血型正反定型不一致处理技巧

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优点
操作简单 费用低廉
试管法
优点
反应充分 快速、准确 结果可靠 适用于所有血型血清学 试验 对于有疑问的血型均需 转入试管法处理
缺点
反应不充分 易污染 边缘易干涸,造成假阳性
缺点
不适用于批量检测
血型鉴定方法
柱凝集法
ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶(或玻璃微珠)颗 粒和抗A、抗B、抗D标准血清 如果红细胞表面存在A或B或D抗原,就会与对应的抗体发 生凝集反应 凝胶(或玻璃微珠)颗粒具有分子筛的作用,可以阻滞凝集 的红细胞在离心力的作用下通过凝胶(或玻璃珠)颗粒,使 其悬浮在凝胶(或玻璃珠)颗粒中 未凝集的红细胞则可以通过凝胶(或玻璃微珠)颗粒间的微 小空隙到达微管底部 反定型将患者血清与标准红细胞分别加入微柱孔内,其反应 原理同正定型
准确定型
必须进行正反定型
并且正反定型的结果必须相互对应 一致,符合Landsteiner规则
血型鉴定方法
正定型(检测抗原) 反定型(检测抗体)
红细胞悬液+标准血清 患者血清+标准反定红细胞
血型
抗A + + -
抗B + +
A细胞 + +
B细胞 + + O AB A B
血型鉴定方法
玻片法/纸板法/瓷板法
同A亚型和B亚型的血清学特点 不同之处:与抗H的凝集强度弱,呈w/0,同A1B
ABO血型系统抗原抗体简介
ABO血型系统抗原抗体简介
B(A)或A(B)表型
B型糖基转移酶在某些条件下可以合成A物质
A1型糖基转移酶也能合成B物质
A型和B型糖基转移酶的叠盖功能
cisAB
两条染色体相邻的基因交换,产生两种转移酶 A和B基因的一个基因突变,只能产生一种酶,同时催化A和B抗
Ay表现型与Am相似 与同样的血清孵育时,Ay上放散下来的抗A较Am少 Ay比Am分泌型唾液中A物质含量更少
ABO血型系统抗原抗体简介
B亚型血清学特征
抗血清
-A -B -AB -H A1
试剂红细胞
A2 B O
唾液
(分泌型)
B3
Bend Bx Bel Bm
0
0 0 0 0
mf
mf w 0 -/w
Oh
Om源自文库 Amh Bmh
0
0 w 0
0
0 0 w
0
0 w w 0 0
0
0 0 0
4+ 4+
4+ 4+ w 0
4+
4+ 4+ w
3+
w w w
H A/H B/H
4+ 3+
ABO血型系统抗原抗体简介
ABO血型系统抗原
存在方式
颗粒性抗原(膜抗原):存在于红细胞膜上 可溶性抗原(型物质):存在于分泌型人群的体液中(如唾液)
由于新生儿红细胞上针对糖苷转移酶的底物少,只有约成人的 1/4,造成ABO血型抗原较成人弱 新生儿出生时,一般没有抗-A、抗-B 不断地接受外来抗原免疫,逐渐产生抗-A、-B和抗-A、B 新生儿IgM ABO抗体出生3—6个月才合成
血液病患者
急性白血病患者会导致部分血型抗原表达不全
原的产生
ABO血型系统抗原抗体简介
cisAB和B(A)
cisAB的A抗原接近正常,B 抗原较正常弱很多; B(A)的B抗原接近正常,A抗原弱很多。 cisAB或B(A)血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体 cisAB与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。 带有cisAB或B(A)等位基因的个体,若与O型血的人(基因型 O / O)生育,子女的血型可能表现为AB型或O型,而不像通常 AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。 血清学方法判断为AB亚型,需分子生物学验证
正反定型不一致原因分析
检查操作 程序
漏加试剂 耗材效期 离心力 污染 记录错误
检查标本质 查阅相关信 试管法复查 量 息
溶血 乳糜 凝块 黄疸 蛋白析出 血液稀释 诊断 输血史 妊娠史 移植史 初检血型 细胞浓度 手法轻柔 镜检
正反定型不一致原因分析
正定型凝集强度较弱(<3+)
新生儿检查正定型
产生时间
新生儿出生时理论上无ABO抗体
3至6月后开始产生抗体 5~10岁时抗体水平达到高峰,并延续多年
老年后,随年龄增大而降低
血型鉴定方法
ABO血型鉴定
正定型
在A和/或B抗原
单独的正定型或反定型都 用抗-A和抗-B检测红细胞上是否存 不能准确鉴定血型
反定型
用已知的A1和B型红细胞检测血清 或血浆中的抗A和或B抗体
血型鉴定方法
柱凝集法
优点
标准化程度高 重复性强 试验结果准确可靠 标本用量少 仪器检测可拍照存档 便于查找结果,提供法律证据
缺点
抗蛋白干扰能力较差 对细胞浓度要求较高
血型鉴定方法
微孔板法
聚氯乙烯(PVC)或聚苯乙烯(PS)制成的U型 底微板 在其孔中添加受检者红细胞悬液和标准血清(或 受检者血浆和反定红细胞) 经室温孵育后,振荡、离心 平铺于微孔底部为阳性者;在微孔底部聚集成纽 扣状为阴性 优缺点
血型鉴定判断标准
4+ 红细胞凝集成一大块, 液体背景透明,无游离 红细胞
3+ 一个大凝块,周围有 少量小凝块或数个大凝 集块,液体背景透明, 无游离红细胞
血型鉴定判断标准
2+ 有很多小凝集 块,液体背景透明, 无游离红细胞
2+
1+
3+
1+ 有许多很小的 凝集块,肉眼可见, 液体背景不透明, 有游离红细胞
B型 AB型 O型
A
B AB H
抗-B
抗-A 无 抗-AB
A/A或A/O
B/B或B/O A/B O/O
ABO血型系统抗原抗体简介
H基因: 遗传产生α2-L-岩藻糖基 转移酶,将岩藻糖基转 移到支链末端的半乳糖
上形成H抗原
ABO血型系统抗原抗体简介
A基因
产物:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 功能:从尿苷二磷酸(UDP)-N-乙酰氨基半乳糖转移一个N-乙 酰氨基半乳糖到H物质的岩藻糖化半乳糖基上
mf
0 1-3+ 0 -/w
4+
4+ 4+ 4+ 4+
4+
4+ 4+ 4+ 4+
3+
4+ 3+ 4+ 3+
0/w
0/w w 0/w 0
0
0 0 0 0
B/H
H H H B/H
ABO血型系统抗原抗体简介
A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、 ABm、ABel、Abend…
血型鉴定判断标准
4+ 红细胞全部凝集在微柱顶部 3+ 凝块绝大部分在微柱顶部,微柱的上1/2处有少量凝集红细胞存在 2+ 凝块大部分在微柱的中部,少部分在微柱中下部 1+ 凝块大部分在微柱底部,少部分在微柱下1/2处 +/- 凝块绝大部分在微柱底部,在微柱下1/3处有极少数散在红细胞凝块 - 凝块清楚的沉淀在微柱底部,微柱内无任何凝块 溶血 微柱内无游离或凝集的红细胞,呈清澈透明红色 双群 凝集红细胞位于微柱顶部和未凝集红细胞位于微柱底部
适用于批量检测 需要专用的仪器设备
血型鉴定方法
试管法血型操作技巧
红细胞浓度约为3%-5%(1ml生理盐水+1d压积红细胞)
正定型:1d标准血清+1d患者红细胞(3%-5%)
反定型:1d试剂红细胞+2d患者血清 离心力:1000g,15s 结果判读:用液体轻轻冲刷细胞扣边缘,仔细观察细胞扣的变化 边缘齐整脱落,为阴性
ABO血型系统抗原抗体简介
获得性B
表现在A型红细胞上 可能减弱A抗原的抗原性 获得性B消失后,红细胞A抗原性增强
唾液中只含有A和H抗原
PH≤6时,凝集消失
ABO血型系统抗原抗体简介
孟买型和类孟买型
抗血清 -A -B -AB -A1 -H 试剂红细胞 A1 A2 B O 唾液 (分泌型)
形成时间
胚胎期抗原产生 出生时已经存在,但较成人弱 出生三月时与成人基本相同 以后逐步增强到成人水平
ABO血型系统抗原抗体简介
ABO血型系统抗体
存在形式
A型与B型人以IgM为主,IgG很少 O型人含有抗A、抗B和抗AB,以IgG为主,IgM很少 AB型人既无抗A也无抗B
具体描述
红细胞凝集成一大块,液体背景透明,无游离红细胞 数个大凝集块,液体背景透明,无游离红细胞 有很多小凝集块,液体背景透明,无游离红细胞 有许多很小的凝集块,肉眼可见,液体背景不透明,有游离红细胞 微小的凝集块,肉眼很难看清,需要用显微镜观察;镜下可见数个 红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞 游离红细胞与凝集红细胞同时存在,试管法呈“油煎蛋样”;镜下 可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍呈分散分布 红细胞崩解,呈红色透明外观 无凝集,无溶血,完全都是游离红细胞
B基因
产物:α1,3-D半乳 糖基转移酶 功能:从UDP-半乳 糖转移一个D-半乳糖 到H物质的岩藻糖化 半乳糖基上
ABO血型系统抗原抗体简介
A和B基因是显性基因 O型基因是隐性基因 基因型相同血型一定相同 血型相同基因型不一定相同 血型(表现型) A B AB O 基因型 AA, AO BB, BO AB O
血浆中含高浓度A或B物质中和抗体试剂
洗涤患者红细胞后复查
正反定型不一致原因分析
正定型凝集强度较弱(双群)
输注不同型红细胞
到达输入红细胞存活期后消失 查询既往检查结果验证
异基因移植后
患者处于血型转换期 一般至患者自身红细胞生成结束后消失,也可能持续存在 参照病历检查记录,明确供受者血型
边缘呈不规则形状脱落,如月牙边,锯齿等,为阳性
强度判断:离心完后立即看结果,以细胞扣刚刚脱落完时状态, 判断强度
血型鉴定判断标准
何谓有疑问的血型?? 正定型与反定型结果不一致 正定型
凝集强度<3+ 质控孔阳性
反定型
凝集强度<2+ 不该凝集的一端出现任意凝集强度 O型反定强度不平行
抗血清
-A -B -AB -A1 -H A1
试剂红细胞
A2 B O
唾液 (分泌 型) A/H A/H
A1 A2
4+ 4+
0 0
4+ 4+
2+ 0
W/0 3+
0 0/W
0 0
4+ 4+
0 0
ABO血型系统抗原抗体简介
抗血清 -A A3 Aend mf mf -B 0 0 -AB mf mf -A1 0 0 -H 3+ 4+ 试剂红细胞 A1 0/w 0/w A2 0 0 B 4+ 4+ O 0 0 唾液
血型鉴定判断标准
溶血 红细胞崩解 呈红色透明外观
双群 游离红细胞与凝集红细胞 同时存在,试管法呈“油 煎蛋样”;镜下可见少数 红细胞凝集,而绝大多数 红细胞仍呈分散分布
血型鉴定判断标准
缗钱状凝集 镜下红细胞 凝集状态 阴性
真凝集
血型鉴定判断标准
玻片法/纸板法/试管法凝集强度判断 反应强度
4+ 3+ 2+ 1+ ± 混合外观 溶血 阴性
血型正反定型不一致处 理技巧
2016年11月15日 马春娅
主要内容
ABO血型系统抗原抗体简介
血型鉴定方法 血型鉴定强度判定标准 血型正反定型不一致原因分析 案例介绍
ABO血型系统抗原抗体简介
ABO血型发现者:Karl Landsteiner,1900年
血型 红细胞上抗原 血清中的抗体 基因型
A型
(分泌型)
A/H H
出现双群时,要结合临床,由简至难排查:如白血病、骨髓移植、 不同型输血等
A3凝集细胞占多数,游离细胞占少数; Aend凝集细胞占少量,需多次离心才能被发现;
ABO血型系统抗原抗体简介
抗血清 -A Ax Ael Am w 0 +/w -B 0 0 0 -AB 1+-3+ 0 +/w -A1 0 0 0 -H 4+ 4+ 4+ A1 w w 0 试剂红细胞 A2 0/w 0/w 0 B 4+ 4+ 4+ 唾液 O (分泌型) 0 0 0 Aw/H H A/H
A3或B3亚型 嵌合体
正反定型不一致原因分析
正定型凝集强度较弱(<3+或dp)
ABO亚型
血清学检测 – 应用人源血清 – 更换单克隆试剂血清 – 加做抗A1,抗H,抗AB,A2细胞,O细胞 – 抗H反应强度:O> A2 > A2B >B> A1 > A1B – 4℃加强,需做对照 吸收放散 – 人源血清 – 不是所有单克隆血清都适宜做吸收放散 唾液型物质试验
ABO血型系统抗原抗体简介
A1与A2量的差异
A1:8-12× 105
A2:1-4×105
A1B:5-9×105
A2B:1×105
A1和A2 质的差异
约有2%A2个体产生抗A1
约有25%A2B个体产生抗A1
ABO血型系统抗原抗体简介
ABO血型系统抗原抗体简介
A1和A2
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