HPLC测定参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量

HPLC测定参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量

目的建立参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m），以甲醇-水（78∶22）为流动相，流速0.8 mL/min，柱温35 ℃，检测波长为268 nm。结果丹参酮ⅡA在0.069～0.414 ?g范围内线性关系良好（r=0.999 8）。平均回收率为98.99%，RSD=0.81%（n=6）。结论本方法操作简便，结果可靠，重复性好，可用于参归胶囊的质量控制。

标签：高效液相色谱法；参归胶囊；丹参酮ⅡA

参归胶囊是由丹参、当归、黄柏、青风藤、车前子、牛膝、杜仲等组成的中药制剂，具有清热除湿、活血补肾的功效，用于治疗痛风、痛风性关节炎等疾病。为更好地控制该制剂的质量，我们按新药要求对该制剂的质量标准进行了规范化研究[1]。本试验采用高效液相色谱法（HPLC）对胶囊中的丹参酮ⅡA进行了含量测定，为该制剂的进一步开发研究奠定基础。

1 仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪，waters2487检测器，Millennium32色谱工作站数据处理系统；Kromasil C18柱（5 ?m，4.6 mm×150 mm）；BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）；电热恒温水浴锅（江苏南通县通海电器厂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

2.2 对照品溶液的制备

2.3 供试品溶液的制备

取本品内容物约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜（0.45 ?m），即得。

2.4 空白试验

为进一步考察试验设计及含量测定方法的可行性和专属性，取不含丹参药材的阴性样品制备阴性对照液，在上述色谱条件下测定，结果表明阴性对照液的色谱图在丹参酮ⅡA相应的保留时间附近无干扰峰，溶剂峰亦无干扰（见图1），表明本法可行，专属性良好。

2.5 线性关系的考察

2.6 精密度试验

2.7 稳定性试验

取同一批号胶囊10粒，倾出内容物，混匀，取约1 g，精密称定，按“2.3”项下方法制成供试品溶液并按色谱条件于0、12、24、36、48 h分别测定（n=5），结果RSD=0.40%，说明稳定性良好。

2.8 重复性试验

2.9 加样回收率试验

2.11 丹参药材的含量测定

按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）丹参项下的含量测定方法[2]，测定3批丹参药材中丹参酮ⅡA的含量，分别为0.38%、0.31%、0.26%。

3 讨论

丹参为复方参归胶囊剂中的君药，其主要脂溶性成分为丹参酮ⅡA。现代药理学研究表明，丹参酮ⅡA对心肌缺血和心肌梗死具保护作用，能稳定红细胞膜、耐缺氧、抑制血小板功能和抗血栓形成等[3]，是丹参的活性成分之一。本试验采用HPLC测定制剂中丹参酮ⅡA的含量，方法快速、简便、准确，可用于参归胶囊的质量控制。

丹参酮ⅡA遇光不稳定，试验中丹参酮ⅡA对照品溶液的配制采用棕色容量瓶，供试品溶液应现用现配，且注意低温避光保存[4]。

采用HPLC测定供试品溶液中丹参酮ⅡA的含量时，比较了不同的流动相[4-5]，包括乙腈-水（65∶35）、甲醇-水（80∶20），但色谱峰与相邻峰的分离效果均不理想，将后者调节比例为甲醇-水（78∶22），结果分离效果良好。

本试验参考2010年版《中华人民共和国药典》（一部）丹参项下供试品溶液的制备方法，也曾查阅诸多文献，有以甲醇或乙醇为溶媒进行超声提取的，但有文献资料表明，对于丹参酮ⅡA的提取方法，加热回流提取法优于超声提取法，而丹参酮ⅡA易溶于高浓度乙醇，但水溶性成分在醇提时亦有相当部分被提取出来[6-7]。为避免更多杂质峰的干扰，故本试验采用甲醇加热回流提取，结果表明，样品中各组分的分离效果较好。

参考文献：

[1] 王志安，王晓丹，李志明.人参败毒胶囊质量标准的研究[J].中国实验方剂学杂志，2001，7（3）：6-7.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：70.

[3] 胡迪，王光忠.丹参不同部位丹参酮ⅡA含量比较[J].中药材，2005，28（1）：34.

[4] 张峻，李雪松，吴晖，等.高效液相色谱法测定三七丹参片中丹参酮ⅡA 的含量[J].中国医院药学杂志，2001，21（6）：345-346.

[5] 原文鹏，刘林娜，马双成.HPLC法测定山丹酮缓释片中丹参酮类成分的含量[J].中国药房，2008，19（9）：681-682.

[6] 王启砚.HPLC法测定宁神补心片中丹参酮ⅡA的含量[J].中国药师，2003，6（12）：790-791.

[7] 任志会，苏会霞，柏艳柳.丹参脂溶性及水溶性成分集成提取工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2009，16（3）：54.