【CN109722447A】一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法【专利】
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910177732.0
(22)申请日 2019.03.10
(71)申请人 华中农业大学
地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山
街1号
(72)发明人 王鹏蔚 宫金礼 田真 程运江
(74)专利代理机构 武汉泰山北斗专利代理事务
所(特殊普通合伙) 42250
代理人 程千慧
(51)Int.Cl.
C12N 15/82(2006.01)
(54)发明名称
一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方
法
(57)摘要
本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种农
杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，包括以下
步骤：S1.将含有目的基因的表达载体转化农杆
菌，并制备农杆菌菌液；S2.农杆菌侵染：将制备
的农杆菌菌液注入柑橘果实中；S3.将注入农杆
菌菌液的柑橘果实放置一段时间后检测目的基
因的表达。操作简单易控，周期短，转化效率高，
表达强度好，成本低，可以用于进行蛋白的亚细
胞定位。
权利要求书1页 说明书4页序列表1页 附图3页CN 109722447 A 2019.05.07
C N 109722447
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109722447 A
1.一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将含有目的基因的表达载体转化农杆菌，并制备农杆菌菌液；
S2.农杆菌侵染：将制备的农杆菌菌液注入柑橘果实中；
S3.将注入农杆菌菌液的柑橘果实放置一段时间后检测目的基因的表达。
2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，所述柑橘果实选用绿熟期柑橘果实。
3.根据权利要求2所述的一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，所述柑橘果实选择金桔。
4.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，所述步骤S2中用注射器将农杆菌菌液注入柑橘果实中，菌液的注射量为0.2～0.5mL，注射器针头的长度为0.1～0.3cm。
5.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，所述表达载体为带有荧光蛋白的融合表达载体。
6.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，步骤S2中将制备的农杆菌菌液与辅助质粒P19菌液等量混合后注入柑橘果实中。
7.根据权利要求1-6任一项所述的农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，其特征在于，所述农杆菌为农杆菌EH105、农杆菌GV3101或农杆菌C58C3。
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