细胞生物学实验报告_小鼠肠系膜脂肪细胞苏丹Ⅲ染色

图 2. 染料苏丹Ⅲ的分子结构式。 山东大学细胞生物学实验报告

小鼠肠系膜脂肪细胞苏丹Ⅲ染色

2012/10/16

实验目的：

取小鼠肠系膜用脂类染料苏丹Ⅲ染色，观察肠系膜血管周围脂肪细胞的形态和分布，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理，熟悉脂类染色的操作方法。

实验原理：

脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。

在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘（图1-B, 1-C, 1-D ）。

图1. 小肠肠系膜脂肪细胞的分布及人体内常见脂肪细胞的切面形态。 A. 肠系膜上微血管与脂肪细胞的分布及营养物质流通方向示意图。脂肪细胞均匀分布在微血管周围，营养物质经小肠吸收后进入小肠外围毛细血管，经肠系膜血管汇总进入肝脏，肠系膜毛细血管外围脂肪细胞与脂质的储存有关。B 、C 、D. 三种脂肪细胞的透射电镜切片（人为染色）。B 为典型的白色脂肪细胞（单房细胞），细胞质中只有一个脂肪滴，细胞核扁平，位于细胞边缘；D 为典型的棕色脂肪细胞（多房细胞），细胞质中分散有多个脂肪滴，含有大量线粒体（染作绿色）；C 类细胞细胞质中脂肪滴未完全融合，介于B 与D 之间。B 是肠系膜脂肪细胞的主要形态，偶尔也存在C 类脂肪细胞。

在小鼠肠系膜毛细血管和淋巴管周围，常有单层白色脂肪细胞（对应棕色脂肪细胞）存在（图1-A ）。这些脂肪细胞的作用主要是以甘油三酸酯和胆固醇酯的形式储存毛细血管从小肠中吸收的部分脂质，待机体需要时再将贮存的脂肪释放到血液中，在特定组织降解并氧化供能。褐色脂肪细胞由于本身含有大量线粒体，可在脂肪细胞内氧化脂类供能。

细胞中的脂肪不溶于水，易溶于乙醇、氯仿、乙醚

等有机溶剂，因此，对脂肪细胞的固定、染色不能使用

脂溶剂。脂肪细胞的固定常使用甲醛类固定剂如甲醛钙，

染色使用脂溶性染料如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ和苏丹黑。理想

脂溶性染料的溶剂应该仅能溶解染料，不溶解脂肪。

脂类染色最常用的染料是苏丹系列染料，本实验即

使用苏丹Ⅲ为脂肪显色。苏丹Ⅲ是一种橙红色偶氮染料，（图2）由于其在脂肪中的溶解度高于在乙醇中的溶解

度，当用70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液浸染脂肪细胞时，苏丹Ⅲ会从70%乙醇中脱离，溶解并集中在脂肪液滴中，使脂肪细胞着色（橘黄色）。以70%

乙醇作为苏丹Ⅲ的溶剂可以减少乙醇对脂肪细胞中脂肪液滴的溶解，染色较大的脂肪块。染色的主要过程不涉及化学变化。

材料、试剂：

小鼠，苏丹Ⅲ70%乙醇饱和溶液（室温），70%乙醇，甲醛钙固定液。

实验方法：

将完整展开的小鼠肠系膜连同小肠平铺在载玻片上，以盖玻片盖住肠系膜，剪去多余肠管后，滴加足量甲醛钙固定液固定20min。用蒸馏水冲洗玻片肠系膜，除去固定液。以70%乙醇溶液过渡冲洗肠系膜两次，滴加苏丹Ⅲ染液浸染30min，吸出多余染液，镜检观察。

实验结果：

淋巴管

图3. 小鼠肠系膜脂肪细胞苏丹Ⅲ染色光镜照片。A、B.肠系膜微血管周围染成橘黄色的脂肪细胞（100×）。箭头标示了微血管的位置，可以看到脂肪细胞大小不一，随血管弯曲方向均匀地排列在血管两侧，血管内可见堆积的红细胞。多数脂肪细胞呈椭圆形，少数因受挤压或自然呈不规则外形，胞内脂肪滴具有一定的透明度和折光度，受光源条件限制，难以观察到细胞核。A图中部较粗的管道为肠系膜淋巴管，被箭头所示的4段微血管环绕。B图下方圆圈所示为游离的圆形脂肪滴，可能是制片过程中按压盖玻片致使部分脂肪细胞破裂而产生。C.淋巴管两侧的脂肪细胞（400×）。该图容易造成脂肪细胞围绕淋巴管生长的假象，实际上，淋巴管两侧的脂肪细胞中均有微血管穿过。D图为A图右半部分局部放大。

实验总结：

由于实验用小白鼠体内脂肪含量存在个体差异，部分小鼠肠系膜血管周围脂肪层较厚，难以观察到清晰的毛细血管和单层脂肪细胞。所以，为保证实验效果，取材时应挑选身材偏瘦和个体偏小的小鼠，所得肠系膜应尽量完全伸展开。根据经验，容易观察到单层脂肪细胞的部位是肠系膜靠近小肠的边缘部分和肠系膜中央血管周围的微血管分支（图1-A）。70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液染料浓度有限，染色时应使肠系膜与苏丹Ⅲ染液充分接触，并随时补加染液以使脂肪细胞充分着色。