2.2 低温诱导染色体加倍

低温诱导染色体加倍

一、实验目的：1．学习低温诱导植物染色体数目变化的方法

2．理解低温诱导植物细胞染色体数目变化的作用机制

二、实验原理：

思考题1、进行正常有丝分裂的植物分生组织细胞，在有丝分裂后期，染色体的着丝点分裂，子染色体在的作用下分别移向两极，最终被到两个子细胞中去。思考题2、用低温处理植物组织细胞，使受到抑制，以致影响染色体被拉向两极，细胞也不能分裂成两个子细胞，于是，植物细胞染色体数目发生变化。

思考题3、除低温外，你还知什么因子会引起染色体数量变化？

三、方法步骤：

1、低温诱导：培养洋葱根。待洋葱根长出1cm左右时，将整个装置放入冰箱的低温室内（40C）。

诱导培养36h。

2、固定形态：

思考题4、剪取诱导处理的根尖约0.5-1cm，放入中浸泡0.5-1h，以固定细胞的形态，然后用体积分数为95%的酒精冲冼2次

3、制作装片：

思考题5、制作装片需要哪些环节？

思考题6、体积分数为15%的盐酸溶液，改良苯酚品红染液在这个实验中分别起什么作用？

思考题7、体积分数为95%的酒精溶液在这个实验中起什么作用？

4、观察：用显微镜观察，并寻找发生了染色体数目变化的细胞。

思考题8、先用低倍镜观察的目的是什么？

思考题9、有人认为通过上述实验可以得出“低温能诱导植物细胞染色体数目发生变化”这一结论，你同意吗？为什么？

思考题10、秋水仙素与低温都能诱导染色体数目加倍，这两种方法在原理上有什么相似之处？

四、课堂练习：

1．下列有关“低温诱导植物染色体数目的变化”实验的叙述，正确的是

A．低温诱导能抑制分裂时纺锤体的形成B．改良苯酚品红液的作用是固定和染色C．固定和解离后的漂洗液都是95%酒精D．该实验的目的是了解纺锤体的结构2．用浓度为2％的秋水仙素，处理植物分生组织5～6小时，能够诱导细胞内染色体加倍。那么，用一定时间的低温(如4 ℃)处理水培的洋葱根尖时，是否也能诱导细胞内染色体加倍呢?请对这个问题进行实验探究。

(1)针对以上问题，你作出的假设是：。

你提出此假设的依据是。

(2)低温处理植物材料时，通常需要较长时间才能产生低温效应，根据这个提示将你设计的实验组合以表格形式列出来。

(3)按照你的设计思路，以作为鉴别低温是否诱导细胞内染色体加倍的依据。为此，你要进行的具体操作是：

第一步：剪取根尖2～3mm。

第二步：按照→→→

步骤制作。

3．现有甲乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列实验报告并回答有关问题。

Ⅰ．实验原理：。根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。Ⅱ．实验材料：活的小白鼠胚胎。

Ⅲ．药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、培养瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片。

Ⅳ．实验步骤：

（1）制备细胞悬浮液：把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。（2）进行细胞培养：

①取A、B、C三个洁净的培养瓶，。

②向A培养瓶中加入化学物质甲，向B培养瓶中加入等量的化学物质乙，并将培养瓶摇匀。

③。

（3）制作临时装片：

①当细胞增殖到大约第8代左右时，同时从恒温箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，

使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液以迅速杀死细胞并固定细胞分裂相。

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号

的载玻片的中央，，3~5 min后，盖上盖玻片。

（4）镜检和统计：

把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于期的细胞，并与对比以确认发生变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数（Q值）。

Ⅴ．结果与结论：

经研究人员实验得知，A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：QA=1．3%、QB=12．5%、

QC=0．1%，由此可知该实验的结论是

Ⅵ．回答问题：

在实验中，C培养瓶起什么作用与小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片有何不同？

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