高效液相色谱法对丹参中丹参酮ⅡA,丹参酮Ⅰ

高效液相色谱法对丹参中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和

隐丹参酮的同时测定

摘要 本实验采用高效液相色谱法对中药材丹参中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮三种成分采用外标定量法进行同时测定，根据其色谱图相应保留时间的谱峰与标准曲线进行对比，可知其三种成分在该样品中的含量，通过测定可知样品中丹参酮ⅡA ，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮三种成分的百分含量分别为0.1011%、0.0259%、0.0155%。

关键词 HPLC 丹参 参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮 外标法

1、引言

丹参酮ⅡA 、丹参酮Ⅰ和隐丹参酮是从唇形科鼠尾草属植物丹参的根部提取的脂溶性二萜类物质。

其分子结构、分子式、分子量如下： O H 3C C H 3

C H 3O O

O O O O

O

O

C 18H 12O 3 294.33 C 18H 12O 3 276.29 C 19H 20O 3 296.36

丹参酮ⅡA 丹参酮Ⅰ 隐丹参酮

本实验将采用高效液相色谱法对丹参中的三种脂溶性提取物（丹参酮ⅡA 、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮）进行同时测定。

高效液相色谱分析包括两种洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱。梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗提，即在分离过程中使两种或者两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变他们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH 值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。梯度洗脱可以使一个复杂样品中性质差异较大的组分，都能在各自适宜的分离条件（容量因子k 适宜）

下实现分离。

色谱定量分析的依据是各分析组分的质量或者浓度与检测器的响应信号(色谱图上表现为峰面积A或峰高h)成正比，即m=f’错误！未找到引用源。A(f’称为定量校正因子)。色谱法中常用的定量分析方法有归一化法，内标法和外标法。外标法是应用待测组分的纯物质来制作标准曲线，即配置不同质量分数（浓度）的标准溶液，取固定量标准溶液进样分析，从所得的色谱图上测出响应信号（峰高或峰面积），然后绘制峰高或峰面积对含量(质量或浓度)的标准曲线。

本实验采用反相化学键合相色谱法，以十八烷基硅烷键合相为固定相，0.1%磷酸溶液-甲醇为流动相分离丹参中脂溶性提取物，并通过外标法对三种待测物质进行定量分析。当组分在固定相和流动相间进行分配时，极性大的物质在流动相中的溶解度较大，而极性小的物质在流动相中的溶解度较小，组分的流出顺序是极性大的化合物在前，极性小的化合物在后，最终实现各物质的分离。

2、实验部分

2.1实验仪器与试剂

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪（配备SPD-20A紫外检测器、SIL-20A自动进样器、LC-20AB输液泵、CTO-10AS柱温箱、脱气机）、色谱柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）、电子天平、超声波清洗仪、溶剂过滤器、微孔滤膜（0.45µm，无机相和有机相）、50 ml具塞三角瓶、25.00 mL移液管、定量滤纸、漏斗、漏斗架、一次性针筒过滤器（脂溶性）、微量注射器。

丹参酮ⅡA标准品，丹参酮Ⅰ标准品，隐丹参酮标准品，甲醇（色谱纯），乙醇（分析纯），磷酸（分析纯），超纯水，丹参粉末。

2.2实验方法

2.2.1前处理精密称取0.2010g干燥的样品粉末，置于具塞三角瓶中，准确加入25.00mL 80%乙醇，称重，超声提取25min，补重，摇匀过滤，得到待测液。

2.2.2色谱条件1．色谱柱：C18柱（150mm×4.6mm，5 μm）

2．流动相：泵A：0.1% 磷酸水溶液；泵B：甲醇

泵B浓度：0~40 min，70%~75%；40~45 min，75%

流速：0.8mL/min

3．紫外检测器：测定波长254 nm

4．柱温箱：30℃

5．进样量：10μL

3、结果与讨论

3.1实验结果色谱图如下图所示：

3.2结果分析实验结果如上图所示，在保留时间分别为23.033min、2

4.667min、38.5min时，分别出现了隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的相应色谱峰，与标准曲线进行对比，由于进样量为10uL，得出其含量分别为0.0125ug/10uL、0.0209ug/10uL、0.0813ug/10uL，已知原始样液为25mL，则可计算出样品中三种成分的含量：31.25ug、52.25ug、203.25ug，已知原始样品称量为0.2010g，则隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA三种成分在本样品中的百分含量分别为0.0155%、0.0259%、0.1011%。