三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

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毕业论文

题目:三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

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三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

摘要

目的探讨肺炎支原体(MP)咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应(PCR)法和血清MP被动凝集法(MP-Ab)等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道(非细菌性)感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,每患儿取咽拭子做快速培养和PCR,同时取血清做MP-Ab检测,对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例,阳性率为51.3%,病程为(4.5±2.6)天;PCR法检测出阳性103例,阳性率为67.8%,病程为(6.2±3.5)天;MP-Ab 法检测出阳性127例,阳性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。结论3种MP检测法的敏感性与病程有相关性,临床医生应根据患儿病程选取检测方法,以提高阳性检出率和敏感性。

关键词肺炎支原体,快速培养法,咽拭子聚合酶链反应,血清抗体,配对研究

前言

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)是婴幼儿、青少年急道感染的主要病原体之,临床上表现为呼吸道感染综合征,其中约3%~10%可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染,给临床治疗带来一定的困难。笔者采用3种MP 检测法对362例临床拟诊为呼吸道(非细菌性)感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究,通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法,以协助临床准确做出诊治。

1.文献综述

1.1肺炎支原体的定义

小儿肺炎支原体肺炎多见于5~15岁儿童,婴幼儿患病常表现为毛细支气管炎。多数为亚急性起病,发热无定型,或体温正常,咳嗽较重,初期为刺激性干咳,常有咽痛,头痛等症状。X线改变明显,多为单侧病变,也可见双侧病变,以下叶为多见,有时病灶呈游走性,少数呈大叶性阴影;病程2~3周不等,X线阴影完全消失比症状消退更延长2~3周之久,偶有延长至6周者。

1.2 肺炎支原体的发病机制

肺炎支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia,MPP)的发病机制仍不十分清楚,目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫学发病机制等学说,其中免疫调节异常在MPP 的发生发展中可能起重要作用

1.3肺炎支原体的临床表现

1.3.1多数为亚急性起病,发热无定型,或体温正常,咳嗽较重,初期为刺激性干咳,常有咽痛,头痛等症状。

1.3.2可出现多系统多器官的损害,皮肤粘膜表现为麻疹样或猩红热样皮疹;偶见非特异性肌痛和游走性关节痛;也有表现心血管系统、神经系统损害、血尿及溶血性贫血等。

1.3.3全身症状比胸部体征明显。体检肺部体征不明显,偶有呼吸音稍低及少许干湿罗音者

1.4 肺炎支原体的临床诊断

病原学诊断

肺炎支原体快速鉴定培养法优于被动凝集法,在肺炎支原体肺炎感染的早期可提供重要的依据,可做为临床诊断MP感染的优先试验[8];气管肺泡灌洗液MP-DNA测定不仅能诊断MP感染,且支气管肺泡灌洗术可促进呼吸道症状的改善及体征恢复,且通过纤维支气管镜收集支气管肺泡灌洗液MP-DNA,痰液MP-DNA及血清MP抗体检测阳性率没有差异。CRP的检测是肺炎病原体的辅助诊断方法,一定程度可区分细菌性肺炎和支原体肺炎。聚合酶链反应(PCR)技术检测MP具有可靠、特异性高的特点,逐渐成为早期特异诊断的有力武器。

1.5 肺炎支原体的实验室检查

急性期MPP患儿血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明显升高,IgA明显降低;而恢复期hs-CR、IgG 仍然较高,而IgM和IgA均没有明显变化,补体C3、C4在恢复期内也没有明显变化,因此血清C-反应蛋白、免疫球蛋白和血清补体的监测对诊断急性期或恢复期MPP有重要意义。MP-IgM和冷凝集试验同时检测可提高小儿支原体肺炎实验诊断的准确率;支原体肺炎患儿外周血白细胞大多正常占80%,中性粒细胞增高占61%;65.6%患儿C-反应蛋白增高;53.6%患儿血沉增快;58.4%患儿心肌酶谱增高;24.0%患儿肝酶增高;16.8%患儿尿酸增高。

5流行病学特点及进展

MP肺炎发生率约为22.3%,9~12岁感染率最低,3~6岁最高,10~12月是发病高峰月,小儿支原休肺炎发病率有所上升,发病年龄有趋小倾向,秋冬季发病率高,肺炎支原体只要通过呼吸道进行传播,尤其发病率较高的地区,局部区域每隔3-5年可发生一次肺炎支原体感染,每2-6年可发生一次大范围的肺炎支原体感染,每次感染的时间都持续较长,有的感染可持续一年左右,因此,有关部门一定要采取相应的预防措施,切断呼吸道飞沫传播途径对控制疾病发生和流行具有重大意义。控制支原体感染的发生和流行。

2.材料和方法

2.1 样本

收集某中心医院检验科2015年1月1日~8月6日在儿科就诊住院患儿病例,有呼吸道感染症状,已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象,其中男175例,女187例;年龄为2

个月~12岁,病程为1~90天。

2.2 方法

具体方法有:(1)用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测,记录结果。(2)通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数,并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。

2.3 临床诊断MP感染的诊断标准

按文献[1]、临床症状、体征标准,包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效,经青霉素、头孢菌素治疗无效者等;以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法:以病历本记录为准,即在患儿开始有症状或体征时开始计算,到患儿来就诊检测时为止进行计算。2.4 MP快速培养法

支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物,严格按说明书进行,将咽拭子用无菌生理盐水处理,接种到预温的培养基中,37 ℃培养;培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮,并且在静置时,瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性,5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法:试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA,严格按试剂盒说明书进行,以在紫外灯下出现180 bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照(阳性对照为MP质粒,阴性对照为无菌生理盐水),由专人进行操作,质量控制。MP-Ab法:试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab 检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒,严格按试剂盒说明书操作,抽取患儿静脉血3 ml,采用明胶颗粒被动凝集法,用血清检测,结果以≥1∶40判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。

2.5 统计学方法

计量资料用均数±标准差(x±s)表示,各年龄组与3种检测方法结果比较用Spearman 检验;各年龄组间确诊病例的阳性率比较用χ2检验;3种检测方法阳性结果与病程之间的比较用q检验

3.结果

3.1 阳性样本

经过回顾性诊断,在配对研究组362例研究对象中有152例符合MP感染的诊断标准,即有152例确诊病例,其中肺炎45例,支气管炎56例,上呼吸感染49例,支气管哮喘2例。MP快速培养法检测出78例阳性,PCR法检测出103例阳性,MP-Ab法检测出127例阳性。

3.2 结果分析

各确诊病例的年龄分布,见表1。表1显示儿童MP感染的年龄以3~4岁年龄段的病例最多,

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