单胺氧化酶的制备及活性测定
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抽wk.baidu.com 物中被证 实含有单胺氧化酶 ， 且酶活达到 ３ ． ／ 。在益生菌抗衰老 的研究 中 ， 以此酶作 为靶位酶 建立相关 ０ ７Ｕ ｍｇ 可
的体外测定模型 。 关键词 ： 单胺 氧化酶 ； 备；酶活 制 中图分类号 ： Ｑ ２ Ｔ ９５ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：０ ２—１０ （０ １ ０ ０ ７ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）３— ３２— ２ Ｋ Ｔ ５型高速组织分散器 （ 国 Ｉ Ａ公 司） Ｘ 一８ Ａ型漩 Ａ２ 德 Ｋ ；Ｗ ０ 涡？ 合仪 （ 昆 上海青浦 沪西仪 器厂 ） Ｄ ； Ｋ一 Ｄ型电热恒 温水槽 ８ （ 上海 精宏 实验设备公 司） 。
１３ 试 验 方 法 ．
人体衰老是一个渐进 而复杂 的过程 ， 衰老是人 体生理 和 病理进程相互作用 的结果 ， 生理环启动衰老 ， 理环则加 速衰 病
老 。衰老不是疾病 ， 与疾病有不 同的发生机理 ， 与疾病有着 但
共 生 和相 互 促 进 的关 系 ， 数 情 况 下 很 难 区 分 因 病 而 衰 还 是 多
０ ３ｍ ｌＬ 蔗糖 溶 液 中 ， 分 混匀 ， 样 于 ４ ，． ｏ Ｌ ． ｏ 的 ／ 充 上 ０ｍＬ １ ２ｍ ｌ ／
的蔗糖溶液 中，３０ ０ｇ离心 ４ ｎ即可得 到纯度较 高 的肝 ５ ０ ０ｍｉ
脏线粒 体 ， 中 ＭＡ 其 Ｏ定 位在线 粒体外 膜上 且结合 紧密 。用 磷酸钾缓冲液将线粒体洗涤 １ 次后 ， 浮在 ４ Ｌ的该 缓 冲 悬 ０ｍ
液 中， 即为 ＭＡ Ｏ粗提物 ， 分装成每管 １ Ｌ， ８ ｍ 一 ５℃储存备用。 １ ３ ２ 单胺氧 化酶 的活性测 定 ．． 以 阳性 对 照组 （ 粗提 物 ＋ 底物 ） 阴性 对照组 （ Ｈ值 ７ ６缓 冲液 ＋底物 ） ｃ ｒ ｌ ｅ组 ， ｐ ． ，ｌ ｇ ｉ ｏ ｙｎ （ 粗提物 ＋底物 ＋ ｌ ｇｌ ｅ 和 ｓｌｇ ｉ ｃｏ ｙｉ ） ｅ ｉｎ ｒ ｎ ｅ ｌ ｅ组 （ 提物 ＋底物 ＋ 粗 ｓｌｇ ｉｅ 对从老龄大 鼠肝脏 中提 取得 到的 Ｍ Ｏ进行 确证 ， ｅ ｉｎ ） ｅｌ Ａ 其 中 ｃ ｒ ｌ ｅ ｓｌｇ ｉ ｌ ｇ ｉ 和 ｅ ｉｎ ｏｙｎ ｅ ｌ ｅ分别是 ＭＡ Ｏ—Ａ和 ＭＡ Ｏ—Ｂ的专
（． 明乳业股份有限公 司技术 中心／ １光 乳业生物技术国家重点实验室 ， 上海 ２ ０ ３ ０４６
２ 江南大学食 品学 院／ 品科学与技术 国家重点实验室 ， ． 食 江苏无锡 ２ ４ ２ ） １ １２
摘要 ： 利用 经改 良的低温差速离心法 ， 老龄 雄性大 鼠肝组 织 内提 取单胺 氧化酶 。通过该 方法所 制备 的肝组织 从
学 试 剂 公 司 ） 。
－－—
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３ ２． ７ ． — —
江苏农业科学
２ １ 年第 ３ ０１ ９卷第 ３期
王
豪， 周凌华 ， 徐致远 ， 等．单胺氧 化酶的制备及 活性测定 ［］ Ｊ ．江苏农业科 学， １ ， （ ） ３２— ７ ２ １３ ３ ： ０ ９ ７ ３３
单胺 氧化酶 的制备 及活性测定
王 豪 ，周凌 华 ，徐 致远 ，王荫榆 ，郭本 恒 ，陈 卫
方法 并加 以改 进 ， 大 鼠 的肝 组 织 匀 浆 中 分 离 得 到 初 级 纯 化 从 的 ＭＡ 。Ｗｉａ 雄性 老年 大 鼠通 过 断 髓 致 死 ， 菌 操 作 取 出 Ｏ ｓｒ ｔ 无
在衰老过程 中 ， 各种单胺 类神经递 质对记忆形 成和 维持
起着很 重要的作 用。机体 内单胺氧 化酶 （ ｏｏｍ ｎ ｘｄｓ ， ｍ ｎａ ｉｅｏｉａｅ ＭＡ Ｅ ． ． ． ） Ｏ，Ｃ １４ ３ ４ 的主要 功能就 是催化 内源性 和外 源性 单 胺类物 质 的代谢 ， 具有重 要的生 理功 能。人体 中 ＭＡ Ｏ的活 性异常会使细胞 内单胺类神经 递质转运 出现紊乱 ， 生诸多 产 衰老疾病如老年痴呆 症 、 帕金森综合征等 。 随着 ＭＡ Ｏ活性 的不断 升 高， 不仅 会导 致脑 生理 功 能 的 退化 ， 且还会 引起整 个机体 逐步 衰老 。因此 ＭＡ 而 Ｏ被 认 为 是老化 的标志 ， 故又称之为老化 相关酶 。本研 究从 老龄雄性 大 鼠肝脏 中提取 出单胺氧化 酶 ， 并进 行 了相关 的定性 定量检 测， 以该酶作为靶 位酶所 建立 的抗 衰老生 物学体外模 型可应 用 到功能性物质 ， 如益生菌的筛选过程 中 。
因衰而病 。美 国哈佛 医学 院 Ｗｕ在《 体革命》中称 ， 人体 人 按
生长规律 和基 因特点推测 ， 人类潜在寿命可达 １０岁 ， 而由 ５ 然 于 老年 疾 病 的影 响 ， 怕 无 人 能 活 到其 自然 寿 限 … 。 恐
１３ １ 单胺氧化酶 的制 备 ．．
参考 Ｈｕ等 和 Ｓａ ｏｄ等 的 ｔｆｒ ｆ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
肝脏 ， 在预冷 的磷酸钾缓冲液 （ ． ｏ Ｌ，Ｈ值 ７ ６ 中洗 涤 ０ ２ｍ ｌ ｐ ／ ．） 后， 贮存于 一８ ５℃待用。肝 组织 （ ） １ｇ： ０ ｍ ５ｇ 以 ４ Ｌ的 比例 在 ０ ３ｍ ｌＬ蔗糖溶液 中匀浆 ， ． ｏ ／ 采用低 温差速 离心法分 离线 粒体 ： 将匀浆置于低温高速离心机 １００ｇ离心 １ ｉ， ０ ０ ｍｎ 弃沉 淀， 上清液 经 １ ０ 心 ３ ｉ， ００ ０ｇ离 ０ｍｎ 沉淀 即为提取 的肝脏粗线 粒体 ， 整个 过程 温 度控 制 在 ０～４℃ 。将沉 淀 重 悬 于 ４ ｍ Ｌ
一
Ｗｉ ａ 雄性老年大鼠（ ｓｒ ｔ 上海 斯莱克实 验动物责 任公 司） ；
犬 尿胺 、ｌｒ ｌ ｅＳｌｇｉｅ Ｓｇ ａ公司 ） 牛血 清 白蛋 白、 Ｃｏｇ ｉ 、ｅ ｉｎ （ ｉｍ ｙｎ ｅｌ ； 考 马斯亮蓝 Ｇ ５ 、 ２ ０ 蔗糖 、 磷酸氢 二钠 、 磷酸二氢 钠 （ 国药上海 化
的体外测定模型 。 关键词 ： 单胺 氧化酶 ； 备；酶活 制 中图分类号 ： Ｑ ２ Ｔ ９５ 文献标志码 ：Ａ 文章编号 ：０ ２—１０ （０ １ ０ ０ ７ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）３— ３２— ２ Ｋ Ｔ ５型高速组织分散器 （ 国 Ｉ Ａ公 司） Ｘ 一８ Ａ型漩 Ａ２ 德 Ｋ ；Ｗ ０ 涡？ 合仪 （ 昆 上海青浦 沪西仪 器厂 ） Ｄ ； Ｋ一 Ｄ型电热恒 温水槽 ８ （ 上海 精宏 实验设备公 司） 。
１３ 试 验 方 法 ．
人体衰老是一个渐进 而复杂 的过程 ， 衰老是人 体生理 和 病理进程相互作用 的结果 ， 生理环启动衰老 ， 理环则加 速衰 病
老 。衰老不是疾病 ， 与疾病有不 同的发生机理 ， 与疾病有着 但
共 生 和相 互 促 进 的关 系 ， 数 情 况 下 很 难 区 分 因 病 而 衰 还 是 多
０ ３ｍ ｌＬ 蔗糖 溶 液 中 ， 分 混匀 ， 样 于 ４ ，． ｏ Ｌ ． ｏ 的 ／ 充 上 ０ｍＬ １ ２ｍ ｌ ／
的蔗糖溶液 中，３０ ０ｇ离心 ４ ｎ即可得 到纯度较 高 的肝 ５ ０ ０ｍｉ
脏线粒 体 ， 中 ＭＡ 其 Ｏ定 位在线 粒体外 膜上 且结合 紧密 。用 磷酸钾缓冲液将线粒体洗涤 １ 次后 ， 浮在 ４ Ｌ的该 缓 冲 悬 ０ｍ
液 中， 即为 ＭＡ Ｏ粗提物 ， 分装成每管 １ Ｌ， ８ ｍ 一 ５℃储存备用。 １ ３ ２ 单胺氧 化酶 的活性测 定 ．． 以 阳性 对 照组 （ 粗提 物 ＋ 底物 ） 阴性 对照组 （ Ｈ值 ７ ６缓 冲液 ＋底物 ） ｃ ｒ ｌ ｅ组 ， ｐ ． ，ｌ ｇ ｉ ｏ ｙｎ （ 粗提物 ＋底物 ＋ ｌ ｇｌ ｅ 和 ｓｌｇ ｉ ｃｏ ｙｉ ） ｅ ｉｎ ｒ ｎ ｅ ｌ ｅ组 （ 提物 ＋底物 ＋ 粗 ｓｌｇ ｉｅ 对从老龄大 鼠肝脏 中提 取得 到的 Ｍ Ｏ进行 确证 ， ｅ ｉｎ ） ｅｌ Ａ 其 中 ｃ ｒ ｌ ｅ ｓｌｇ ｉ ｌ ｇ ｉ 和 ｅ ｉｎ ｏｙｎ ｅ ｌ ｅ分别是 ＭＡ Ｏ—Ａ和 ＭＡ Ｏ—Ｂ的专
（． 明乳业股份有限公 司技术 中心／ １光 乳业生物技术国家重点实验室 ， 上海 ２ ０ ３ ０４６
２ 江南大学食 品学 院／ 品科学与技术 国家重点实验室 ， ． 食 江苏无锡 ２ ４ ２ ） １ １２
摘要 ： 利用 经改 良的低温差速离心法 ， 老龄 雄性大 鼠肝组 织 内提 取单胺 氧化酶 。通过该 方法所 制备 的肝组织 从
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３ ２． ７ ． — —
江苏农业科学
２ １ 年第 ３ ０１ ９卷第 ３期
王
豪， 周凌华 ， 徐致远 ， 等．单胺氧 化酶的制备及 活性测定 ［］ Ｊ ．江苏农业科 学， １ ， （ ） ３２— ７ ２ １３ ３ ： ０ ９ ７ ３３
单胺 氧化酶 的制备 及活性测定
王 豪 ，周凌 华 ，徐 致远 ，王荫榆 ，郭本 恒 ，陈 卫
方法 并加 以改 进 ， 大 鼠 的肝 组 织 匀 浆 中 分 离 得 到 初 级 纯 化 从 的 ＭＡ 。Ｗｉａ 雄性 老年 大 鼠通 过 断 髓 致 死 ， 菌 操 作 取 出 Ｏ ｓｒ ｔ 无
在衰老过程 中 ， 各种单胺 类神经递 质对记忆形 成和 维持
起着很 重要的作 用。机体 内单胺氧 化酶 （ ｏｏｍ ｎ ｘｄｓ ， ｍ ｎａ ｉｅｏｉａｅ ＭＡ Ｅ ． ． ． ） Ｏ，Ｃ １４ ３ ４ 的主要 功能就 是催化 内源性 和外 源性 单 胺类物 质 的代谢 ， 具有重 要的生 理功 能。人体 中 ＭＡ Ｏ的活 性异常会使细胞 内单胺类神经 递质转运 出现紊乱 ， 生诸多 产 衰老疾病如老年痴呆 症 、 帕金森综合征等 。 随着 ＭＡ Ｏ活性 的不断 升 高， 不仅 会导 致脑 生理 功 能 的 退化 ， 且还会 引起整 个机体 逐步 衰老 。因此 ＭＡ 而 Ｏ被 认 为 是老化 的标志 ， 故又称之为老化 相关酶 。本研 究从 老龄雄性 大 鼠肝脏 中提取 出单胺氧化 酶 ， 并进 行 了相关 的定性 定量检 测， 以该酶作为靶 位酶所 建立 的抗 衰老生 物学体外模 型可应 用 到功能性物质 ， 如益生菌的筛选过程 中 。
因衰而病 。美 国哈佛 医学 院 Ｗｕ在《 体革命》中称 ， 人体 人 按
生长规律 和基 因特点推测 ， 人类潜在寿命可达 １０岁 ， 而由 ５ 然 于 老年 疾 病 的影 响 ， 怕 无 人 能 活 到其 自然 寿 限 … 。 恐
１３ １ 单胺氧化酶 的制 备 ．．
参考 Ｈｕ等 和 Ｓａ ｏｄ等 的 ｔｆｒ ｆ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
肝脏 ， 在预冷 的磷酸钾缓冲液 （ ． ｏ Ｌ，Ｈ值 ７ ６ 中洗 涤 ０ ２ｍ ｌ ｐ ／ ．） 后， 贮存于 一８ ５℃待用。肝 组织 （ ） １ｇ： ０ ｍ ５ｇ 以 ４ Ｌ的 比例 在 ０ ３ｍ ｌＬ蔗糖溶液 中匀浆 ， ． ｏ ／ 采用低 温差速 离心法分 离线 粒体 ： 将匀浆置于低温高速离心机 １００ｇ离心 １ ｉ， ０ ０ ｍｎ 弃沉 淀， 上清液 经 １ ０ 心 ３ ｉ， ００ ０ｇ离 ０ｍｎ 沉淀 即为提取 的肝脏粗线 粒体 ， 整个 过程 温 度控 制 在 ０～４℃ 。将沉 淀 重 悬 于 ４ ｍ Ｌ
一
Ｗｉ ａ 雄性老年大鼠（ ｓｒ ｔ 上海 斯莱克实 验动物责 任公 司） ；
犬 尿胺 、ｌｒ ｌ ｅＳｌｇｉｅ Ｓｇ ａ公司 ） 牛血 清 白蛋 白、 Ｃｏｇ ｉ 、ｅ ｉｎ （ ｉｍ ｙｎ ｅｌ ； 考 马斯亮蓝 Ｇ ５ 、 ２ ０ 蔗糖 、 磷酸氢 二钠 、 磷酸二氢 钠 （ 国药上海 化