咳喘平片不同提取工艺对总黄酮影响

咳喘平片不同提取工艺对总黄酮影响
更新日期：2011-05-18 点击： 闫喜英　王　威　曹海龙　刘继华　王永奇

提要　采用正交试验法对咳喘平片提取工艺进行优选， 以总黄酮含量为指标，以加水量、提取时间、提取次数和醇沉浓度为因子进行试验。结果表 明，咳喘平片最佳提取工艺为药材12倍量水提取3次，2 h/次，醇沉浓度为80%。
关键词　咳喘平片；　正交试验；　总黄酮

咳喘平片由射干、紫菀等12味中药配伍组成。具有清热化痰，止咳平喘之功能，用于慢性支 气管炎急性发作的治疗。为建立科学合理的提取工艺，我们采用正交试验考察了不同加水量 、提取时间、提取次数和醇沉浓度对总黄酮含量的影响，优选出咳喘平片最佳提取工艺条件 。现报告如下。

1　仪器与材料

UV-3400 型紫外分光光度计(日本日立公司)；752型紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器 厂)。药材购于吉林省医药物资供销公司；芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供；化 学试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　实验条件的选择
2.1.1　最大吸收波长：精密量取样品溶液和对照品 溶液各0.5 ml，分别置于10 ml刻度试管中，加30%乙醇稀释至5 ml，加入5% NaNO2溶液0. 3 ml，摇匀，放置6 min，加入10% Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，加入1 mo l/L NaOH溶液4 ml，加水稀释至10 ml，摇匀，放置15 min。以60%乙醇代替对照品溶液作空 白，于紫外分光光度计上，在400～700 nm 波长范围内绘制吸收曲线，结果表明样品和对照 品均在(510±1)nm波长处有最大吸收。
2.1.2　吸收度与浓度关系［1］：精密称取10 5℃干燥至恒重的芦丁对照品5.0 mg，置于50 ml容量瓶中，加60%乙醇适量使溶解并稀释至 刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置于10 ml刻 度试管中，加30%乙醇稀释至5 ml，加入5% NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，加入10 % Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，加入1 mol/L NaOH 溶液4 ml，加水稀释至 10 ml，摇匀，放置15 min。以60% 乙醇代替对照品溶液作空白，于510 nm 波长处测定吸收 度。以吸收度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明芦丁浓度在0.0 1～0.05mg/ml 范围内符合比耳定律，线性回归方程为 C=0.9250 7 A-0.0925， γ=0.9996。
2.2　样品的提取与测定：称取处方比例的咳喘平片 药材，按表1条件进行提取，醇沉，回收乙醇至尽，加水溶解定容于50 ml容量瓶中，摇匀。 精密量取5 ml，置于100 ml容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。精密 量取样品溶液0.5 ml，置于10 ml刻度试管中，加30%乙醇稀释至5 ml，加入5% NaNO2溶

液 0.3 ml，摇匀，放置6 min，加入10% Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min，加入1 mol/L NaOH 溶液4 ml，加水稀释至10 ml，摇匀，放置15 min。以60%乙醇代替样品溶液作 空白，于510 nm 波长处测定吸收度。
2.3　正交试验与结果：根据预试结果，选出加水量 、提取时间、提取次数和醇沉浓度4个试验因素，每个因素3个水平进行优选，因素水平见表 1。

表1　因素水平表


水平 因素
加水量 A
(倍) 提取时间 B
(h) 提取次数 C
(次) 醇沉浓度 D
(%)
1 8 3 1 90
2 10 2 2 80
3 12 1 3 70

以总黄酮含量为指标，选用L9(34)正交试验表试验，结果见表2。
表2　正交试验表


试验号 A B C D 吸收度 A×100
1 1 1 1 1 39.2
2 1 2 2 2 63.6
3 1 3 3 3 72.4
4 2 1 2 3 60.1
5 2 2 3 1 70.2
6 2 3 1 2 42.6
7 3 1 3 2 74.2
8 3 2 1 3 47.6
9 3 3 2 1 61.4

分别对有关数据作极差分析和方差分析，结果见表3和表4。从极差分析看 ，各因素对咳喘平片提取工艺的影响程度依次为C＞A＞D＞B。从方差分析看，C 因素对其有 非常显著性影响，而其它因素影响不显著。因而优选出咳喘平片理论最佳提取工艺为A3B 2C3D2，即药材12倍量水提取3次，2 h/次，醇沉浓度为80%。
表3　极差分析表


试验号 A B C D
K1 175.2 173.5 129.4 170.8
K2 172.9 181.4 185.1 180.4
K3 183.2 176.4 216.8 180.1
1 58.4 57.8 43.1 56.9
2 57.6 60.5 61.7 60.1
3 61.1 58.8 72.3 60.0
R 3.5 2.7 29.2 3.2

表4　方差分析表


方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 P 值
A 19.49 2 9.75 1.83 ＞0.05
B 10.65 2 5.33 1 ＞0.05
C 1305.13 2 652.57 122.43 ＜0.01
D 19.86 2 9.93 1.86 ＞0.05
误差 10.65 2 5.33

3　小结
采用咳喘平片药材12倍量水提取3次，2 h/次，醇沉浓度为80%的最佳提取工艺所制样品，临床试验取得较为理想的疗效。

作者单位：闫喜英　王　威　刘继华　王永奇：吉林省中医中药研究院，长春　130021；曹海龙：延边大学药学院1995级实习生，延吉　133000

参考文献

1　刘松青，唐先哲，马文秀，等.高效相色谱法测定银杏叶制品中总黄酮.中草药 ，1995，26(9)∶461