细胞生长曲线的测定

细胞生长曲线的测定
一：背景与原理
生长曲线是测定细胞生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。

一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后渡过长短不同的潜伏期，即进入快速生长的指数生长期。

在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。

为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，需连续对细胞进行计数。

通常计数6天。

为精确起见，一般每次实验设3个平行重复。

【晶莱生物】
二：材料、试剂与仪器
1. 实验材料
Hela细胞系。

2. 实验试剂
DMEM培养基（青霉素，链霉素，10%血清），0.25%胰蛋白酶溶液，台酚蓝染液。

3. 实验仪器
超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，微量移液器，血细胞计数板，培养瓶，离心管，移液管，废液缸，盖玻片，24孔板。

三：方法与步骤
1.取生长良好的细胞，用培养基制成细胞悬液后计数。

根据细胞计数结果按5×104/mL作传代培养接种于24孔板中，共接种21孔细胞。

1 ml/孔。

余下三孔可设传代培养的对照。

2.24h后每天记录细胞数目，每次取3孔细胞，分别进行计数。

计算平均值。

连续计数7d。

细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基，混匀制成细胞悬液。

取少量悬液与台酚蓝1:1混合。

取一干净的血细胞计数板，盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。

注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。

3.低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。

找出计数板上的方格，计算四角大格内总细胞数，压大格线者只计左侧和上方，不计右侧和下方
细胞悬液中细胞密度计算公式为：细胞数/mL=（四角大格内细胞数/4）×104×2
4.根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/mL）为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。