壳寡糖分新检测的研究进展

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1 9。 O

阴 离 子 交 换柱 和 电化 学 检 测 器 配 合 使 用 也 是 壳 寡糖 检测 的 一种 常 用 方 法 , 该 方 法 灵 敏 度 高 ,样 品 用量 少 , 但 仪 器 昂 贵,操作条件 比较严格 。刘庆生等 “ 通过高效 阴离子交换色 谱 一 冲 安 培 检 测 (P E — A ) 合 使 用 ,直 接 进 行 检 测 低 浓 脉 HACPD 联 度 壳 寡 糖 的 定 量 分 析 ,分 析 了 聚 合度 为 卜6 壳寡 糖 ,并 且 得 的 到 清 晰 的 分 离 峰 。这 种 方 法 不 需 要 预 先衍 生就 能分 析 壳 寡 糖 , 不 仅 节 约 了 大 量 的 时 间 和 金 钱 ,而 且 避 免 了一 些 有 毒 的衍 生 试 剂 的 使 用 , 减少 了环 境 污 染 , 在 组 成 结 构 大 小 上 非 常 相 近 的 单 糖 也 可 得 到 很 好 的分 离 ,且 灵 敏度 很 高 , 检 测 限 量 可 达 到几 十 个 p / 水 平 。 gL 高效 液相 色 谱 法 虽 然 效 果 好 ,但 是它 需要 大 型 的仪 器 , 流动 相和 标 准 品 花 费 昂贵 ,对 于 一 般 的 实验 室 来 说 ,初 期筛 选 不 宜使 用 高 效 液 相 色 谱 法 。
【 中图 分 类 号 】T 1 Q9 7 【 献 标 识 码 】A 文 【 章编 号 】 10 —15 (o 1 5 0 0 — 2 文 0 8 1 1 1 ) — 19 0 2 o 采 用 浸 渍 法 显 色 。 陈 小 娥 ,方 旭 波 等 通 过 系 统研 究 ,建 立 了 壳 低 聚 糖 的 薄 层一 比色 分 析 法 ,展 开 剂 为 正丁 醇 : : 水 乙酸 : 氨 水 = 0:1 1 2 展 开 温 度 为 2 ℃ , 为 壳低 聚 糖 的生 产 2 0: 0: ; 5 和 应 用 提 供 了一 种 经 济 、 简 便 的 分 析 方 法 。 王 晓 燕 ,许 牡 丹 等 建立 的壳 低 聚糖 的薄 层 比色 分析 方法 是展 开剂 为 乙酸 乙 酯 : 水 乙醇 : : 水 = 5: 4: . 5 无 水 氨 5: 0 4 ,采 用 苯 胺 一 苯 二 胺一 磷酸显色 ,点样 量为2a / L ,可分 开单糖至低聚 七糖 各 lg 组 分 ,斑 点 圆 形 、 清 晰 、 无 拖 尾 ,分 离效 果 好 。 薄 层 层 析 法 虽 然 可 以分 析 壳 寡 糖 ,价 格 低 廉 ,但 此 方 法
1 L 李 曙 光 等 用 S o e H p 5 E 基 柱 ,蒸 发 光 散射 检 。 h d x N 2 一 04 氨 测 器 ,使壳寡 糖按照聚合度顺 序依次被洗 脱 ,检测到 的壳寡 糖 的 聚 合 度 范 围 可 达 l糖 。 杨 菊 林 等 通 过 H L 对 不 同脱 乙 酰 5 PC 度 的壳聚糖底物 经壳聚糖酶 酶解后得到 的壳寡糖进行分析 , 条 件 是 : K 2 0 柱 , 洗 脱 液 0 0 1o / 含 00 %( 量 分 数 ) S8 1 . 0 m lL . 2 质
在 初 步 分 析 壳 寡 糖 时 多 采 用 比色 法 。 邬 建 敏 通 过 3 5 二 ,- 硝 基 水 杨 酸 (N ) 色 , 定 了 甲壳 低 聚 糖 平 均 聚 合 度 及 平 均 DS显 确 相 对 分 子 质 量 。刘 琳 等 利 用 分 光 光 度 法 测 定 壳 寡 糖 平 均 聚 合 度 ,此 方 法 经 凝 胶 渗 透 色 谱 验 证 , 能 较 为 准 确 地 判 断 壳 寡 糖 的平 均 聚 合 度 。虽 然 比 色 法 技 术 简 单 ,对 设 备 要 求 不 高 , 成 本 较 低 ,但 由于 其 准 确 性 不 高 , 因 此 有 必 要 开 发 一 种 新 的 可 准确测定壳寡糖 的分析方法。 2色谱法 . ・ . ( )薄 层 色 谱 法 1 - 薄 层 色 谱 法 是 在纸 层 析 法 的基 础 上 发 展 起 来 的 ,其 分 辨 效 率 高 , 分 离 效 果 好 , 简 便 易行 , 重 现 性 好 , 在 同一 块 薄 板 上 可 同 时 分 析 多 个 样 品 。 孟 显 丽 , 陈 国华 等 通 过 实 验 建 立 了 薄 层 色 谱 ( L )分 析 壳 寡糖 的 条 件 即 最 佳 的展 开 剂 是 乙 酸 乙 TC 酯 : 乙醇 : : 水= 5: 水 氨 5: 0 3 4: . ,样 品上 行 展 距 为 8m c,
( 西分析 测试研 究中心 ,广西 南宁 5 0 2 ) 广 3 0 2
【 摘 要 】壳寡糖是 壳聚糖 降解后 产生的一类 可溶 于水的氨 基糖类化合物 ,聚合度 一般 在 2 0之 间,文 中对 壳寡糖分析 —1 检测方法进行 了综述 ,主要 包括 比 色法 ,色谱 法,质谱 法,电泳法等 。 【 关键词 】壳寡糖 ;比色法;色谱 法 ;质谱法 ;电泳法
M M n ia 等通过M L I TF M 对 壳聚糖降解产物的分析得 . e g r b A D — O -S 出壳聚糖酶的作用位 点,进而推理壳寡糖的结构 。陈勉,朱 希强等利用M L IT F M 方法 可以直接检测到壳寡糖的精细 AD-O-S
结 构 ,聚 合 度 , 乙酰 基 的 数 量 及 其 剖 面 图 ,从 而 鉴 定 壳 寡糖 的 质 量 ,为 其 从 健 康 食 品 朝 病 人所 需 的 药 品方 向发 展 做 出 了
( 3)气 相色 谱 ( C G)
的结构 。李艾华 等 用N c lt F - R 30 红外光谱仪记录 i oe T I 6 红 外 光 谱 , 基 体 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞 行 时 间 质 谱 (A D — O —S 分析壳寡糖,得到 了聚合度3 6 M L IT F M ) — 的甲壳寡糖。
【 稿 日期 】2 1 — 2 2 收 0 10 — 5
高效液相色谱 法 ( P C H L )是定量分析低 聚糖类及其他糖 类 最 常用 的 方 法 ,具 有 方 便 、快 速 、分 离 效 果 好 、分 辨 率 高 、 重现 性 好 和 不 破 坏 样 品 等 优 点 ,该 方 法 必 须 有 标 准 品作 参 照 。 由于 糖 类 物 质 在 紫 外 光 区 问没 有 吸 收 ,故 无 法 使 用 紫 外 检 测 器 , 早 期 多 采 用 示 差 检 测 器 来 检 测 糖 类 物 质 , 但 是 示 差 检 测 器 无 法 进 行 梯 度 洗 脱 ,所 以检 测 的聚 合度 多 在 8 以下 ,现 在 多 采 用 蒸 发 光 散 射 检 测 器 或 电化 学 检 测 器 ( 冲 安 培 检 测 器 ), 脉 分 离 柱 常 用 氨 基 柱 或 阴离 子 交 换 柱 。纪 莹 等 通 过 H L 法 分 析 PC 检 测 壳寡 糖 组 分 , 用T K G l m d 一 0 ,示 差 检 测 器 检 测 , S — e i e 8 柱 A 流 动 相 为 乙 腈 : =3 6 ,p 为4 0 水 7: 3 H . ,柱 温 为2  ̄ 上样 量 5 C,
极 强 的 吸湿 保 湿 性 ;抑 制肿 瘤 细 胞 ( 合 度 为 6 8 活 性 最 聚 ~ 时
高 ) : 诱 发 植 物 的诱 导 抗 病 性 等 , 使 其 在 食 品 、 医 药 、化 妆
用 于 壳 寡 糖 常 规 检 验 。但 是 , 要 大 规 模 地 对 壳 寡 糖 分 离 分 析
贡献。
4 电泳法 (lc r p o e i ) . E e to h r ss
气 相 色 谱 法 检 测 壳 寡糖 的 文 献 相 对 较 少 ,朱 晓 兰 ,夏 文 水 等 采 用 毛 细 管气 相 色 谱法 ( G )测 定 了D cC 一氨 基 葡 萄 糖 盐 酸 盐 (A ) GJ ,测 定 结 果 较 比色 法 准 确 ,但 分 析 步骤 比较 多且 对 { 设备要求较高。 ( )凝 胶 渗 透 色 谱 (P ) 4 G C 凝胶渗 透色谱法是利用流动相与控制孔径 分布 的固定相 接 触 从 而 使 溶 质 按 分 子 体 积 大 小 分 离 的色 谱 方 法 。 16 年 , 94 M o e 先 发 表 了使 用 G C 法 来 测 量 高 聚 物 的 分子 量 分 布 , or首 P方 该 方 法 速 度 快 、 复 性 好 。利用 G C 据 还 可 以计 算 M 、 n 和 重 P数 w M M 等 平 均 分 子 量 。这 些 优 点使 G C 为 测 定 分 子 量 分 布 的主 z P成 要 方 法 。G C 测 定 壳 寡 糖 的 分 子 量 可 以认 为 是 一 个 相 对 值 。 P
操 作 时 间 长 ,只 能 进 行 微 量 生产 ,无 法 定 量 ,薄 层 一 比色 法 可
( )引言 一
功 能性低聚 糖是 由2 1个相 同或不 同的 单糖 以糖苷键 ~ O 聚 合 而 成 ,具 有 糖 类 某 些 共 同 的特 性 ,但 不 会 被 胃酸 等 降 解 , 不 在 小 肠 吸 收 直 接 到 达 大肠 ,具 有 促 进 人 体 双 歧 杆 菌 的增 殖 等 生 理 功 能 ,所 以功 能性 低 聚 糖 又 被 称 为 双 歧 因子 。 壳 寡 糖 ( h t o io a c a i e O )又 称 低 聚 葡 萄 糖 c i o l g s c h r d ,C S 胺 ,低 聚氨 基 葡 萄 糖 等 , 是 功 能 性 低 聚 糖 的 一 种 ,是 壳聚 糖 降 解 后 的产 物 ,聚 合 度 一 般 在 2 1之 间 ,是 目前 自然 界 中仅 ~ 0 知 的唯 一 的 碱 性 寡 糖 , 具 有 独 特 的 生 物 活 性 , 如 抗 茵 抑 菌 ;
21 0 1年 第 5期 ( 第 1 1期 ) 总 4
大 众 科 技
DA ZHo NG KE J
No. 2 1 5。 0 1
ห้องสมุดไป่ตู้
( muai l N . 1 Cu lt ey o1 ) v 4
壳寡 糖 分 新 检 测 的研 究进 展
王 礼 邓 卫 利 林 文 业
还 需要不断地寻求新的技术 。
(2) 高 效 液 相 色 谱 (i h e fr a c lq i h g p r o m n e i u d
c r m t g a h ,H L ) h o a 0 r p y P C
( )壳 寡糖 的分 析测 定 方法 研 究进 展 二
1 比色 法 .
品和 农 业 等 方 面 有 广 阔 的 发 展 前 景 。 不 同分 子 量 的 壳 寡 糖 , 其生物 活性 差异很大 。近 年来 ,壳寡糖的功 能研 究取得 了长 足 的进 步 , 同 时 也 对 壳 寡 糖 的分 析 测 定 提 出 了 挑 战 。文 章 主 要介绍 了近 1年 内壳寡糖 的分析测定方法 的研究进展 。 O
N N 的N O ,流 速 0 5 L m n 柱 温 4 ℃ , 壳 寡 糖 质 量 分 数 a3 aH .m/ i, O 00% . 5 ,上 样 量 2 L 0 。 u
【 金 项 目 】 广 西 区 直属 公 益 性 科 研 院所 基 本 科 研 业 务 费专 项 项 目 ( 0 9 基 2 0ACZ 9 0) 【 者 简 介 】 王礼 ( 94一 ) 作 16 ,女 ,供 职 于广 西 分析 测 试研 究 中心 ,从 事 分析 测 试 的数 据 统 计 工 作 。
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