丙酮酸的测定方法

丙酮酸的测定方法 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012

实验七丙酮酸含量的测定

一、实验目的

掌握植物组织中丙酮酸含量测定的原理和方法。

二、实验原理

植物样品中的组织液，用三氯乙酸去蛋白质后，其中所含的丙酮酸可与2,4—二硝基苯肼作用，生成丙酮酸—2,4—二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈樱红色，其颜色可用分光光度计测量，与已知丙酮酸标准曲线进行比较，即可求得样品中丙酮酸的含量。

三、实验器材与试剂

1、.实验器材

分光光度计；研钵；具塞刻度试管：20mL×8；容量瓶：100mL×2；移液管：

1mL×15mL×4；

量筒：10mL×1；离心机；天平；

大蒜、大葱或洋葱

2、试剂

（1）8%三氯乙酸(当日配制置冰箱中备用)

（2）1.5mol/L氢氧化钠

（3）0.1%2,4—二硝基苯肼:称取2.4—二硝基苯肼100mL，溶于2mol/LHCl中配成100mL 溶液，盛入棕色试剂瓶，保存于冰箱内。

（4）丙酮酸钠

四、实验操作步骤

1.丙酮酸标准曲线的制作：

称取丙酮酸钠7.5mg于烧杯中，用8%三氯乙酸溶解，转入100mL容量瓶中，并用8%三氯乙酸定容，此液为60μg/mL的丙酮酸原液。取6支试管，按下表数据配制不同浓度的丙酮酸标准液：

123456

管号

丙酮酸原液量（mL）00.6 1.2 1.8 2.4 3.0 8%三氯乙酸量（mL） 3.0 2.4 1.8 1.20.60

丙酮酸浓度（μg/mL）01224364860

1.5mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀显色，在520nm波长下比色。做标准曲线。

2.植物样品组织液的提取：

称取植物样品（大蒜、大葱或洋葱）5g，于研钵中加入少许石英沙及少量8%三氯乙酸，仔细研成匀浆，再用8%三氯乙酸洗入100mL容量瓶中（沙留在研钵内），定容至刻度。静置30min，取10mL匀浆液离心（4000r/min）10min，取上清液备用。

3.组织液中丙酮酸的测定1.5mol/L氢氧化钠溶液，摇匀显色。在520nm波长下比色，记录吸光度，在标准曲线上查得丙酮酸的含量。

五、结果处理

式中：A—标准曲线中查得的丙酮酸克数。

六、思考题：测定丙酮酸含量的基本原理是什么？