【CN110117310A】一种达托霉素的纯化方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910309089.2

(22)申请日 2019.04.17

(71)申请人 华北制药华胜有限公司

地址 052160 河北省石家庄市经济技术开

发区扬子路8号

(72)发明人 赵辉　张志江　王杨　张义　

栗婷婷　杨丰　张丽娟　谷岩翡　

刘翠莉　齐立辉　王健　

(74)专利代理机构 石家庄众志华清知识产权事

务所(特殊普通合伙) 13123

代理人 张明月

(51)Int.Cl.

C07K 7/08(2006.01)

C07K 1/34(2006.01)

C07K 1/18(2006.01)

C07K 1/22(2006.01)C07K 1/36(2006.01)

(54)发明名称

一种达托霉素的纯化方法

(57)摘要

本发明公开了一种达托霉素的纯化方法，属

于药物纯化技术领域，

包括如下步骤：1）溶解；2）吸附；3）解析；4）收集；5）纳滤浓缩；6）结晶；7）抽

滤：8）冻干，最终得到达托霉素纯品。本发明的纯

化方法显著提高了达托霉素纯品的纯度，并且纯

化周期短、溶媒使用量低；纯化过程所用大孔吸

附树脂再生方法简单，纯化过程使用先进的自动

化设备，

降低了操作人员的人数及操作强度。权利要求书2页 说明书8页 附图3页CN 110117310 A 2019.08.13

C N 110117310

A

权　利　要　求　书1/2页CN 110117310 A

1.一种达托霉素的纯化方法，纯化原料是由达托霉素发酵液制备得到的达托霉素钙盐粗粉，其特征在于包括如下步骤：

1）溶解：将达托霉素钙盐粗粉溶于纯化水中，然后加入饱和磷酸氢二钠溶液得到溶解液；

2）吸附：向溶解液中加入助滤剂后进行过滤，得到澄清的滤液，再将滤液导入压缩后的大孔吸附树脂进行富集吸附，至大孔吸附树脂吸附饱和；

3）解析：先用纯水洗涤吸附饱和的大孔吸附树脂，待流出液无色时使用浓度为15～25％的乙醇溶液洗脱，至流出液无色，最后使用浓度为35～45％的乙醇溶液进行解吸；

4）收集：根据HPLC图谱收集出峰口大于92％的解吸液；

5）纳滤浓缩：检测收集到的解吸液，将效价大于1000 μg/mL的解吸液合并，进行超滤纳滤浓缩，得到浓缩液；

6）结晶：在浓缩液中加入饱和乙酸钙溶液作为结晶溶液进行结晶，再滴加乙醇溶液并搅拌得到混合溶液；

7）抽滤：将步骤6）混合溶液进行抽滤，然后用乙醇淋洗滤饼、干燥滤饼，得到达托霉素粉状物；用水溶解达托霉素粉状物，再用树脂进行脱盐得到脱盐液；

8）冻干：冻干脱盐液，最终得到达托霉素纯品。

2.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：达托霉素钙盐粗粉是由达托霉素发酵液依次经过滤、阴离子树脂吸附解吸、大孔吸附树脂吸附解吸、浓缩后与乙酸钙反应得到。

3.根据权利要求2所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：达托霉素钙盐粗粉制备过程中用到的阴离子树脂的型号为D152、110或XRPD30中的任一种，大孔吸附树脂的型号为HZ801、XAD1600或 XRP-S3#中的任一种。

4.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤1）中加纯化水溶解至浓度为3～4万μg/mL，加入饱和磷酸钙溶液至体系中达托霉素与磷酸氢二钠摩尔比为1:4.5～5；步骤2）中助滤剂为珍珠岩，珍珠岩的加入量为溶解液重量的1～1.5％。

5.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤2）中大孔吸附树脂的型号为HZ801、XAD1600或XRP-S3＃中的任一种，大孔吸附树脂压缩使用DAC动态轴向压缩技术进行，大孔吸附树脂压缩后体积减小20～30％；吸附的流速为0.5～1BV/h，吸附出口的达托霉素浓度超过100μg/mL时判定为吸附饱和。

6.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤3）中用纯水洗涤时流速为4～8BV/h，解吸时的流速为3～4BV/h。

7.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤4）收集解吸液完毕后，对树脂进行再生处理，具体步骤为先用浓度为70～80％的乙醇溶液洗涤树脂，乙醇溶液的用量为2BV树脂体积，再用纯化水洗涤，待出口处乙醇的含量小于5％时结束。

8.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤6）中饱和乙酸钙的加入量按浓缩液中每克达托霉素加入4.5克乙酸钙，乙醇溶液的浓度为95％，乙醇溶液的用量为结晶溶液体积的6～10倍，搅拌时间为大于12h。

9.根据权利要求1所述的一种达托霉素的纯化方法，其特征在于：步骤7）中用水溶解达托霉素至6～10万μg/mL，脱盐所用树脂为1*25的树脂，脱盐时体系pH维持在3.2～3.6。

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