破伤风介绍

破伤风类毒素培养设备
破伤风类毒素和破伤风抗毒素
• 破伤风类毒素是用来预防破伤风的一种免疫疫苗。为了防 止破伤风病的发生，医生给病人注射一定量的破伤风类毒 素，从而达到预防破伤风病的目的。
• 而破伤风抗毒素是用对破伤风病具有免疫力的人或动物血 清经加工精制而成的免疫抗体，注射到人体后，可直接对 破伤风起到抵抗的作用，但这种抗毒素是被动的，而且在 体内只能维持很短时间，因此，最根本的还是应该注射破 伤风类毒素，以使体内产生自动免疫抗体，从而达到长久 的预防皮伤风的目的。
1926： Ramon和Zcokker用破伤风类毒素 成功地给人进行了免疫，从而开创了类毒
素预防免疫的新时代。
破伤风类毒素的概念
• 破伤风类毒素: 是一种用于破伤风 病的自动免疫制剂， 是由产毒力高的破 伤风梭菌培养液经 福尔马林脱毒后精 制或毒素精制后个 脱毒而成的。
破伤风梭菌
破伤风类毒素制造工艺
• 如果人体未接种过破伤风类毒素而发生外伤，或是刚刚注射破伤风类 毒素而自身尚产生免疫抗体时发生外伤，为防止感染破伤风，应首先 注射破伤风抗毒素，以使被动免疫和自动免疫衔接起来，从而达到预 防破伤风的目的。若已经注射过破伤风类毒素的人类发生外伤后，没 有必要再注射破伤风抗毒素，因为做为类毒素的抗原和抗毒素的抗体 同时注射后也会发生拮抗作用而使相互作用降低，失去免疫效果。
4.控制、解除肌肉强直性收缩：可用冬眠灵或苯巴 比妥 钠，１０％水合氯醛，安定，杜冷丁等。 抽搐严重时可用硫喷妥纳液体静注。
5.预防性气管切开：有呼吸困难时应用，切开后应 加强 护理，及时吸痰。
6.抗生素(头孢唑啉钠)的应用。 7.全身支持疗法
破伤风类毒素的发展历史
1884： Nicolarier通过动物实验发现了破伤风与 泥土中的细菌有关。
破伤风的治疗
1.单间隔离，加强护理，减少刺激，严防交叉感染。 2.伤口处理，彻底清创，用双氧水或１:１０００的
高锰酸钾液体冲洗，或湿敷伤口，开放伤口，绝 禁缝合。伤口已愈合，一般不需清创。 3.破ｕｍ伤， ｌ风或 静抗５ 滴毒万 。血加 以清入后的５每应％日用葡肌：萄注Ｔ糖５．溶０Ａ液０．５０Ｔ０-１１０００-０１-２０００００万０单 位必要时鞘内注射，人体破伤风免疫球旦白也可 应用，免于皮试。
破伤风介绍
• 破伤风梭菌是一种革兰氏阳 性厌氧芽胞杆菌，广泛存在 于泥土、粪便之中，对环境 有很强的抵抗力。创伤时其 可污染深部组织，若伤口较 深，又有坏死组织，局部缺 血、缺氧，就形成了适合细 菌生长繁殖的环境。
破伤风梭菌
• 破伤风防治原则
• 由于破伤风痉挛毒素能迅速与神经组织发生不可逆性结合，故一旦发 病治疗困难，所以预防尤为重要。如遇到可疑伤口应做到清创、扩创， 同时使用大剂量青霉素抑制细菌繁殖。用破伤风抗毒素对患者进行紧 急预防，对已发病的人要进行特异性治疗。
（3）除菌过滤：将精制类毒素稀释、调整到适当 浓度（即含万分之一硫柳汞、0.85%NaCl),用 5%NaOH调pH至6.8~7.2。使用0.22um的微孔虑膜， 除菌过滤分装。
（4）吸附精致破伤风类毒素的制备:将类毒素吸附 于Al(OH)3以增强类毒素的免疫效果和减轻接种副反 应.
（5）精致类毒素的吸附:在无菌条件下,按7Lf/ml精 致类毒素加入吸附剂中,补加1/100,硫柳汞防腐剂,使 其最终含量为1/10 000.同时补加1/15mol/L,pH6.6磷 酸盐缓冲,使其含量达到1/300mol/L,搅拌均匀后分装.
滤液
0.10g/ml 硫酸铵
沉淀
用注射用水溶解
过滤
滤液
超滤
去除硫酸铵
滤液
除菌过滤
pH6.8~7.2,0.22um 的微孔滤膜
精制类毒素溶液
Al(OH)3吸附 吸附精制破伤风类毒素 包 装 精制类毒素制剂
发酵工艺要点
• 1.种子: 应选用产毒效价高，免疫力强的破伤风菌株。 • 2.产毒培养基：国内多采用以蛋白质水解为基础，再添加
• 破伤风类毒素是用破伤风菌经减毒加工处理后制成的疫苗， 注射到人体后需要经过一定时间后人体才会产生自动
1889： Kitasato用减弱的毒素免疫家兔制备出破 伤风抗毒素，证明了给动物注射培养物的滤液 而产生破伤风的症状，是因为有一种毒素的存 在
1889： Von behring和Kitasato用抗毒素治疗人的 破伤风，证明对有明显破伤风症状的患者，基 本上是无效的
1923： Ramon报告用甲醛和热处理的方 法，制备出了有抗原性的类毒素
1. 发酵 2. 除菌过滤
1. 甲醛脱毒
3.脱毒和精制
2. 超滤浓缩 3. 硫酸铵沉淀法、超滤精制
1. 微孔膜除菌过滤
4.除菌及吸附
2. Al(OH)3吸附
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脱毒、浓缩和精制工艺
1.脱毒、浓缩和精制工艺流程
发酵滤液
脱毒
0.36%甲醛，pH 中性，37℃,30d
原制类毒素
超滤浓缩
浓缩液
0.16g/ml 硫酸铵沉淀
（1）菌种：国内使用的生产菌种为罗马尼亚 L58株，菌号为64008
（2）发酵工艺流程：
菌种
传代 33~34℃.48h
活化菌种
扩陪 33~35℃.
发酵种子
发酵 33~35℃.
发酵液
除菌过滤
滤液
破伤风工艺类毒素制造
• 1.
破 伤 风 类 毒 素 制 造 工 艺
1.菌种传代
1. 传代
2. 扩培 2.培养产毒及收获毒素
1.脱毒、浓缩和精制工艺要点
（1）脱毒：收获的毒素经脱毒后即为类毒素，脱毒 一般用0.3%~0.4%的甲醛溶液。此外pH、温度及脱 毒时间等均影响脱毒效果。现采用加入0.36%的甲 醛、pH中性、37℃脱毒。
(2)浓缩和精制 ：一采用超滤浓缩与硫酸铵沉淀相 结合的方法精制破伤风类毒素，即超滤、硫酸铵 沉淀、超滤三步法，可有效地提高破伤风类毒素 的制品质量。
氨基酸及维生素等，在维持一定的产毒水平下，适当加深 水解，同时加入少量的甘油及炭末，以增加厌氧环境、稳 定毒素和吸附培养过程产生的有害物质，从而提高产毒水 平获取高价毒素。 • 3.培养、产毒和收获毒素：一般采用培养罐深层培养，培 养基中加炭末、甘油等以利破伤风菌生长和产毒，在培养 过程利用平压通气的方法排出破伤风菌生长过程中产生的 H或2S低和于CO322气℃体产。毒培水养平温都度会必大须幅严度格降控低制。在34℃，高于35 ℃