(完整版)实验一CTABNaCl法细菌基因组DNA提取
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实验一CTAB/NaCl 法细菌基因组DNA提取
一、培养基
A. LB培养基（1L）
胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g pH调至7.0
二、菌种
大肠杆菌野生型
三、缓冲液
A. 1M Tris-HCl ( pH 8.0, 1L)
1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中，加入约800 ml的ddH2O，充分搅拌溶解，加浓HCl约42ml，将溶液定容至1 L。
C. TE缓冲液（pH 8.0）
10 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)，1mmol/L EDTA (pH8.0)
D. 10% SDS溶液
10 gSDS，定容至100ml
E. CTAB/NaCl缓冲液
CTAB 4g
NaCl 16.364 g
1M Tris-HCl 20ml ( PH8.0)
0.5M EDTA 8ml
先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌，冷却后0.2-1% β-巯基乙醇（400ul）。
F. 5mol/L NaCl溶液
292.5 gNaCl了，定容至1L
G. 氯仿：异戊醇（24：1）
480ml氯仿+20ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
H. 酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）
250mlTris饱和酚+240ml氯仿+10ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
I. 上样缓冲液（6×）
0.25%溴酚蓝，20%蔗糖
J. 电泳缓冲液（1×, 1L）
Tris碱10.8g，硼酸5. 5g，0.5mol/L EDTA （pH8.0）4ml, 用ddH2O定容至1L。
K. 0.7%琼脂糖凝胶（100 ml）
0.7 g琼脂糖凝胶, 加入1×电泳缓冲液，微波炉加热至凝胶完全融化即可
三、实验具体步骤
1、接种一单菌落于5mlLB中, 30℃培养过夜,
2、取1ml种子培养液接入100ml LB中, 37℃、220r/min培养16小时;
3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀。
5、取1.4ml菌悬液,加入73.6μl10%SDS,混匀,加入14.8μl10mg/ml蛋白酶K, 混匀, 37℃温育1小时
6、加入296μl 5mol/LNaCl, 再加入204.8μlCTAB/NaCl,混匀,65℃温育10分钟。（注：总体积约2ml）
7、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
9、加入0.6倍体积的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟,收集DNA沉淀,用70%乙醇离心洗涤DNA
沉淀,10000r/min离心5分钟，弃上清液，沉淀即总DNA。
10、用1mlTE溶解DNA,取5μl在琼脂糖电泳中上样检测。