瓦楞子及其活性物质研究进展

瓦楞子的活性物质研究
多肽成分J2-C4 DPPH是即使在室温下也保持稳定的自由基之一。 它可以通过接受氢原子或电子来清除， 导致517nm处的吸光度降低。 由于存在质子供体物质，溶液的颜色从深紫色变为黄色[17]。 J2-C4的清除活性在最终实验浓度下是剂量依赖性的，EC50值为455.62μg/ mL。 低于鸡 蛋蛋白水解物[18]的PSYV（17.0mg / mL），Katsuwonus pelamis暗肌[38]的WEGPK （4.438mg / mL）和GVPLT（4.541mg / mL），以及FIMGPY（2.60mg） / mL）来自 Raja porosa软骨的蛋白质水解产物[19]。 因此，目前的结果表明J2-C4是DPPH抑制剂。
[14]U.K. Laemmli Most commonly used discontinuous buffer system for SDS electrophoresis Nature, 227 (1970), pp. 680-688 [15]N.K. Singh, K.W. Shepherd, G.B. Cornish A simplified SDS-PAGE procedure for separating LMW subunits of glutenin J. Cereal Sci., 14 (1991), pp. 203-208
瓦楞子简介
瓦楞子，中药名。为蚶科动物毛蚶Arca subcrenata Lischke、泥蚶Arca granosa Linnaeus或魁蚶Arca inflata Reeve的贝壳。秋、 冬至次年春捕捞，洗净，置沸水中略煮，去肉， 干燥。具有消痰化瘀，软坚散结，制酸止痛的功 效。用于顽痰胶结，黏稠难咯，瘿瘤，瘰疬，症 瘕痞块，胃痛泛酸[1]。
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多肽成分J2-C4
FT-IR光谱学是一种提供蛋白质构象和结构动力学信息的有力工具[16]。 J2-C4 的FT-IR光谱如图6所示。有一个宽的弱带约3448.10cm-1，这是羟基伸缩振动 的特征吸收。 在1643.05cm-1处吸收的强峰是酰胺I的特征，并且表明在J2C4中高百分比的α-螺旋。 1376.93cm -1处的吸收应该是酰胺中CN键伸缩振 动的特征。 因此，所有数据进一步证实了J2-C4是一种蛋白质。
瓦楞子的活ห้องสมุดไป่ตู้物质研究
多肽成分J2-C2
从分子量为16.0和20.5 kDa的A. subcrenata获得的两种蛋白质对人肿瘤细胞系显示 出高的抗增殖活性[9-10]和从A. inflata分离的20.5 kDa多肽具有较强的抗肿瘤细胞 系[11]。 体外抗肿瘤活性。 通过ESI-MS / MS分析测定的J2-C2的分子量为 27,153.0Da。
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多肽成分J2-C4
SDS-PAGE用于根据蛋白质的分子量分离和分析蛋白质[14,15]，而IEF-PAGE是 鉴定蛋白质等电点的有价值技术。 这两种电泳技术可用于进一步研究功能蛋 白的基础。 在该研究中，通过SDS-PAGE测定J2-C4的亚基构成。 SDSPAGE显示J2-C4中的一条带约为20kDa。 IEF-PAGE也显示单一条带，等电 点为5.18。 结果显示J2-C4是单体的均质蛋白质。
[16]H.B. Shen, Z.Q. Gu, K. Jian, J. Qi In vitro study on the binding of gemcitabine to bovine serum albumin J. Pharm. Biomed. Anal., 75 (2013), pp. 86-93
[1].瓦楞子饮片[J].光明中医,2016,31(06):834.
瓦楞子的炮制方法及现代研究
瓦楞子作为矿物类中药需经过炮制以后才可在临床应用中发挥疗效。 其炮制方法主要以法为主，相应炮制规格为煅瓦楞子：取净瓦楞子， 照明煅法煅至酥脆；另有醋粹瓦楞子，即在将瓦楞子煅烧后立即放入 米醋中降温。谭晓梅等[3]研究发现煅瓦楞子药材饮片的平均煎出率 2. 37% ，煎出物中钙平均质量分数 25. 85% ，其煎出物中的微量元素浓 度均高于饮片，因此临床用药需要对其进行煎煮。因此，马爱华等[4]进 一步考察了粉碎度、煎煮用量、煎煮时间、煎煮次数对瓦楞子煎出率 的影响，研究结果表明瓦楞子的煎出率以 60 目为最好，最大用量以 16 ～ 20 g 为宜，煎煮时间以 60 min 为佳，煎煮数以 3 次为宜。由于 瓦楞子中的钙离子易被机体吸收，其作 为 促 凝 血 剂，可增强止血作 用。
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多肽成分J2-C4
研究人员从Arca inflata的可食用部分中纯化出具有抗氧化和抗 菌活性的多肽成分（J2-C4），认为是A. inflata中一种新的肌 浆钙结合蛋白样蛋白。体外抗氧化试验表明，J2-C4对ABTS + （EC50为145.80μg/ mL）和DPPH（EC50455.62μg/ mL）具 有良好的清除活性。 J2-C4对铜绿假单胞菌（MIC：375μg/ mL），大肠杆菌（MIC：187.5μg/ mL）和耐甲氧西林金黄色 葡萄球菌（MIC：750μg/ mL）具有抗菌活性。结果表明，J2C4可能是一种潜在的食品添加剂[13]。
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多肽成分J2-C2
使用MTT测定法在三种人癌细胞系中研究了J2-C2诱导的细胞毒性。 用各种浓 度的J2-C2处理所有测试的细胞。 如表所示，顺铂显示出对A549，HepG2和 SPC-A-1细胞系的抗增殖活性，IC50值分别为2.37,6.10和3.42μM。 J2-C2显 示出对A549，HepG2和SPC-A-1细胞系的抗增殖活性，IC50值分别为 42.38,45.64和48.73μM。 因此，发现J2-C2比从家蚕蛹中分离的天蚕素B肽对 肺细胞发挥更强的抗增殖活性[12]，并且对NCI-H520和NCI-的IC50值为58.8和 >100μM。 分别为H661细胞系。
[13]Wang, W., Shi, H., Zhu, J., Li, C., Song, L., & Yu, R. (2018). Purification and structural characterization of a novel antioxidant and antibacterial protein from Arca inflata. International journal of biological macromolecules, 116, 289-298.
[2]陶明宝,张乐,王智磊,陈林,刘友平,陈鸿平.瓦楞子炮制历史沿革及现代研究进展 [J].中国实验方剂学杂志,2017,23(05):216-221. [3]谭晓梅，王新雨，张明明，等． 5 种贝壳类动物药及其煎出物中微量元素含 量测定［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17( 1) : 61-63 [4]马爱华． 粉碎度对石决明、珍珠母、牡蛎、瓦楞子煎出 率的 影 响［J］． 云南中医学院学报，1997，20 ( 3 ) : 20-21
瓦楞子的活性物质研究
多肽成分J2-C4
通过Bradford方法测定，J2-C4的蛋白质浓度为99.0％（w / w）。通 过比色苯酚 - 硫酸方法的改进版本未检测到碳水化合物。 RP-HPLC 分析中蛋白质的峰值是单一且对称的，峰面积比率为97.62％。结果 表明，J2-C4可能是一种不含碳水化合物的天然蛋白质
[8]Zhu, J., Xu, J., Wang, Y., Li, C., Chen, Z., Song, L., ... & Yu, R. (2017). Purification and structural characterization of a novel anti-tumor protein from Arca inflata. International journal of biological macromolecules, 105, 103-110.
[5]刘春红,张冰.张冰运用药对治疗脾胃疾病经验[J].湖南中医杂 志,2016,32(04):22-23. [6]黄旺根,徐锦池.瓦楞子散治冻疮[J].时珍国药研究,1996(05):81.
瓦楞子的活性物质研究
多肽成分J2-C2
J2-C2是从Arca inflata的可食用部分分离出分子量为27,153.0Da的新 型体外抗肿瘤蛋白（J2-C2）。使用物理化学和仪器分析表征J2-C2 的物理和结构特性。凝胶电泳分析显示J2-C2是均一的单体蛋白质， 等电点为6.3。通过RP-HPLC测定，分离的天然J2-C2的纯度> 99％。
[17]H. Zhuang, N. Tang, Y. Yuan Purification and identification of antioxidant peptides from corn gluten meal J. Funct. Foods, 5 (2013), pp. 1810-1821 C.F. Chi, F.Y. Hu, B. Wang, Z.R. Li, H.Y. Luo [18]Influence of amino acid compositions and peptide profiles on antioxidant capacities of two protein hydrolysates from skipjack tuna (Katsuwonus pelamis) dark muscle Mar. Drugs, 13 (2015), pp. 2580-2601 [19]Preparation and identification of antioxidant peptides from protein hydrolysate of skate (Raja porosa) cartilage J. Funct. Foods, 25 (2016), pp. 220-230
[9]L.Y. Song, S.F. Ren, R.M. Yu, C.Y. Yan, T.F. Li, Y. Zhao Purification, characterization and in vitro anti-tumor activity of proteins from Arca subcrenata Lischke Mar. Drugs, 6 (2008), pp. 418-430 [10]L.L. Chen, L.Y. Song, T.F. Li, J.H. Zhu, J. Xu, Q. Zheng, R.M. Yu An antiprolifertive and antioxidant peptide isolated from Arca subcrenata Mar. Drugs, 11 (2013), pp. 1800-1814 [11]J. Xu, Z.Y. Chen, L.Y. Song, L.L. Chen, J.H. Zhu, S.S. Lv, R.M. Yu A new in vitro anti-tumor polypeptide isolated from Arca inflata Mar. Drugs, 11 (2013), pp. 4773-4787
瓦楞子古代临床应用
瓦楞子性平，味咸，归肺经、胃经、肝经，具有消 痰化瘀、软坚散结、制酸止痛的功效。属化痰止咳 平喘药下属分类的清化热痰药。传统中医常用其治 疗顽痰积结、黏稠难咯、瘿瘤、瘰疬、癥瘕痞块、 胃痛泛酸。
瓦楞子现代临床应用
现代临床中，瓦楞子多用于胃部疾病的治疗。张冰教授[5]在临床 中对于泛酸实证者常以瓦楞子配合桑螵蛸辅以理气行滞之品，胃 阴虚者辅以养阴清热之品，若检查提示溃疡者则加白及等药止血 生新，均获良效。此外还可用于皮肤外科疾病如冻疮的治疗。黄 旺根[6]在瓦楞子用于 治疗气滞血痕 及消化道溃疡窟血 阻滞者效果 较好的启发下,分析冻疮的病因主要是由于血液微循环不畅即气滞 血疲引发的疾病,将瓦楞子散用于 治疗冻疮, 结果疗效令人满意, 不论是冻疮初起红肿还是 已溃烂流脓者,均取得明显功效。
[12]J.M. Wu, P.S. Jan, H.C. Yu, H.Y. Haung, H.J. Fang, Y.I. Chang, J.W. Cheng, H.M. Chen Structure and function of a custom anticancer peptide, CB1a Peptides, 30 (2009), pp. 839-848