参菊洗剂体外抑菌作用
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· 1032·
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Herald of Medicine Vol. 34 No. 8 August 2015
参菊洗剂体外抑菌作用
刘文， 谭璐， 张为， 王树平 张广求，
（ 湖北省黄冈市中心医院药剂科， 黄冈
摘 用。结果 要 目的 研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法
*
438000）
采用 琼 脂扩散纸 片 法 测定抑 菌圈直径， 采用 液 体 培养 液 连
［5 ］
· 1033· 匀涂布于上述琼脂培养液平板表面。 金黄色葡萄球 菌、 铜绿假单胞菌、 大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌菌液各 H 琼脂培养液平板 27 个， 涂布于 M共 108 个， 白念珠 菌菌液涂布于改良马丁琼脂培养液平板 27 个。 并将 各实验菌均分为 5 组， 即参菊洗剂或市售某妇科洗液 100， 50 mg · mL －1 的溶液组、 原液组及含生药 200， 无 菌 0．9% 氯化钠溶液组。用无菌小镊子夹取“2．3 ” 项下 制备的药敏纸片， 按顺时针方向， 每平板等距均匀贴 6 片， 各纸片中心距离相距 ＞25 mm， 同时纸片距平板内 MH 琼脂培养液平板 缘 ＞15 mm， 盖上平皿盖。 倒置， 置 35 ℃ 培养 24 h， 改良马丁琼脂培养液平板置 25 ℃ 培养 48 h。取出平板， 在透射光上用游标卡尺量取各 纸片的抑菌圈直径， 包括完全抑菌带和迟生长带的直 径， 抑菌圈边缘以肉眼不可见细菌或真菌明显生长为 限。结果显示， 不同浓度的参菊洗剂在体外对金黄色 葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌 和白念珠菌等 5 种菌株的抑菌圈直径， 与相同浓度的 市售某妇科洗液比较， 差异有统计学意义 （ P ＜ 0．05 ） ， 差异有统计学意义 与无菌 0．9% 氯化钠溶液组比较， （ P ＜0．01） ， 提示参菊洗剂具有较好的体外抑菌作用。 见表 1。 2． 5 最低 抑 菌 浓 度 ( minimum inhibitory concentration， MIC) 的测定 采用液体培养液连续稀释法， 以市售某妇 科洗液作为阳性对照药。按无菌操作法， 取 13 mm × 100 mm的灭菌带棉塞的试管 11 支， 编号， 排列在试管架 。 MH （ 上 于每管中先加入 肉汤培养液 白念珠菌用改良 马丁培养液） 2．0 mL。于第 1 管中加入参菊洗剂或市售某 妇科洗液原液 2．0 mL， 混匀后吸取 2．0 mL 加入第 2 管中， 混匀后再吸取 2．0 mL 加入第 3 管中， 如此连续倍比稀释 1/ 至第 9 管， 混匀后自第 9 管吸取2．0 mL 弃去， 使成 1/2， 4， 1/8， 1/16， 1/32， 1/64， 1/128， 1/256， 1/512 的各种药液浓 135．00， 67．50， 度。此时， 各管参菊洗剂浓度依次为270．00， －1 33．75， 16．88， 8．44， 4．22， 2．11， 1．06 mg·mL ， 市售某妇科洗 250．00， 125．00， 62．50， 31．25， 15．62， 液浓度依次为 500．00， －1 7．81， 3．91， 1．95 mg·mL 。第 10 管不加受试药液作为阳 性对照， 以便观察培养液是否适合细菌或真菌生长； 第 11 管加受试药液2．0 mL， 混匀后吸取2．0 mL弃去， 不加菌液， 作为阴性对照， 以便观察受试药液是否被污染。分别取 “ 2．2” 项下制备的细菌或真菌菌液50 μL， 依次加入到上述 第 1～10 管中。充分混匀后， 置 35 或25 ℃ 培养24 h， 观察 ， ， 有无细菌或真菌生长 如无法判断 则将可疑管接种到相 应琼脂培养液上， 置 35 或25 ℃ 培养 24 h， 以受试药液最 低浓度管中无细菌或真菌生长者， 为该试验菌的最低抑 菌浓度。每菌株 2 管， 平行操作 3 次， 以 2 或 3 次相同结
续稀释法测定最低抑菌浓度( MIC) ， 采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度( MBC) ， 并与市售某妇科洗液比较抑 菌 作 参菊洗剂对 5 种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液， 差异有统计学意义( P ＜0．05) ; 参 67． 50， 67． 50， 菊洗剂对金黄色葡萄球菌、 铜绿 假单 胞 菌、 大 肠埃希菌、 枯草 芽孢杆菌、 白 念珠菌 的 MIC 分 别为 33． 75， 67．50， 33．75 mg·mL －1 ; 参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、 铜绿假单 胞 菌、 大 肠埃希菌、 枯草 芽孢杆菌、 白 念珠菌 的 MBC 分 别 67．50， 67．50， 135．00， 33．75 mg·mL －1 。结论 为33．75， 关键词 中图分类号 Ｒ286; Ｒ978 文献标识码 B 参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。 文章编号 1004－0781( 2015) 08－1032－04 参菊洗剂; 琼脂扩散纸片法; 液体培养液连续稀释法; 琼脂培养液平板法; 抑菌作用， 体外
医药导报 2015 年 8 月第 34 卷第 8 期 菌氯化 钠蛋 白 胨 缓 冲 液 （ 均 按《中 华 人 民 共 和 国 药 ［4 ］ 典》 方 法 配 制） ； 市 售 某 妇 科 洗 液 （ 含 生 药 量 为 1 g·mL －1 ） ； 参菊洗剂 （ 含生药量为 0．54 g · mL －1 ， 黄 冈市中心医院自制， 批准文号： 鄂药制字 Z20110230， 131221， 140318） 。 规格： 每瓶250 mL， 批号： 130804， 2 方法与结果 2．1 采用比浊法控制菌液的 浓度 。 量 取 1． 175% 氯 化 钡 （ BaCl 2 · H 2 O ） 溶 液 0．5 mL， 置 100 mL 量瓶中， 加 1% 硫酸至刻度， 充分摇 0．5 麦氏比浊管的制备
压蒸汽灭菌器 （ 上海三申医疗器械有限公司 ） ； （ 0 ～ 150） mm × 0．02 mm 游标卡尺（ 上海九量五金工具有限 100 型电热干燥箱（ 武汉市武昌实验仪器 公司） ； KWY厂） ； 打孔器（ ф6 mm） 。 1． 2 培养液 水解酪蛋白琼脂培养液（ MH 琼脂培养 H 液） （ 批号： 20130818 ） 、 水解酪蛋白肉汤培养液 （ M肉汤培养液） （ 批号： 20130808 ） 、 改良马丁琼脂培养液 （ 批号： 20131117） 、 改良马丁培养液 （ 批号： 20140118 ） 均由北京奥博星生物技术有限责任公司生产 ； 蛋白胨 （ 批 号： 20130430 ） 、营 养 琼 脂 培 养 液 （ 批 号： 20130314） 、 营养肉汤培养液 （ 批号： 20131210 ） 均由北 京双旋微生物培养液制品厂生产； 0．9% 无菌氯化钠溶 AＲ， 液（ 上海化学试剂厂， 批号： 130622） 。 1．3 CMCC （ B ） 26003 ］ 、 菌株 金黄色葡萄球菌［ 铜绿 CMCC （ B ） 10104 ］ 、 CMCC （ B ） 假单胞菌［ 大肠埃希菌［
*
修回日期
2014－10－16
2013］ 湖北省黄冈市科技计划项目（ 黄科字［
44102］ 、 CMCC （ B ） 63501 ］ 、 枯草芽孢杆菌［ 白念珠菌 ［ CMCC （ F） 98001］ 0 均为第 代冷冻保藏菌株， 购自湖 北省食品药品监督检验研究院。 1． 4 稀释液及样品 0．9% 无菌氯化钠溶液、 pH7．0 无
Antibacterial Effect of Shenju Lotion in Vitro
ZHANG Guangqiu ， LIU Wen， TAN Lu，ZHANG Wei，WANG Shuping ( Department of Pharmacy ， Huanggang Central Hospital， Huanggang 438000，China)
平板法对参菊洗剂的体外抗菌活性进行了实验研究 ， 为临床应用提供科学依据， 现报道如下。 实验材料 1． 1 仪器 YC875S 医用净化工作台 （ 苏州净化设备 厂） ； SZK202 净 化 工 作 台 （ 蚌 埠 净 化 设 备 厂 ） ； 1 HHB11420 电热恒温培养箱 （ 湖北省黄石市医疗器械 1 多功能恒温箱 （ 上海医疗器械修理厂 ） ； 高 厂） ； DG收稿日期 基金项目 76 号） 张广求（ 1964－ ） ， 副主任药师， 男， 湖北黄梅人， Email： 研究方向： 医院药学、 药物分析。 电话： 0713 － 8625312， 作者简介 ccnpa@ 163．com。 2014－07－28
参菊洗剂是我院根据临床验方研制的中药制剂 ， 主要由苦参、 野菊花、 黄柏、 蛇床子等中药组成。 具有 消炎、 止痒、 除秽、 杀菌功效， 用于细菌性、 真菌性、 滴虫 性阴道炎的治疗， 具有较好的临床疗效。 为了进一步
［13 ］ ， 证实其抗菌、 消炎作用， 笔者参考有关文献 采用琼 脂扩散纸片法、 液体培养液连续稀释法和琼脂培养液
ABSTＲACT Objective To study the antibacterial effect of Shenju lotion in vitro． Methods The diameter of inhibition zone was determined by paperdisc agardiffusion method． Minimum inhibitory concentration ( MIC ) and Minimum bactericidal concentration ( MBC) was determined by culture medium dilution methodand agar medium plate method，respectively．Antibacterial effect was compared between Shenju lotion and city sale of the gynecological lotion． Ｒesults Inhibitory effects of Shenju lotion on 5 pathogenic strains were significantly better than that of city sale of the gynecological lotion at the same concentrations ( P＜0．05) ． MIC of Shenju lotion on Staphylococcus aureus，Pseudomonas aeruginosa，Escherichia coli，Bacillus subtilis and Candida albicans was 33．75，67．50，67．50，67．50 and 33．75 mg ·mL －1 ，respectively．MBC of Shenju lotion on Staphylococcus aureus，Pseudomonas aeruginosa，Escherichia coli，Bacillus subtilis and Candida albicans was 33． 75，67． 50，67． 50，135． 00 and 33．75 mg ·mL －1 ， respectively． Conclusion Shenju lotion has obvious bacteriostasis and sterilization effect． KEY WOＲDS Shenju lotion; Paperdisc agardiffusion method; Liquid culture medium dilution method; Agar medium plate method; Antibacterial effect，in vitro
源自文库
Herald of Medicine Vol. 34 No. 8 August 2015
参菊洗剂体外抑菌作用
刘文， 谭璐， 张为， 王树平 张广求，
（ 湖北省黄冈市中心医院药剂科， 黄冈
摘 用。结果 要 目的 研究参菊洗剂的体外抑菌作用。方法
*
438000）
采用 琼 脂扩散纸 片 法 测定抑 菌圈直径， 采用 液 体 培养 液 连
［5 ］
· 1033· 匀涂布于上述琼脂培养液平板表面。 金黄色葡萄球 菌、 铜绿假单胞菌、 大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌菌液各 H 琼脂培养液平板 27 个， 涂布于 M共 108 个， 白念珠 菌菌液涂布于改良马丁琼脂培养液平板 27 个。 并将 各实验菌均分为 5 组， 即参菊洗剂或市售某妇科洗液 100， 50 mg · mL －1 的溶液组、 原液组及含生药 200， 无 菌 0．9% 氯化钠溶液组。用无菌小镊子夹取“2．3 ” 项下 制备的药敏纸片， 按顺时针方向， 每平板等距均匀贴 6 片， 各纸片中心距离相距 ＞25 mm， 同时纸片距平板内 MH 琼脂培养液平板 缘 ＞15 mm， 盖上平皿盖。 倒置， 置 35 ℃ 培养 24 h， 改良马丁琼脂培养液平板置 25 ℃ 培养 48 h。取出平板， 在透射光上用游标卡尺量取各 纸片的抑菌圈直径， 包括完全抑菌带和迟生长带的直 径， 抑菌圈边缘以肉眼不可见细菌或真菌明显生长为 限。结果显示， 不同浓度的参菊洗剂在体外对金黄色 葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌 和白念珠菌等 5 种菌株的抑菌圈直径， 与相同浓度的 市售某妇科洗液比较， 差异有统计学意义 （ P ＜ 0．05 ） ， 差异有统计学意义 与无菌 0．9% 氯化钠溶液组比较， （ P ＜0．01） ， 提示参菊洗剂具有较好的体外抑菌作用。 见表 1。 2． 5 最低 抑 菌 浓 度 ( minimum inhibitory concentration， MIC) 的测定 采用液体培养液连续稀释法， 以市售某妇 科洗液作为阳性对照药。按无菌操作法， 取 13 mm × 100 mm的灭菌带棉塞的试管 11 支， 编号， 排列在试管架 。 MH （ 上 于每管中先加入 肉汤培养液 白念珠菌用改良 马丁培养液） 2．0 mL。于第 1 管中加入参菊洗剂或市售某 妇科洗液原液 2．0 mL， 混匀后吸取 2．0 mL 加入第 2 管中， 混匀后再吸取 2．0 mL 加入第 3 管中， 如此连续倍比稀释 1/ 至第 9 管， 混匀后自第 9 管吸取2．0 mL 弃去， 使成 1/2， 4， 1/8， 1/16， 1/32， 1/64， 1/128， 1/256， 1/512 的各种药液浓 135．00， 67．50， 度。此时， 各管参菊洗剂浓度依次为270．00， －1 33．75， 16．88， 8．44， 4．22， 2．11， 1．06 mg·mL ， 市售某妇科洗 250．00， 125．00， 62．50， 31．25， 15．62， 液浓度依次为 500．00， －1 7．81， 3．91， 1．95 mg·mL 。第 10 管不加受试药液作为阳 性对照， 以便观察培养液是否适合细菌或真菌生长； 第 11 管加受试药液2．0 mL， 混匀后吸取2．0 mL弃去， 不加菌液， 作为阴性对照， 以便观察受试药液是否被污染。分别取 “ 2．2” 项下制备的细菌或真菌菌液50 μL， 依次加入到上述 第 1～10 管中。充分混匀后， 置 35 或25 ℃ 培养24 h， 观察 ， ， 有无细菌或真菌生长 如无法判断 则将可疑管接种到相 应琼脂培养液上， 置 35 或25 ℃ 培养 24 h， 以受试药液最 低浓度管中无细菌或真菌生长者， 为该试验菌的最低抑 菌浓度。每菌株 2 管， 平行操作 3 次， 以 2 或 3 次相同结
续稀释法测定最低抑菌浓度( MIC) ， 采用琼脂培养液平板法测定最低杀菌浓度( MBC) ， 并与市售某妇科洗液比较抑 菌 作 参菊洗剂对 5 种病原菌株的抑菌作用明显优于相同浓度的市售某妇科洗液， 差异有统计学意义( P ＜0．05) ; 参 67． 50， 67． 50， 菊洗剂对金黄色葡萄球菌、 铜绿 假单 胞 菌、 大 肠埃希菌、 枯草 芽孢杆菌、 白 念珠菌 的 MIC 分 别为 33． 75， 67．50， 33．75 mg·mL －1 ; 参菊洗剂对金黄色葡萄球菌、 铜绿假单 胞 菌、 大 肠埃希菌、 枯草 芽孢杆菌、 白 念珠菌 的 MBC 分 别 67．50， 67．50， 135．00， 33．75 mg·mL －1 。结论 为33．75， 关键词 中图分类号 Ｒ286; Ｒ978 文献标识码 B 参菊洗剂具有较明显的抑菌和杀菌作用。 文章编号 1004－0781( 2015) 08－1032－04 参菊洗剂; 琼脂扩散纸片法; 液体培养液连续稀释法; 琼脂培养液平板法; 抑菌作用， 体外
医药导报 2015 年 8 月第 34 卷第 8 期 菌氯化 钠蛋 白 胨 缓 冲 液 （ 均 按《中 华 人 民 共 和 国 药 ［4 ］ 典》 方 法 配 制） ； 市 售 某 妇 科 洗 液 （ 含 生 药 量 为 1 g·mL －1 ） ； 参菊洗剂 （ 含生药量为 0．54 g · mL －1 ， 黄 冈市中心医院自制， 批准文号： 鄂药制字 Z20110230， 131221， 140318） 。 规格： 每瓶250 mL， 批号： 130804， 2 方法与结果 2．1 采用比浊法控制菌液的 浓度 。 量 取 1． 175% 氯 化 钡 （ BaCl 2 · H 2 O ） 溶 液 0．5 mL， 置 100 mL 量瓶中， 加 1% 硫酸至刻度， 充分摇 0．5 麦氏比浊管的制备
压蒸汽灭菌器 （ 上海三申医疗器械有限公司 ） ； （ 0 ～ 150） mm × 0．02 mm 游标卡尺（ 上海九量五金工具有限 100 型电热干燥箱（ 武汉市武昌实验仪器 公司） ； KWY厂） ； 打孔器（ ф6 mm） 。 1． 2 培养液 水解酪蛋白琼脂培养液（ MH 琼脂培养 H 液） （ 批号： 20130818 ） 、 水解酪蛋白肉汤培养液 （ M肉汤培养液） （ 批号： 20130808 ） 、 改良马丁琼脂培养液 （ 批号： 20131117） 、 改良马丁培养液 （ 批号： 20140118 ） 均由北京奥博星生物技术有限责任公司生产 ； 蛋白胨 （ 批 号： 20130430 ） 、营 养 琼 脂 培 养 液 （ 批 号： 20130314） 、 营养肉汤培养液 （ 批号： 20131210 ） 均由北 京双旋微生物培养液制品厂生产； 0．9% 无菌氯化钠溶 AＲ， 液（ 上海化学试剂厂， 批号： 130622） 。 1．3 CMCC （ B ） 26003 ］ 、 菌株 金黄色葡萄球菌［ 铜绿 CMCC （ B ） 10104 ］ 、 CMCC （ B ） 假单胞菌［ 大肠埃希菌［
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修回日期
2014－10－16
2013］ 湖北省黄冈市科技计划项目（ 黄科字［
44102］ 、 CMCC （ B ） 63501 ］ 、 枯草芽孢杆菌［ 白念珠菌 ［ CMCC （ F） 98001］ 0 均为第 代冷冻保藏菌株， 购自湖 北省食品药品监督检验研究院。 1． 4 稀释液及样品 0．9% 无菌氯化钠溶液、 pH7．0 无
Antibacterial Effect of Shenju Lotion in Vitro
ZHANG Guangqiu ， LIU Wen， TAN Lu，ZHANG Wei，WANG Shuping ( Department of Pharmacy ， Huanggang Central Hospital， Huanggang 438000，China)
平板法对参菊洗剂的体外抗菌活性进行了实验研究 ， 为临床应用提供科学依据， 现报道如下。 实验材料 1． 1 仪器 YC875S 医用净化工作台 （ 苏州净化设备 厂） ； SZK202 净 化 工 作 台 （ 蚌 埠 净 化 设 备 厂 ） ； 1 HHB11420 电热恒温培养箱 （ 湖北省黄石市医疗器械 1 多功能恒温箱 （ 上海医疗器械修理厂 ） ； 高 厂） ； DG收稿日期 基金项目 76 号） 张广求（ 1964－ ） ， 副主任药师， 男， 湖北黄梅人， Email： 研究方向： 医院药学、 药物分析。 电话： 0713 － 8625312， 作者简介 ccnpa@ 163．com。 2014－07－28
参菊洗剂是我院根据临床验方研制的中药制剂 ， 主要由苦参、 野菊花、 黄柏、 蛇床子等中药组成。 具有 消炎、 止痒、 除秽、 杀菌功效， 用于细菌性、 真菌性、 滴虫 性阴道炎的治疗， 具有较好的临床疗效。 为了进一步
［13 ］ ， 证实其抗菌、 消炎作用， 笔者参考有关文献 采用琼 脂扩散纸片法、 液体培养液连续稀释法和琼脂培养液
ABSTＲACT Objective To study the antibacterial effect of Shenju lotion in vitro． Methods The diameter of inhibition zone was determined by paperdisc agardiffusion method． Minimum inhibitory concentration ( MIC ) and Minimum bactericidal concentration ( MBC) was determined by culture medium dilution methodand agar medium plate method，respectively．Antibacterial effect was compared between Shenju lotion and city sale of the gynecological lotion． Ｒesults Inhibitory effects of Shenju lotion on 5 pathogenic strains were significantly better than that of city sale of the gynecological lotion at the same concentrations ( P＜0．05) ． MIC of Shenju lotion on Staphylococcus aureus，Pseudomonas aeruginosa，Escherichia coli，Bacillus subtilis and Candida albicans was 33．75，67．50，67．50，67．50 and 33．75 mg ·mL －1 ，respectively．MBC of Shenju lotion on Staphylococcus aureus，Pseudomonas aeruginosa，Escherichia coli，Bacillus subtilis and Candida albicans was 33． 75，67． 50，67． 50，135． 00 and 33．75 mg ·mL －1 ， respectively． Conclusion Shenju lotion has obvious bacteriostasis and sterilization effect． KEY WOＲDS Shenju lotion; Paperdisc agardiffusion method; Liquid culture medium dilution method; Agar medium plate method; Antibacterial effect，in vitro