转染
细胞转染的原理操作步骤以及小技巧
细胞转染的原理操作步骤以及小技巧细胞转染是一种将外源DNA、RNA、蛋白质等分子导入到细胞内的实验技术。
这种技术可以用来研究基因功能、发现新的信号通路和治疗基因疾病等。
下面将介绍细胞转染的原理、操作步骤以及一些小技巧。
一、细胞转染的原理：细胞转染主要通过三种方法实现：物理法、化学法和生物学法。
1.物理法：通过高压、电穿孔、微射流等方式，使细胞膜发生瞬时破裂，从而使DNA、RNA等外源分子进入细胞。
常用的物理法有电穿孔法和基因枪法。
2.化学法：通过化学物质，如聚吡咯、脂质体等，使外源分子与细胞膜结合，从而实现转染。
常用的化学法有聚乙烯亚胺（PEI）法、磷酸钙共沉淀法等。
3.生物学法：通过利用病毒载体将外源基因导入目标细胞，实现基因的转移。
常用的生物学法有腺相关病毒（AAV）转染、逆转录病毒（RETRO）转染等。
二、细胞转染的操作步骤：1.细胞的预处理：根据细胞类型和实验要求，将细胞培养至合适的状态。
通常细胞应处于快速生长期，但还未达到接触抑制的阶段。
对于一些特定的细胞，如悬浮细胞，可能需要将其转接至适当的培养基中。
2.外源分子的准备：将外源DNA、RNA等转染载体制备好。
如将DNA克隆并纯化至高质量的质粒DNA，或将RNA合成或纯化。
根据实验要求选择合适的转染载体。
3.转染方法的选择：根据实验要求选择合适的转染方法，如物理法、化学法或生物学法。
一般情况下，物理法适用于悬浮细胞，化学法适用于贴壁细胞，而生物学法适用于大多数细胞类型。
4.细胞转染操作：a.物理法：i.电穿孔法：将细胞悬浮于含有外源分子的缓冲液中，然后通过电穿孔仪的电极或电穿孔板进行电穿孔。
ii. 基因枪法：使用基因枪将外源分子直接“枪”入目标细胞中。
b.化学法：i.PEI法：将PEI与外源DNA或RNA按一定比例混合，在适当条件下形成复合物，然后添加至目标细胞中。
ii. 磷酸钙共沉淀法：将外源DNA与磷酸钙按比例混合，并静置形成磷酸钙- DNA沉淀，然后加入至目标细胞中。
细胞瞬时转染原理
细胞瞬时转染原理
细胞瞬时转染是指将外源DNA转入细胞内，并在短时间内获
得目标基因的表达。
细胞瞬时转染原理主要有两种：
1. 物理方法：包括电穿孔、微注射和基因枪。
其中，电穿孔是最常用的方法。
通过施加电场，使细胞膜通透性增加，使外源DNA能够进入细胞内。
微注射是直接利用微注射针将外源
DNA注入到细胞内。
基因枪则是利用高压气体将外源DNA射入细胞。
2. 化学方法：包括钙磷共沉淀、脂质体介导转染和聚合物转染。
钙磷共沉淀是利用DNA与钙离子和磷酸盐共同形成沉淀，通
过该沉淀进入细胞内。
脂质体介导转染则是利用脂质体与
DNA结合形成复合物，通过与细胞膜融合进入细胞。
聚合物
转染利用带正电荷的聚合物与DNA结合形成复合物，通过静
电相互作用进入细胞。
总的来说，细胞瞬时转染方法通过物理或化学手段使外源
DNA能够进入细胞内，并被细胞内的转录和翻译机器所利用，从而实现目标基因的表达。
瞬时转染实验步骤
瞬时转染实验步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：瞬时转染实验是一种常用的基因转染技术，可用于将外源DNA或RNA导入到目标细胞中，以研究基因表达和功能。
本文将介绍瞬时转染实验的步骤及注意事项。
一、实验前准备1.1 制备转染试剂：根据所需的转染试剂种类，准备相应的试剂。
常用的转染试剂包括有机溶剂转染试剂（如Lipofectamine 2000）、阳离子聚合物转染试剂（如Polyethylenimine，简称PEI）等。
1.2 制备转染质粒：准备含有目标基因的转染质粒。
转染质粒应进行质粒提取、纯化并测序确认。
1.3 培养细胞：细胞应在培养皿中充分培养至70%～90%的浓度，以保证转染效率。
1.4 预热培养基：将足够的培养基提前预热至37℃，以用于细胞培养和转染。
二、转染操作步骤2.1 向细胞培养皿中加入转染试剂：按照转染试剂的使用说明书，向培养皿中加入适量的转染试剂，并在无血清培养基中混合均匀。
2.2 加入转染质粒：将准备好的转染质粒溶液滴加入培养皿中，注意避免空气泡。
2.3 孵育细胞：将培养皿放置在37℃的培养箱中孵育一定时间，通常为4～6小时。
2.4 更换培养基：在转染后适当时间内更换含有血清的培养基，以保证细胞正常生长。
2.5 收获样品：根据实验设计和研究目的，选择合适的时间点收获转染后的细胞样品。
三、注意事项3.1 转染试剂浓度：转染试剂的浓度应根据实验目的和细胞类型进行优化，以达到最佳的转染效果。
3.2 转染时间和转染效率：转染时间过长或过短都可能影响转染效果，应根据实际情况进行调整。
3.3 质粒浓度和纯度：转染质粒应具有足够的纯度和浓度，以确保转染效果。
3.4 细胞密度和状态：细胞应在良好的状态下进行转染，过高或过低的细胞密度都会影响转染效果。
3.5 实验控制组：应设置适当的对照组，以进行比较和验证实验结果的可靠性。
总结：瞬时转染实验是一种常用的基因转染技术，通过适当的实验操作步骤和注意事项，可获得可靠的实验结果。
转染的名词解释
转染的名词解释转染是生物学中一个常见的实验技术，也是一种快速而有效的研究方法。
它通常指的是将外源DNA或RNA转移到细胞中，从而改变目标细胞的基因表达或功能。
这一技术的应用范围广泛，涉及基因治疗、疾病研究、生物工程等领域。
转染的实现主要有多种方法，包括病毒载体介导的转染、化学物质介导的转染和物理方法介导的转染等。
其中，病毒载体介导的转染被认为是最常用的方法之一。
病毒载体是一种特殊的病毒构建，它能够将外源DNA或RNA纳入自身基因组，并在感染宿主细胞时将其转导到宿主细胞的染色体中。
这种方法具有高效性和选择性，可实现稳定的基因表达和功能改变。
化学物质介导的转染方法是通过利用化学物质的特性来改变细胞膜的通透性，以促进外源遗传物质的进入。
这种方法不依赖病毒载体的使用，可以减少实验操作中的安全风险。
然而，其转染效率较低，并且对细胞有一定的毒性，需要根据具体实验需求进行优化选择。
物理方法介导的转染是通过利用物理手段，如电击、微注射、射粒子等，使外源DNA或RNA进入细胞。
这类方法对于某些无法通过化学物质或病毒载体转染的细胞有较好的效果。
然而，物理方法转染操作繁琐，且对细胞有一定的损伤，因此需要谨慎使用。
转染技术的应用主要集中在基因表达调控和功能研究两个方面。
在基因表达调控方面，通过转染外源基因，可以使细胞表达特定的蛋白质或RNA分子，从而研究其功能和调控机制。
这对于探索生物体内各种生理过程的细节至关重要。
在功能研究方面，转染技术可用于基因敲除、基因沉默和基因编辑等研究。
通过此类技术，可以研究特定基因在生物体内的作用和调控路径。
以基因治疗为例，转染技术的应用使科学家有机会将健康基因引入患者体内，从而治疗一些由基因突变引起的疾病。
通过将修复基因转染到患者的细胞中，可以恢复基因功能，从而改善患者的病情。
这一技术对于一些罕见遗传病的治疗有着重要意义。
虽然转染技术在生物学研究中具有广泛的应用，但其过程并非完美。
首先，转染的效率和转染后目标细胞的稳定性是需要考虑的因素。
转化和转染
转染和转化的区别转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。
其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。
目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。
其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。
由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。
噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。
通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。
转染是转化的一种特殊形式。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。
载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。
10cm皿和6孔板转染体系换算
10cm皿和6孔板转染体系换算转染是分子生物学实验中常用的技术之一，而在转染实验中，选择合适的培养皿和孔板是非常重要的。
常见的培养皿有10cm培养皿和6孔板，在转染体系中，需要根据实验的要求选用合适的培养皿或孔板。
本文将介绍10cm培养皿和6孔板在转染体系中的换算方法，希望可以帮助读者更好地进行实验设计和操作。
1. 背景介绍在分子生物学实验中，常常需要进行DNA转染、RNA转染、蛋白质转染等实验。
而在这些实验中，转染体系的选择对实验结果有着重要的影响。
10cm培养皿和6孔板是两种常用的培养容器，它们在转染实验中的使用有着各自的优势和特点。
需要对这两种培养容器进行合理的换算和选择，才能更好地进行转染实验。
2. 10cm培养皿和6孔板的特点10cm培养皿是常用的细胞培养容器之一，其直径约为10cm，可以用于培养大量的细胞。
而6孔板则是一种微孔板，内含有6个孔，每个孔的直径和深度都是固定的，适合进行多孔板实验。
由于这两种培养容器的不同特点，因此在进行转染实验时，需要进行合适的换算来选择合适的转染体系。
3. 换算方法对于10cm培养皿和6孔板的转染体系换算，可以按照以下步骤进行：（1）需要确定目标细胞密度或转染试剂的用量。
根据实验要求，确定需要转染的细胞数目或转染试剂的体积。
（2）根据10cm培养皿和6孔板的不同特点，进行换算计算。
通常情况下，10cm培养皿的转染体系用量可以直接转换为6孔板的转染体系用量，但需要注意具体实验情况的差异。
（3）根据换算后的转染体系用量，进行实验前的准备工作。
包括准备培养皿或孔板、细胞均匀分布等操作。
4. 实例演示以下举例演示10cm培养皿和6孔板的转染体系换算方法：假设实验需要进行蛋白质转染，10cm培养皿中转染试剂用量为2ml。
那么在6孔板中的转染体系用量如何计算呢？我们可以按照6孔板的孔数进行换算，即10cm培养皿中的转染试剂用量除以6，得到每个孔所需的转染试剂用量。
质粒转染的注意事项
质粒转染的注意事项
1. 质粒的纯度：质粒转染的前提是质粒需要高纯度，否则可能会产生不必要的背景信号，影响实验结果。
2. 质粒的浓度：质粒浓度的选取直接影响到转染效率，通常建议使用1-2μg/mL 的质粒。
3. 细胞密度：转染前需注意细胞密度的选取，通常细胞密度不宜过于密集，否则会影响转染效果。
4. 转染剂：选择适当的转染剂可以提高转染效率，目前常用的转染剂有Lipofectamine、JetPrime、PEI等。
5. 转染时间：不同种类的细胞对转染时间有不同的要求，一般来说转染时间不宜过长或过短。
6. 转染后细胞处理：转染后需要对细胞进行适当的处理，如改变培养基、加入药物等，以促进目的基因的表达或抑制。
转化和转染的概念和区别
转染和转化的区别转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。
其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。
目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。
其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。
由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组D NA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的D NA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transfo rmati on)。
噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。
通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfectio n)。
细胞转染
• •
•
尽管转染效率因细胞类型的不同而异，在104个转染 细胞中只有大约一个细胞可以稳定整合DNA (不论使用 的是线性还是环状DNA)。 没有一种方法可以适用于所有细胞和所有实验。必须 根据您的细胞类型和实验要求选择理想的方法，必须具 有高转染效率、低血细胞毒性、对正常生理学的影响最 小，且使用简单、可重复。
选择转染策略？
定因素是实验的时间范围和最终目标。
瞬时转染细胞一般在转染后24–96小时收集，常用于研 究基因或基因产物的短期表达效应，执行RNA干扰(RNAi)介可以更快速地提供结果；因为mRNA在胞浆中表达，无需 转移到细胞核，无需转录，转染数分钟后即可在部分系统 中表达转染mRNA。
• 使用选择性培养基培养时，未转染的细胞或瞬时转染 细胞都将会死亡，而表达一定水平的抗生素抗性基因 或可以补偿必需基因缺陷的细胞则可以存活。选择标 记物可保护生物体不受选择性试剂影响，这些选择性 试剂通常会杀死生物体或干扰其生长。 • 亦可利用报告基因来筛选成功转染的细胞。用于转染 子筛选的报告基因则可以轻松鉴别出包含报告基因的 细胞。
相比之下，当需要长期基因表达或转染细胞需要在多个 实验中使用时，则更多地选择稳定转染。由于将DNA载体整 合至染色体中的概率较低，因此细胞的稳定转染更麻烦、 更具挑战性，需要选择性筛选和克隆分离。因此，稳定转 染通常用于大规模的蛋白质生产、长期药理学研究、基因 治疗或长期基因调控机制研究。
三、转染的技术
2.转染的应用 • 基因表达
转染最常通过使用质粒载体在培养细胞(或动物 模型)中表达目的蛋白。另外，将带有可检测的标 记物及其他修饰的蛋白质导入细胞，可用于启动子 和增强子序列或蛋白间相互作用的研究。
• 基因抑制
转染的另一个常用用途是通过RNA干扰(RNAi)抑 制特定蛋白质的表达。
重组蛋白转染实验步骤
重组蛋白转染实验步骤
重组蛋白转染实验的步骤包括以下几个部分：
1.重组蛋白的表达和纯化：首先，通过基因工程技术将目的基因克
隆到表达载体中，并在适当的宿主细胞中进行表达。
表达出的重组蛋白需要进行纯化，通常采用亲和层析、离子交换层析等方法进行分离纯化。
2.重组蛋白的转染：将纯化后的重组蛋白导入到细胞中，常用的转
染方法包括磷酸钙法、电穿孔法、脂质体法等。
转染时需要优化转染条件，如蛋白质浓度、转染时间、转染温度等，以提高转染效率和细胞存活率。
3.细胞培养和观察：将转染后的细胞放置在适当的培养条件下进行
培养，观察细胞的生长和形态变化。
可以通过荧光显微镜、免疫荧光等技术检测重组蛋白在细胞内的表达和定位。
4.数据分析：对实验数据进行统计分析，比较不同处理组之间的差
异，并评估重组蛋白对细胞生长、凋亡等生物学过程的影响。
需要注意的是，重组蛋白转染实验需要遵循相关的实验室安全规定，如穿戴防护服、手套等个人防护措施，以避免实验操作过程中可能产生的危险。
同时，实验前需要进行充分的文献调研和实验设计，确保实验的科学性和可行性。
接合、转化、转染、转导的区别
接合、转化、转染、转导的区别转化，转导，转染的区别是什么--------------------------------------------------------------------------------转化(transformation)指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。
转染（transfection）采用与质粒DNA转化受体细胞相似的方法，即宿主菌先经过CaCl2，电穿孔等处理成感受态细菌，再将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞，进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖，这种方式称为转染。
转染是转化的一种特殊形式。
转导Transduction 是指通过病毒将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象。
如果供体DNA未与受体DNA发生重组则称此转导过程为流产转导.1、Conjugation 中文翻译为“结合”Conjugation is the mechanism by which genetic material is transferred between two bacterial cells by plasmids. A cell containing a conjugativeplasmid(F+,fertility+)forms a mating pair with a cell that does not contain a conjugative-plasmid(F-)by means of an F-pilus on the surface of the cell.The pilus contracts,pulling the two cells into contact, and the conjugative plasmids(typified by the F plasmid of E.coli ) is transferred from the plasmid-containing cell, the donor, to the recipient(in some cases,pieces of chromosomal DNA is also transfered to the recipient). The tra genes, carried on the F plasmid, contain all the information for the conjugative process.《Instant notes in Microbiology》p125说明：Conjugation 发生在原核生物，这个定义里面的关键是“ The pilus contracts,pulling the two cells into contact”这种细胞间的直接接触。
转染细胞的技术分类及效率
转染细胞的技术分类及效率
转染细胞是指向细胞引入外源DNA、RNA或蛋白质的过程，用于
基因编辑、基因表达研究等领域。
转染技术根据介导物质的不同可
以分为化学转染、生物转染和物理转染三种主要分类。
化学转染是利用化学试剂将外源DNA或RNA导入细胞内的一种
方法，常用的试剂包括聚乙烯亚胺（PEI）、脂质体、钙磷沉淀法等。
这些试剂能够与DNA或RNA形成复合物，通过与细胞膜融合或内吞
作用将外源物质导入细胞内。
化学转染的优点是操作简单、成本低廉，但效率较低，且对细胞有一定的毒性。
生物转染是利用病毒或细菌等生物载体将外源DNA导入细胞内
的方法。
常用的生物载体包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒等。
生物转染的优点是转染效率高，但存在生物安全性和操作复杂的缺点。
物理转染是利用物理手段将外源DNA或RNA导入细胞内的方法，常用的包括电穿孔法、基因枪法和超声波法等。
这些方法通过物理
力量破坏细胞膜结构，使外源DNA或RNA得以进入细胞内。
物理转
染的优点是对细胞毒性小，但操作复杂，且适用细胞类型有限。
转染效率受多种因素影响，包括转染方法、细胞类型、外源DNA/RNA的大小和浓度等。
一般来说，生物转染的效率较高，化学转染次之，物理转染效率相对较低。
此外，优化转染条件、选择合适的转染试剂和载体，以及细胞的状态和密度等因素也会对转染效率产生影响。
综上所述，转染技术根据介导物质的不同可以分为化学转染、生物转染和物理转染三种主要分类，它们各有优缺点，转染效率受多种因素影响，需要根据具体实验要求选择合适的转染方法。
质粒转染的原理
质粒转染的原理
质粒转染是一种将外源质粒引入目标细胞的技术，常用于基因工程和分子生物学研究中。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 准备质粒：选择需要转染的质粒，通常这些质粒含有感兴趣的基因或目标序列。
质粒可以通过DNA提取和纯化等方法获得。
2. 准备目标细胞：选择合适的细胞系或组织作为目标细胞，这些细胞通常能够容易地被转染。
细胞需要在培养基中良好地生长和维持。
3. 添加转染试剂：将准备好的质粒和转染试剂混合，转染试剂通常为阳离子脂质体、阳离子聚合物或其他载体。
转染试剂能够与质粒形成复合物，在细胞膜上形成孔隙或暂时改变细胞膜通透性，使质粒能够进入细胞内。
4. 转染：将质粒与转染试剂的混合物加入目标细胞培养基中，并充分混合。
转染试剂能够帮助质粒与细胞膜相互作用，使质粒顺利进入细胞内。
5. 恢复细胞：转染后，目标细胞需要经过一段时间的适应和恢复，以确保质粒的稳定继承和表达。
可以将转染细胞进行培养、筛选、分选等处理，以获得稳定表达目标质粒的细胞系。
通过质粒转染，可以将外源质粒导入目标细胞内，从而实现对
细胞的基因改造、基因表达和功能研究等应用。
这一技术在基因工程、生物医学研究和药物研发等领域具有重要的应用价值。
转染效率低的原因
转染效率低的原因
转染效率低的原因可能有很多，以下是一些可能的原因：
1.细胞状态不佳：如果细胞处于不良状态，例如在生长期末期或过于密集，转染的效率可能会受到影响。
2.转染剂浓度过高或过低：如果转染剂的浓度过高或过低，都可能影响转染效率。
过高的浓度可能会导致细胞死亡，过低的浓度可能会导致转染效率低。
3.转染剂和DNA的配比不合适：如果转染剂和DNA的配比不合适，也可能导致转染效率低。
4.DNA质量不好：如果DNA质量不好，例如存在RNA酶污染、受损或纯度过低，也可能影响转染效率。
5.细胞类型不同：不同的细胞类型可能对不同的转染方法和条件有不同的响应。
6.转染时间和处理温度不合适：转染时间和处理温度可能也会影响转染效率，不同的细胞类型可能需要不同的时间和温度来最大化转染效率。
综上所述，要提高转染效率，我们需要仔细调整各种条件，找到最适合的转染方法和条件，并且不断测试和改进，以提高转染效率。
转染转化转导名词解释
转染转化转导名词解释
嘿，咱今儿个就来唠唠转染、转化和转导这几个词儿哈！
转染呢，就好比是给细胞送个特别的“包裹”。
比如说，你想给细胞送个新基因进去，让它有点新变化，这就是转染啦！就像你给朋友送个惊喜礼物一样，细胞收到这个基因“礼物”后，可能就会有不一样的表现哟！比如在实验室里，科学家们经常用这个办法来研究细胞的各种反应呢。
转化呢，就像是细胞来了个大变身！细胞从一种状态变成另一种状态啦。
就好像灰姑娘穿上水晶鞋变成公主一样神奇！比如有些细菌，能从不能利用某种物质，突然变得能利用了，这就是发生了转化呀！
转导呢，这可有意思了，就像是个基因的“快递员”在工作。
病毒把一个细胞的基因带到另一个细胞里去，这过程就是转导啦！好比你让快递小哥帮你把东西送给别人，病毒就充当了这个“快递小哥”的角色呢！
咱再仔细想想，转染是人为地把东西送进细胞，转化是细胞自己的大变化，转导是靠病毒来帮忙传递基因。
它们是不是都很特别呀！
那它们有啥用处呢？转染可以帮助我们研究基因功能，转化能让我们了解细胞的特性变化，转导则在基因治疗等方面有着重要作用呢！
总之，转染、转化和转导，这三个词可都是细胞世界里非常重要的概念呀！它们就像细胞世界的三把钥匙，能打开好多神奇的大门呢！咱可得好好记住它们，好好理解它们的意义呀！。
转染步骤及经验(精华)
转染步骤及经验（精华）一、基础理论转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。
分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。
病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。
但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。
其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。
需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。
影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。
二、转染操作流程（以常用的6孔板为例）(1) 细胞培养：取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。
(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL，B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL；轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。
(3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。
(4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
三、转染注意事项1. 血清A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。
B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。
细胞转染的方法和基本原理
细胞转染的方法和基本原理细胞转染是生物学研究中常用的实验技术，用于将外源DNA、RNA或蛋白质引入到靶细胞中。
本文将介绍细胞转染的方法和基本原理。
一、细胞转染的方法1. 化学法转染：化学法转染是最常用的细胞转染方法之一。
通过利用化学物质如聚乙烯亚胺（PEI）或脂质体等，将外源DNA或RNA 包裹成复合物，与细胞膜结合后进入细胞。
这种方法操作简单、成本低廉，适用于多种细胞类型。
但转染效率较低，对细胞有一定毒性。
2. 病毒载体转染：病毒载体转染是一种高效的细胞转染方法。
病毒载体可以将外源基因嵌入病毒基因组中，然后通过感染细胞的方式将基因导入细胞内。
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒等。
这种方法转染效率高，适用于多种细胞类型，但需要特殊设备和技术，同时也有一定的生物安全风险。
3. 电穿孔法转染：电穿孔法利用高压脉冲作用于细胞膜，破坏细胞膜结构，从而使外源DNA或RNA进入细胞。
这种方法操作简单，转染效率较高，但对细胞有一定的毒性，并且只适用于某些特定的细胞类型。
4. 基因枪法转染：基因枪法是一种生理穿孔法，通过利用高压气体或火药驱动基因枪，将外源DNA或RNA以微粒形式直接射入细胞。
这种方法适用于多种细胞类型，转染效率较高，但需要特殊设备和技术，并且对细胞有一定的毒性。
二、细胞转染的基本原理细胞转染的基本原理是通过一定的方法将外源DNA、RNA或蛋白质引入靶细胞，使其在细胞内表达或功能发挥。
转染后的细胞可以用于研究基因功能、蛋白质表达及相互作用等。
细胞转染的基本原理可以分为三个步骤：吸附、内化和表达。
1. 吸附：在化学法转染中，外源DNA或RNA会与载体相结合形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合。
在病毒载体转染中，病毒载体会与细胞膜表面的受体结合。
吸附是转染的第一步，直接影响转染效率。
2. 内化：吸附后，外源DNA、RNA或蛋白质需要进入细胞内部。
在化学法转染中，复合物通过细胞膜的内吞作用或直接渗透进入细胞质。
转化和转染
转化和转染一、转化转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。
该现象首先发现于细菌。
1生物转化简介细胞转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。
这现象首先发现于细菌，也是细菌间遗传物质转移的多种形式中最早发现的一种，它不同于通过噬菌体感染传递遗传物质的转导以及通过细菌细胞的接触而转移DNA的细菌接合。
病毒转化的研究不但在理论上有重要意义，而且在基因工程中是将质粒或病毒载体引入宿主细胞的一种重要手段（见重组DNA技术）。
它也可能为育种和遗传性疾病的基因治疗提供新的途径。
球菌转化现象1928年英国学者F．格里菲思在肺炎双球菌中发现的。
他把不产荚膜的无毒的粗糙型肺炎双球菌和加热杀死后的产荚膜的有毒的光滑型肺炎双球菌混合注射小鼠，发现小鼠意外地被感染致死，而且从小鼠的血液中分离出活的产荚膜的肺炎双球菌。
不久又发现产荚膜细菌的无细胞抽提物同样能在试管中使不产荚膜的细菌变为产荚膜的细菌。
1944年美国细菌学家O．T．埃弗里等从元素分析、酶学分析、血清学分析以及生物活性鉴定等方面证实了无细胞抽提物中引起肺炎双球菌荚膜转化的转化因子是脱氧核糖核酸（DNA），第一次为遗传物质是DNA而不是蛋白质提供了直接的证据。
到目前为止，已经在流感嗜血杆菌（Hemophilus influenzae）、链球菌（Streptococcus）、沙门氏菌（Salmonella）、奈瑟氏菌（Ne－isseria）、根瘤菌（Rhizobium）、枯草杆菌（Bacillus subti-lis）、大肠杆菌（Escherichia coli）等几十种细菌中报道了转化现象，所转化的性状包括荚膜、抗药性、糖发酵特性、营养要求特性等等。
它们的转化因子都是DNA。
电转染过程和原理
电转染过程和原理
电转染是一种常用于对细胞进行基因转染的技术，它利用电场作用使DNA分子从胞外直接转移到细胞内。
电转染主要用于将外源的DNA或RNA导入到目标细胞中，实现基因转移、基因敲除或基因表达。
电转染的原理基于以下几个步骤：
1. 基质制备：将待转染的DNA或RNA溶解在缓冲液中，形成转染基质。
2. 细胞准备：将待转染的细胞收集并洗涤，使细胞悬浮于含有缓冲液的试管中。
3. 电转染：将经过洗涤的细胞与转染基质混合，然后放入电转染装置中。
电转染装置是由平行电极组成的装置，其中一个电极位于细胞上方，另一个电极位于细胞下方。
通常，细胞与电极之间的距离为0.2-2毫米。
4. 施加脉冲电场：在电转染过程中，施加一个短暂的高电压脉冲（通常为50-1500伏特），使细胞和转染基质之间产生电压差。
这个脉冲电场的作用是在细胞膜上形成孔隙，使外源DNA或RNA能够通过电荷间的相互作用直接进入细胞质。
5. 转染后的细胞处理：将细胞转移到培养基中，让其进行恢复和增殖。
此时，转染的DNA或RNA已经进入细胞质，并被细胞的基因表达系统识别和转录。
电转染原理的关键是脉冲电场的作用，它可以在短时间内创建一个临时微孔，使外源DNA或RNA通过穿越细胞膜，进入到细胞质中。
脉冲电场作用于细胞膜时，会产生电荷的电力作用，使细胞膜上的脂质疏水层分子破裂，形成通道，从而使DNA或RNA分子能够通过这些通道进入细胞内。
整个电转染过程通常在数毫秒到几十毫秒内完成，具有高效、可大规模转染、对不同类型的细胞适用等优点，因此在基因转染研究、基因治疗、基因工程等领域被广泛应用。
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Stealth™RNAi or siRNA TransfectionStealth™RNAi or siRNA TransfectionStealth™RNAi or siRNA TransfectionStealth™RNAi or siRNA Transfection 以24孔板为例，其余规格的转染见表1 1 中板，细胞密度为30-50%适宜。
注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。
2 第二天（24-36小时后）每个孔转染方式如下：A 将20pmol siRNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。
B 将1ul lipo2000溶于50ul Opti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。
C 将A B两管混合，放置20min。
3 转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。
将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基。
Plasmid DNA TransfectionPlasmid DNA TransfectionPlasmid DNA TransfectionPlasmid DNA Transfection DNA(ug):lipo 2000(ul)=1:2-3 转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。
1 中板。
贴壁细胞：0.5-2X105 cells/well，第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞：4-8X105 cells/well，中板后随即转染。
2 转染。
A 将0.8ug DNA溶于50ul Opti-mem无血清培养基中。
B 将2ul lipo2000溶于50ul Opti-mem 无血清培养基中，混匀室温放置5min。
C 将A B两管混合，放置20min。
转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。
将C管mix加入24孔板对应孔中，4-6小时候换成有血清培养基
Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfectionCulture S
中板密度* Culture vessel Surf. area per well V ol. of plating medium Vol. of dilution medium DNA Lipofectamine ™2000 RNA Lipofec tamine ™2000
1000-10000 cell/well 96-well 0.3cm2 100ul 2X25ul 0.2ug 0.5ul 5pmol 0.25ul
0.5-2X105 cell/well 24-well 2cm2 500ul 2X50ul 0.8ug 2.0ul 20pmol 1.0ul 1-3X105 cell/well 12-well 4cm2 1ml 2X100ul 1.6ug 4.0ul 40pmol 2.0ul 2-3X105 cell/well 6-well (35mm) 10cm2 2ml 2X250ul 4.0ug** 10ul 100pmol 5ul 8-10X105 cell/dish 60mm 20cm2 4ml 2X0.5ml 8.0ug*** 20ul 200pmol 10ul 2-3X106 cell/dish 10cm 60cm2 15ml 2X1.5ml 24ug 60ul 600pmol 30ul *：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考**：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。
***：6cm dish细胞质粒转染量4-6ug足以。