不同产地丹参药材中丹参酮_A及丹参素的含量比较

312　对照品溶液的制备　另取人参二醇与人参三醇

加无水乙醇分别制成每1m l 含1m g 的混合液。313　展开剂制备　氯仿2乙醚(1 1)。

314　实验方法　取样品溶液和对照品溶液各10Λl ,分别点样于同一硅胶G 薄层板上,用展开剂展开至约15c m ,晾干,喷以硫酸甲醇溶液(1→2),在105o C 烘干约10分钟,置紫外灯(365nm )下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。见图3

。

11颐和春胶囊　21人参二醇、人参三醇

图3　供试品及人参二醇、人参三醇对照品色谱图

315　阴性对照试验　取川牛膝、锁阳、淫羊藿、蛇床

子、沙参、冰片、覆盆子、熟地黄、韭菜子(炒)、附子(制

)

路路通等药材按处方比例混合研细,取细粉,

按以上样品溶液制备方法制得溶液作为样品液,取此液及上述对照品溶液各10Λl ,分别点样于同一硅胶G 薄层板上,同上实验方法,此样品液未见与对照品溶液相同位置斑点。见图4

。

11未加人参的药材混合粉末　21人参二醇、人参三醇

图4　未加人参药材及人参二醇、人参三醇色谱图

4　讨论

按此方法对3个批号的颐和春胶囊进行有效成分鉴定,结果都呈正反应,显色明显,本方法可作为该药品的鉴别实验。

不同产地丹参药材中丹参酮 A 及丹参素的含量比较

Ξ

严　红,高　扬,郭　伟,程　筠

(天津中医学院第一附属医院,天津　300193)

摘　要　目的:研究不同产地的丹参药材中丹参酮 A 及丹参素的含量。方法:高效液相色谱法。结果:不同产地丹参药材中的水溶性成分丹参素及脂溶性成分丹参酮 A 含量差异很大,两种成分之间无一定关系。结论:建议《中国药典》增加丹参水溶性成分的定量指标,为保证丹参制剂的疗效,应根据制剂的工艺特点,进行相应定量指标检验。

关键词　丹参,丹参酮 A ,丹参素,高效液相色谱

中图分类号:R 927.2 文献标识码:A 文章编号:100625687(2003)0320010203

丹参为唇形科植物S alv ia m iltiorrh iza Bge 干燥根

及根茎,临床用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性中风、栓塞、肝脾肿大、化脓性感染等疾病。现代药理学研究表明,丹参的有效成分分为脂溶性的菲醌类衍生物和水溶性的酚酸类成分,前者为抗菌抗炎的主要成分,其中丹参酮 A 还能增加冠脉流量、改善心肌功能、降低血小板聚集而抗血栓形成。后者以丹参素、原儿茶醛为代表,具有抗氧化、抗凝抗血栓、抗心肌缺血及调血脂作用,对多种实验性心、肝、脾的损伤均具有保护作用,被认为是丹参治疗冠心病、栓塞、中风的主要成分,因此,

二者均为评价丹参质量与疗效的重要指标。丹参酮 A

已被作为评价丹参质量的指标成分,收载于《中国药典》2000版一部丹参的含量测定项下。但在临床上广泛使用的丹参注射液、复方丹参注射液、丹参口服液、复方丹参口服液及丹参粉针剂等,在制备工艺中丹参的提取方法大多沿用传统的水提醇沉法。有实验表明,采用水提法,主要提出丹参的水溶性成分,脂溶性的有效成分丹参酮 A 仅提出2.6%[1],对于丹参药材的质控标准,如仍采用测定丹参酮 A 的含量是否有意义,为此,研究测定了几种不同产地丹参药材中丹参酮 A

01天津药学　T ianjin Phar m acy 2003年6月　第15卷第3期

Ξ

及丹参素的含量,以探求两种成分之间的内在联系。

1　仪器与试药

高效液相色谱仪:美国Beckm an公司;125型输液泵;168二极管阵列检测器;Gold N ouveau2色谱工作站。JA21104型电子天平(万分之一)。丹参素对照品(上海医科大学天然药化室);丹参酮 A(中国药品生物制品检定所)。丹参药材(购于不同产地,1号:甘肃;2、3、4号:安徽;5号:内蒙古;6号:河北;7、8、9、10号山东不同地区,丹参药材均经鉴定)。试剂均为分析纯。

2　方法

211　色谱条件　丹参酮 A:色谱柱UL TRA SPH ER E TM OD S2C18(4.6mm×250mm,5Λm);流动相甲醇2水(15 5),流速1.0m l m in;检测波长270nm;理论塔板数以丹参酮 A峰记不低于2000。丹参素:色谱柱Irregular2H C18(4.6mm×250mm,10Λm);流动相水2甲醇2二甲基甲酰胺2冰乙酸(90 4 4 2);流速:019m l m in;检测波长:280nm;理论塔板数以丹参素峰记不低于2000。

212　供试品溶液的制备　取丹参药材,粉碎过3号筛,分别取粉末0.3g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50m l,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过0.45Λm滤膜,取续滤液作为测定丹参酮 A的供试品溶液。另取丹参药材剪成小段后适当粉碎,精密称取各药材10g,加12倍量水回流提取2次(2、1.5小时)[2],提取液过滤,滤液浓缩至50m l,加95%乙醇使含醇量为65%,冷藏过夜,滤过,滤液定容至200m l,混匀,精密吸取滤液10m l于蒸发皿中,水浴蒸干,残渣以水溶解并定容至25m l,充分混匀,过0.45Λm滤膜,取续滤液作为测定丹参素的供试品溶液。

213　线性关系的考察　精密称取丹参酮 A对照品10m g于50m l棕色容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀;精密量取0.2、1、2、3、4和5m l于25m l棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,依次吸取丹参酮 A系列对照液20Λl,注入液相色谱仪,测定,以丹参酮 A 的浓度为纵坐标,峰面积为横坐标,计算回归方程为C=1.013×10-8A+2.033×10-6,r=0.9998,表明丹参酮 A在0.002～0.040m g m l之间线性关系良好。

精密称取丹参素对照品10m g于50m l棕色容量瓶中,加过膜水溶解并定容至刻度,摇匀;精密量取1、3、5、7和9m l于10m l棕色容量瓶中,加过膜水至刻度,摇匀,依次吸取丹参素系列对照液20Λl,注入液相色谱仪,测定,以丹参素浓度为纵坐标,峰面积为横坐标,计算回归方程为C=7.587×10-8A,r=0.9999,表明丹参素在0.02～0.18m g m l之间线性关系良好。214　精密度实验　分别取丹参酮 A对照液(0.008 m g m l)、丹参素对照液(0.06m g m l)连续进样6次,每次20Λl,测得峰面积,计算R SD分别为1.98%和1125%。

215　稳定性实验　吸取常温下供试品溶液,每隔一段时间进样20Λl分析,结果两种供试品溶液在24小时内基本稳定,R SD分别为2.87%和2.09%。

2.6　重复性实验　取丹参1号药材,依供试品溶液制备方法分别制备3份供试品溶液,进样20Λl分析,每份进样3次,测得丹参酮 A的平均含量为0.082%,R SD =1.59%;丹参素的平均含量为0.67%,R SD= 1179%。

2.7　样品测定　分别吸取各丹参药材的丹参酮 A 及丹参素的供试品溶液,进样20Λl分析,根据测得的浓度,计算丹参药材中丹参酮 A及丹参素含量。结果见表1。

表1　丹参药材中丹参酮 A及丹参素的含量(%)

丹参药材编号丹参酮 A丹参素

101080167

201090136

301070128

401090125

501170132

601090144

701210162

801280141

901250140

1001670153

3　小结与讨论

311　含量测定结果表明　不同产地及同一产地不同地区的丹参药材中丹参酮 A及丹参素的含量存在明显差异,这可能与各产地丹参的生长环境和药材产地的加工方法有关。丹参药材中两种成分的含量无一定内在关系,如山东产丹参质量明显优于其他产地,但丹参素的含量不与丹参酮 A成正比关系,又如丹参素含量最高的1号药材其丹参酮 A的含量却很低。因此,建议《中国药典》增加丹参水溶性成分的定量指标,为保证丹参制剂的疗效,应根据制剂的工艺特点,进行相应定量指标检验。

312　本实验根据丹参液体制剂的工艺特点,以水醇法制备丹参药材的丹参素的供试品溶液,水醇法会沉去丹参的部分水溶性成分,将水煎液分别浓缩至5 1和1 1浓度进行醇沉,结果5 1浓度进行醇沉可平均少损失约15%。重复性实验表明,测定结果具有良好的重复性,因此,丹参各药材的供试液之间具有可比性。

313　实验中还分别测定了丹参醇沉液冷藏1、4、6、12

11

天津药学　T ianjin　Phar m acy　2003年6月　第15卷第3期