挥ＴＮＦ—ｏ的抗肿瘤作用，所以在胆管癌组织中虽有ｎ师Ｒ．Ｉ的增高，但所表现出来的诱导肿瘤细胞凋亡的作用可能因此而受到影响。

从而提示胆管癌的预后不龟。

这也为我们莉甬ｎ译－ｏ治疗胆管缕提供了理论依据。

另外，虽然ＴＮＦＲ．Ｉ在先天性腰总管囊肿组织孛静表达情况较好，但与其在胆管癌中的表达情况比较仍有很显著的差异，由此反映出ｎ虾Ｒ．Ｉ参与了胆管癌的发生、发展以及肿瘤浸润的过程。

在体外，高浓度的ｎ妤抑制肿瘤细胞增殖或杀伤肿瘤细胞的作用已得到肯定∽２５１，而且ｎ吓．ｎ制剂也已进入临床试验阶段。

然而，ＴＮＦ的抗瘤作用具有局限性，某些胂瘤对其有抗性。

其原因可能为：①有学者认为，肿瘤细胞表面缺乏ｎ汀Ｒ表达，或细胞表面ｎ妤Ｒ．Ｉ数目与该细胞对ｎ晤一ａ的敏感性不成硪比，无法将信号传入细胞内。

但是我们的实验证实，胆管癌细胞表面并不缺少耵晒Ｒ．Ｉ．而ｎ盯Ｒ－Ｉ对玎晒．ｄ的敏感性问题则需要进一步的研究：②缺乏一些生物化学信号：由于内源性的改变，虽然信号向细胞内传递，但出于细胞内环境发生变化，使参与细胞溶解机制缺陷：⑤ｓ锄％ｚａｔｏ等㈣提出，由多种瘤细胞株产生的转化生长因子在体内可以保护肿瘤细胞免于ｎ盯破坏；④有研究表明，ｎ旺在体外可以刺激肿瘤细胞ｎ旺删附Ａ的表达，并通过自分泌方式促进肿瘤细胞的生长１２”，这标志着肿瘤细胞对内源性ｎ忭细胞毒性作用产生了拮抗．因此，利用ｎ晒・ｎ治疗胆管癌还有很多问题需要解决。

国外有学者【：７１将ｎ旺一ａ与抗肿瘤药联合协同诱导人胆管癌细胞系的凋亡取得了较理想的效果，还有人证实当ｎ旺与其它细胞因子（如亿－２、ＩＦＮ．等）及杀伤效应细胞（如Ｕ汰细胞）联合应用时，不但其抗瘤效Ｊ莹太大增强，而且还可以减少玎曙的用量，降低其毒副作用。

近年来，依靠基因转染
对恶性肿瘤进行基因治疗的研究逐渐增多，其中不乏进行细胞因子基因转染的研究，各国学者利用基因工程技术，相继迸行了将ｎ晤基因转入免爱细胞及瘤细胞系趵各种试验洚弼，以及在分子永平改建玎唾，以增强其抗瘤活性，降低毒副俸用的实验【１２引佃１，以期提高ｎ晒基因转染后的杀瘤作用。

总之．如何利用ｎ婚治疗阻管癌还有特于更深～步研究。

“
结论
ｌ、胆管癌细胞可以在胞浆中表达ｎ旺．ｎ，表达阳性细胞星教在、片状或灶状分布；．ｒＮＦｌｉ・Ｉ在肿瘤细胞的胞膜及胞浆中表达，阳性细胞亦呈散在、片状或灶状分布．两者在间质细胞中均末见明确表达。

２、胆管癌组织ｎ西・口表达水平与胆管癌的分化程度、漫润深度、有无淋巴结转移等均无明显关系：１ＮＦＲ．１的表达水平与胆管穗的分化程度、有无淋巴结转移等均无明显关系，但在胆管癌没润深度方面。

１蜘限．Ｉ的表达强度与浸润深度呈负相关，
３、在胆管癌的组织中，ｎ忭．ａ的表达明显低予ＴＮ】隙．Ｉ的表达，二者具有显著性差异，提示胆管癌的预后不良，为利用ｎ晒．ｎ治疗胆瞀癌提供了理论依据。

４、ｎ崾・ａ和嘲一Ｉ在胆管癌屯的表达哽显强于先天蛙魍簋警囊脖组织。

提示ｎ虾一ａ和ｎ妤Ｒ，Ｉ参与了胆臂癌的发生、发展以纛辨癌缀湃一转移等过程，可以作为判定腮管良怒性病变的标准。

ｌｌ
附图
ｎ婚在胆管高分化腺癌中的阳性表达ｌ∞×
Ｄ咀在腿餐离分化腺癌中的阳性表达２∞×
ＴＮＦ在胆管癌中的阴性表达２００×
１Ｎｌ喂在胆管高分化腺癌中的阳性表达１００×
ｎＪＦＲ在胆管高分化艨癌中的阳性表达２００×
．ＩＮＦＲ在胆管中分化腺癌中的阳性表达２∞×
１啊Ｒ在胆管低分化腺癌中的阳性表达２００×嘲寝勰警癌玮ｌ鹣嬲性表达２∞×
ｎ吓在先天性胆总管囊肿中的阳性表达２００×
ｌＩ
ｎ旺在先天性胆总管囊肿中的阴性表达２００×
．ＩＮＦＲ氍先天性胆总管囊肿中的阳性表达２∞×
１咖碾在先天性胆总管囊肿中的阴性表达２００×。