猪大肠杆菌灭活苗的研制及免疫效力试验

合集下载

猪场大肠杆菌灭活苗的制备与免疫效果观察

山东畜牧兽医2017年第38卷16猪场大肠杆菌灭活苗的制备与免疫效果观察王富贵（山东省安丘市金冢子畜牧兽医管理站 262100）摘要本研究从惠丰猪场发病仔猪中分离到致病性大肠杆菌，并对血清型菌株O64、O9、O149进行培养，经甲醛灭活，以铝胶佐剂，制成灭活菌，经检验该疫苗合格，对同型菌的攻毒保护率80%。

关键词大肠杆菌、仔猪、免疫中图分类号：S859.79+7 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2017)02-0016-03仔猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的一组肠道传染性疾病，常见的有仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病三种，以发生肠炎、肠毒血症为特征，主要发生在0~70日龄的仔猪[1]。

大肠杆菌属于条件性致病菌，当环境因素恶劣或机体抵抗力下降时，容易引发该病发生，尤其是冬季，天气寒冷，气温剧变，保温不良，空气流通不畅，更易引发此病，造成新生仔猪大批死亡或生长发育不良，严重影响养猪业的发展，给养猪户造成巨大的损失[2]。

惠丰猪场，母猪群5500头，存栏量47000头，品种为长白、大约克和杜洛克, 年产仔猪约120000头。

2015年该猪场猪群健康，年出栏量10万头，说明该猪场免疫程序在2015年前都对预防大肠杆菌病起到过一定的作用。

2016年，该猪场突然暴发仔猪黄白痢病，主要表现为一窝仔猪出生时体况正常，于12h之后，突然有一两头表现全身衰竭，很快死亡。

以后其他仔猪相继发生腹泻，粪便呈黄色浆状，含有凝乳小片。

有的转为拉灰白色粘稠粪便为特征[3]，致使仔猪发育停滞、消瘦、抵抗力下降。

惠丰猪场也曾用疫苗预防和药物治疗仔猪黄白痢，但效果不佳。

为此，从该猪场分离筛选出致病性大肠杆菌株制成铝胶苗用于该猪场后，仔猪黄白痢得到有效的控制。

1 材料与方法1.1 材料（1）用灭菌棉签从该场典型黄白痢病仔猪肛门拭取20个粪样，置无菌试管中作为病料。

（2）麦康凯和伊红美蓝琼脂培养基(上海市医学化验所试剂厂)产品型号：20151224，20种大肠杆菌0抗原单价血清(中监所)，肠杆菌科生化编码鉴定管，铝胶佐剂(浙江省军区后勤部卫生防疫检疫所)产品型号：20160104。

猪大肠杆菌多价油乳剂灭活苗

猪大肠杆菌多价油乳剂灭活苗
一、用途
预防大肠杆菌引起的子猪黄、白痢。

二、用量
1、未经本疫苗免疫过的初产母猪，于产前21天注射1次，每头用1毫升。

1周后加强免疫1次，每头用1毫升。

2、经本疫苗免疫过的经产母猪，于产前14～21天注射1次，每头用1毫升。

免疫期猪接种本疫苗后10～14天产生免疫，免疫期为3～4月。

贮藏本疫苗在－18℃环境中保存，有效期为两年；在4℃～10℃环境中保存，有效期为12个月。

三、注意事项
1、本疫苗在运输、使用过程中避免日光直射，环境温度不超过30℃。

2、必须保证使每头子猪吃足初乳。

3、当地应无疾病流行，被接种的猪一定要健康。

4、疫苗启封后一次用完，使用前应仔细检查，如发现有其他异物、变质等现象均不能使用。

5、注射器、针头等用具，用前需经煮沸消毒30分钟，注射部位采用酒精消毒，忌用碘酊。

6、对猪舍应严格监视，早期诊断，早期隔离发病猪，及时消除
传染源，并定期进行带猪消毒和转群消毒。

大肠杆菌灭活苗的免疫试验

ｔｒｅ２ｒｓ，ｔｅｐｒｏｆｒｔｃｉｎｏｎｍａｓａｅ４ｍｏｔｓｏｒ，ａｄｔｅｓａｌｅｆｒｎｅａｄｓｔｅｔｒｓａｅｇｏ．ｅｓａｏｏｈｅｄｏｏｅｔｆａｉｌｒｎｈｒｍｏｅｎｈｔｂｅｐｒｍａｃｙｆａｕｅｒｏｄｒｉｐｏｏｎ
３２
ＪｕｎｌｏｎｍａｃｅｃｎｔｒａｙＭｅｉｉｅｏｒａｆＡｉｌｉｎｅａ９１２
Ｎｏ５．
２１００
大肠杆菌灭活苗的免疫试验
党岩孙春香苟想珍马志宏杨增歧王晶钰陈德坤，，，，，，
ｐｓｆｓｎｓａｎｌｔｕｉｒｓ（Ｅｏｒｉｎ．ｃｌｓａｎ，ｎｔｉｓｆ．ｃｌａｄＳｌｏｅａｔｉ）ｔｅ．ｃｌｉａｔａｄｖｃｉａｏｔｉ．ｃｌｓａｓｄＥｏｉｔｉｓａｄｓａｏｎａｍｎｌｒｎ，ｈｉｔｎａｒｒｎｏＥｉｌｓａｓＥｏｃｖｔｃｅｉｎｉｅａｎ
２Ｃｌｇ厂Ｖｔｉｒ．ｏｌｅｏｅｒａｙＭｅｉｎ，ｏｔｗｓＡＦＵｉｒｔ）ｅｅｎｄｉＮｒｅｔ＆ｎｅｉｃｅｈｖｓｙ
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＷｉｈｔｔｅＥ．ｃｌｖｃｉｅｅｅｏｅｙｔｅｒｐｅｅｔｔｅＥ．ｏｉｆＧａｓｒｖｎｅｓｒｔｐｓａｄｔｅｓｌｃｅｒｔ－ｈｏｉａｃｎｓｄｖｌｐｄｂｈｅｒｓｎａｉｃｌｏｎｕＰｏｉｃｅｙｅｎｈｅｅｔｄｐｏｏｖｏ

猪大肠埃希氏菌多价灭活苗的免疫实验

ｔａｔＣｏｓｈｕｅｉｒｓｍｎｅｔｅａｉｕｎＴｏｇｉｒａｗｈｃａＩｃｕｅｄｓａｅｓｒｃ：ｈｏｅｔｅｓｐｒｃｕｉｔｓｉｓｂｃｌｓｉｎ［ｏａｅｏｎ［ａｉｃＹａｓ１ｓｈｅ
猪大肠杆菌病是大肠埃希氏菌（￣ｈｒＳａｃｉ某些血清型菌株引起的一类疾病的总称由大肠杆菌Ｅｅｉｉｏｌｃ）
引起的哺乳仔猪腹泻会导致机体水分和电解质大量丧失而使机体衰弱甚至死亡．给养猪业造成严重的经济损失… ，临床上，根据发病日龄和临床症状分为：１仔猪黄痢（可（）又称早发性大肠杆菌病）（）；２仔猪白痢（又称迟发性大肠杆菌病）．Ｊ致病性大肠埃希菌易产生多重耐药性，药物控制，疗效果不佳，用治费用
ｔｏ￣ｎｎｉｅｈｎｒｄｓ＿ｃｉｍａ１ｒｕｔｅｖｔｆｍｍｕｔ￣ｃｅ８５％ａｄｔｅｅｈｕｄａｄｆｕｄｅｗ『ｓ［ｇｏｐ．ｈａｉｏｒ１ｎｏｉｉｒａｈｓ９．ｙｎｈｆ
ｌＡｎｍａｓｉｎｅａｄＦｃｎｌｇ￣ｅｅＩｎｒＭｏｇＥ；ｉｅｓｌＮａｉａｉｅ．ｏｇｉｏ｛８４Ｃｈｎｚ１ｉ！ｃｅｃｎｅｈｏｏｙＯｌｇ，ｎｅｎｏａｒｎｖｒｉｌ．ｙ＾ｔ，ｉｉＴｎ！ｃｎｌｓａ｝０２．ｉ；２；
ｅｓｙａｄｗｈｃｍｍｕｉｓｔｎｎｕｈＳｃ；ｌＳ１ｏ∞；、１；３；Ｆ：Ｓ；＆ｉｎ［ｉｈｉｎｙｉｓｒｇｅｏｇ，ｕｈａｔｏｓ、３；ＰｍＯ１Ｓ１、８Ｏｒ｛Ｊ０ｔＩａｆｔｃｉａｅ－ａｎａｃｅａｄｉｏｕｔｆｍｌｉｅｔｔｎｆｒ４ｉ４，ｍｕａｔＩｄｉ＠ｖ［ｔｃｉ，ｎｃ［ｅａｐｇｉｇｓｉＩＴｆｏｎｃｍａｖ：￣ｅｖｎｎａｅｎａｏｏ

猪大肠杆菌灭活苗的制备和应用

维普资讯
２００２年第２期
猪链球菌病的综合防治方法
王森，李森
（１业技术学院，１４６０）周３职周３６０１
１９９６年以来，口市川｛、华、阳、周仁区西淮商
１５℃，井在２４ｈ内精神、食欲、便无异常反应者视为安粪
全。
从患病猪场发病严重的病死仔猪的肝脏分离大肠杆
３３
效力检验
菌，进行培养特性和毒力等方面的鉴定，符合要求者既可
供制苗用。１１培葬特性．
取待检活疫苗，以每头仔猪１ —２ｍｌ的剂量分别给５头１日龄仔猪肌肉注射；另取生理盐水，同拌的剂量以分别蛤５头同日生的同窝仔猪肌肉注射作对照。５～７天
２３丑活制苗
猪和未免疫组仔猪进行攻击试验。也就是说，分别在免疫组和未免疫组抽取符合上述条件的８新生仔猪，头每头仔
猪分别灌服１０ｍ大肠杆菌混合菌株肉汤培养棱，击．ｌ攻
按菌渣量加Ａ１％的甲醛（甲醛浓度为０５，．％）充分振荡、混合均匀，７℃藏活２－３；３４６ｈ经捡验无菌生长后，按亩｛量加入２％氢氧化铝腔．莨０同时加入１１Ｑ［０００的柳硫汞防腐制成氢氧化铝脏苗。
维普资讯
河南农业科学
猪大肠杆菌灭活苗的制备和应用
周富荣，王建国
（河南职业技术师范学院动物科学系，多４３０）新５０３猪大骑杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的一种以严重鹿泻和敢血症为特征的急性传染病。主要侵害仔猪．临床表现为黄痢自痢和水肿，发病快，亡率高。即便是治死愈，其生长发育也舍受到严重影响。由于大晒杆菌血清型多．传播途径广，目前尚无经济适用、效果理想的治疗方法。笔者采用患病猪场的致病性大肠杆菌，制成活苗．再对同一猪场出生的仔猪进行免疫预防．取得了理想的预

仔猪腹泻性大肠杆菌蜂胶灭活菌苗的研制及应用

ｌ１６
养猪ＳＷＩＮＥＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ（２）
２０１５
仔猪腹泻性大肠杆菌蜂胶灭活菌苗的研制及应用
秦毅斌，梁家幸，卢冰霞，何颖，黎珂钰，李斌，苏乾莲，周英宁，蒋冬福，卢敬专，陈忠伟，闭炳芬，赵武
的仔猪持续性腹泻进行了深入调查研究，分离到耐液琼脂和ＴＳＡ琼脂，培养１８～２４ｈ，观察菌落形态特药严重的．ｃｏ如菌株，并研制了Ｅ．ｃｏ屁蜂胶灭活菌征。挑取典型菌落，接种营养琼脂、麦康凯琼脂，纯化苗免疫本场产前１５ｄ的怀孕母猪，有效控制了猪场培养，并进行培养特性鉴定。取纯培养物涂片，革兰
观察细菌形态。哺乳仔猪持续性腹泻病例的发生，为中小规模猪场氏染色，
收稿日期：２０１４一ｌ２ — １６基金项目：广西水产畜牧兽医局科研项目（桂渔牧科１２０４９０３１）；广西畜禽疫苗新技术重点实验室系统性研究课题（１２－ｏ７ｌ８一Ａ一５）作者简介：秦毅斌（１９８３一），男，广西临桂人，助理研究员，硕士，主
摘要为研究猪场大肠杆菌蜂胶灭活菌苗对仔猪大肠杆菌性腹泻的防治作用，对广西某中型养猪场发生哺乳仔猪持续性腹泻病例进行流行病学调查和实验室诊断。从腹泻仔猪的肾脏、肠系膜淋巴结等内脏器官中分离到病原菌，经生理生化、培养特性、形态特征鉴定为大肠杆菌。药敏试验结果表明，分离菌株对环丙沙星、恩诺沙星、利福平、新生霉素、复方新诺明、奥普托欣、克林霉素、万古霉素等２４种药物均耐药，占试验药物的６８．５７％。以分离菌株为制苗菌株，经培养灭活后，以蜂胶为佐剂，研制出本场大肠杆菌蜂胶灭活菌苗，对产前１５ｄ的妊娠母猪进行免疫，仔猪通过母乳获得母源抗体来预防大肠杆菌性腹泻。临床应用表明，该菌苗使用安全、免疫效果良好，可显著

新型仔猪黄白痢大肠杆菌灭活疫苗的研制

之急最首要的问题是选择流行性较强的ＨＳ培养基中，３ ℃ 培养２７４～４ｈ。８
菌株作为菌苗株。本试验从长治地区送１３致病力试验．
汤琼脂斜面各１支，继续３ｏ培养７天，７Ｃ
若均无杂菌生长，判定合格。
暮爰趣声竣碑菌每灭演秘培养菌直肉汤培养基、普通琼脂培养基、麦康凯
爱
餐疫苗并比较两辑甍茁琼脂培养基。
仪器：显微镜、电热恒温培养箱、
将分离所得菌株接种于普通肉汤试管
中，置３ ℃ 恒温振荡培养２ｈ，制备攻７４
挑取可疑茵落纯培养物，分别接种
大，疫苗免疫接种成为有效的预防途于葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、阿
径。由于病原菌血清型众多，各个血清拉伯醇、山梨醇、硝酸盐、酒石酸盐、Ｒ试验、靛基质、半固体及型之间的文叉保护性不高，所以，当务水杨酸、Ｍ．
１５１菌种增殖．．
６巷６謦麓
象雳超声硬缛蠢依剽１２菌种的分离鉴定．簪蛰霞蕾鞍蕾通疫苗的免１２１病料来源＿．
长治地区送检的疑似黄自痢大肠杆菌病仔猪，送检时见病仔猪精神萎靡、采
将分离所得Leabharlann 株接种于普通肉汤试管中，置３ ℃培养１７ｈ６～１，然后划线接８
１２２细菌分离培养及镜检＿．

猪场大肠杆菌灭活苗的制备

家畜及时进行免疫相结合，做到村不漏户、户不漏畜、
畜不漏针，确实提高生猪免疫密度。同时，还要做好免疫档案记录工作，做到有案可查，确保每一个养殖户畜禽都建立免疫档案，做到针针有记录，户户有档案。２．５加强动物检疫，抓好以检促防要加强动物产品质
２．６做好动物疫情预警预报
动物疫情预警预报是控制
动物疫情发生的有效手段。（１）建立健全的动物疫情信息收集网络，分析监测数据，及早掌握疫情动态，有效预测流行态势，抓实抓好畜禽疫病监测，并严格执行疫情报告制度；（２）加强与养殖场（户）的联络，落实专门的动物疫情信息报告员，加大对所管辖区内的动物疫情收集、反馈能力；（３）继续做好全州养殖、市场、屠宰等
山东畜牧兽医
２０１４年第３５卷
猪场大肠杆菌灭活苗的制备
王亮（山东省安丘市畜牧局
中图分类号：ｓ８文献标识码：Ｂ
２６２１００）
文章编号：１００７．１７３３（２０１４）０５－００６４．０２医卫生防疫站），免疫与非免疫２日龄仔猪各１５只，妊娠母
钝圆的Ｇ一短小杆菌再接种于麦康凯琼脂培养基上培养，
３７￣Ｃ培养１８－２４ｈ，重复２～３次，确认无杂菌后后分别移至琼脂斜面上，作为纯菌种。
１．４菌种鉴定
１材料与方法
１．１材料

规模化猪场大肠杆菌多价灭活苗的免疫试验

ｈｓａｉｅｅｔｔｃｅｃｌｗａｉｕｇｔｂｔｄｒａｙｎｒｄｈｒｉｔｏｇｔＣｎｌｉ】ｎＴｉｖｃｅｒｖｎｅｅｎｉｎｅｆｅｏｄｈｔｓｏｒｆｉｅｔｒｎｅｔｃａｅｅｕｖａｒｅｆｉｅ．【ｏｃｓｎＩｃｎｐｄｈｉｄｏｙｌｎｗｅｃｏｐｌｓｅｅａｇｌｉｅｓｔｓｖａｐｌｓｌｕｏ
ＷＡＮＧｎｌｔａ（ｎｔｕｅｏｉｌｓａｄｙａｄＶｔｒａｄｃｎ，ｂｉＡａｅｆＡｉｕｔｒｌｃｅｃ，ｈｎ，ｂｉＨｏｇ－ｎｅｌＩｓｉｔｆｍａＨｕｂｎｒｎｅｅｉｒＭｅｉｉｅＨｕｅｃｄｍｙｏｇｃｌａｉｎｅＷｕａＨｕｅｉｔＡｎｎｙｒｕＳ
４０６）３０４Ａｂｔａｔ【ｂｅｔｅＴｅｅｅｒｈａｍｅｒｖｄｅｈｏｅｉａｂｓｓｏｄｃｎｅｃｎｍｉｓｆａｇ－ａｅｐｇａｍｓｈｔａｓｄｂｓｒｃＯｊｃｉ】ｈｓａｃｉｄｔｐｏｉｅｈｅｒｔｌａｉｆｒｅｕｉｇｔｏｏｃｌｓｏｒｅｓｌｉｆｒａｃｕｅｙｖｒｏｔｔｃｒｈｅｏｌｃｔＥｃｅｃｉｉＭｅｈｄＴｅｄｍｉａｔａｔｅｅｏｙｅｓａｎｆａｈｇｎｃｃｌｔａｅｅｉｌｔｄｆｍ３ｌｒｅｓａｉｒｂｉｓｈ￣ｈａｃｌｏ．【ｔｏ】ｏｎｎｎｉｎｓｒｔｐｔｉｓｔｏｅｉＥ．ｏｉｈｔｒｏａｅｏｇ－ｌｐｇａｍｓｉＨｕｅｈＯ－ｇｒｏｐｗｓｒａｃｅｆｎ

原场猪大肠杆菌多价灭活苗的制备及免疫效果

［收稿日期］2006-02-22；2006-04-15修回［基金项目］河南科技学院大学生创新基金项目（20050026）［作者简介］赵恒章（1972-），男，讲师，从事动物疫病防治研究。

［文章编号］1001-3601（2006）06-0324-0074-02原场猪大肠杆菌多价灭活苗的制备及免疫效果赵恒章，王丽荣，韩雪飞，董永军，姜金庆，时红攀（河南科技学院动物科学系，新乡453003）［摘要］用从豫北一自繁自养大型养猪场发病仔猪分离到的致病性大肠杆菌血清型菌株0101、064、0138进行培养，经甲醛灭活，以铝胶佐剂，制成原场猪大肠杆菌灭活苗，含菌量为200亿/mL，分别于产前40d和15d各注射3~4mL/头。

仔猪出生后，通过哺乳可获得一定量抗大肠杆菌抗体，使仔猪对大肠杆菌病具有一定的抵抗力。

试验证明，该灭活苗对同型菌株攻毒保护率达86%以上，对仔猪黄白痢有较好的预防作用。

［关键词］致病性大肠杆菌；仔猪黄白痢；铝胶苗［中图分类号］$852.5；$858.28［文献标识码］APreparation of Multivalent lnactivated Vaccine of ColonBacillus（Escherichia coli）and lts lmmunity Effect in Pig ZHA0Heng-zhang，WANG Li-rong，HAN Xue-fei，D0NG Yong-jun，JIANG Jin-ging，$HI Hong-pan（Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang453003，China）Abstract：The inactivated vaccine with20biiiion/mL was made from three pathogenic coion baciiius strains isoiated from the diseased baby pig of pig farm.The sow was twice injected by3~4mL of the inactivated vaccine before40d and15d of preparation and the baby pig has the certain resistant to coion baciiius by miiking.The resuits show that the preventive rate of the inactivated vaccine to the same strain is above86%，which is of better preventive effects to yeiiow scour and white scour of baby pig.Key words：pathogenic Escherichia coli；yeiiow and white scour of piget；inactivated vaccine近年来，豫北一大型猪场持续暴发仔猪黄白痢病，主要表现为：一窝仔猪出生时体况正常，于12h之后，突然有一两头表现全身衰竭，很快死亡。

原场猪大肠杆菌多价灭活苗的制备及免疫效果

原场猪大肠杆菌多价灭活苗的制备及免疫效果
原场猪大肠杆菌多价灭活苗的制备及免疫效果
用从豫北一自繁自养大型养猪场发病仔猪分离到的致病性大肠杆菌血清型菌株O101、O64、O138进行培养,经甲醛灭活,以铝胶佐剂,制成原场猪大肠杆菌灭活苗,含菌量为200亿/mL,分别于产前40 d和15 d各注射3～4 mL/头.仔猪出生后,通过哺乳可获得一定量抗大肠杆菌抗体,使仔猪对大肠杆菌病具有一定的抵抗力.试验证明,该灭活苗对同型菌株攻毒保护率达86%以上,对仔猪黄白痢有较好的预防作用.
作者：赵恒章王丽荣韩雪飞董永军姜金庆时红攀 ZHAO Heng-zhang WANG Li-rong HAN Xue-fei DONG Yong-jun JIANG Jin-qing SHI Hong-pan 作者单位：河南科技学院,动物科学系,新乡,453003 刊名：贵州农业科学ISTIC PKU英文刊名：GUIZHOU AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)：2006 34(6) 分类号：S852.5 S858.28 关键词：致病性大肠杆菌仔猪黄白痢铝胶苗。

大肠杆菌灭活苗的制备实验报告

大肠杆菌灭活苗的制备实验报告
一、实验原理：
大肠杆菌灭活苗是使用化学灭活方法制备的。

该方法是将大肠杆菌在一定条件下加入一种化学物质，使其失去生活能力和毒力，但其外壳结构和抗原性不变，故其仍能被人体免疫系统所识别，从而激发人体免疫系统产生对该菌所特有抗体，从而达到预防感染的效果。

二、实验材料：
大肠杆菌菌株、PBS缓冲液、formalin（40%）、自来水、离心管、试管、医用蒸馏水、十字玻片、培养皿、吸管
三、实验步骤：
1、打开实验室通风系统，将操作台、仪器、装备、药品、材料全部消毒并清洁；
2、取一枚大肠杆菌培养皿，用针筒直接采集细菌，转移到一个装有10ml PBS缓冲液的离心管中；
3、离心5min，取上清并弃去细胞沉淀，反复洗涤三次，使得细菌完全清洁；
4、加入2ml PBS缓冲液，混匀后加入2ml formalin进行灭活；
5、在试验室通风橱中进行搅拌混匀操作2小时，然后拿出来进行定量调节：将浓度调至1×10^9CFU/ml；
6、最后将调节好的大肠杆菌灭活苗分装到离心管中，用十字玻片做计数，并测定样品的灭活率；
7、所有操作均用无菌操作。

完成后材料、试剂倆做严密包装并寄存冷藏。

四、实验结果：
制备好的大肠杆菌灭活苗样品浓度为1×10^9CFU/ml，灭活率为
99.9%以上。

五、结论：
通过本次实验，我们成功地制备了浓度为1×10^9CFU/ml的大肠杆菌灭活苗样品，灭活率达到了99.9%以上，证明化学灭活方法可以有效地去除大肠杆菌菌株中的有毒因子，制备出灭活苗制品。

湘中地区大肠杆菌自家灭活苗的研制与应用

湘中地区大肠杆菌自家灭活苗的研制与应用龚泽修【摘要】为研究大肠杆菌自家灭活苗的效果,选用从湘中丘陵区某中小型养猪场发病仔猪分离到的致病性大肠杆菌进行培养,制成猪大肠杆菌自家灭活苗,妊娠母猪于产前28d和14d各肌肉注射自家灭活苗5mL,所产仔猪于7日龄腹腔注射自家灭活苗2mL.试验结果证明,该灭活苗对仔猪黄白痢有较好的预防作用.【期刊名称】《湖南畜牧兽医》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】2页(P7-8)【关键词】大肠杆菌;仔猪黄白痢;自家灭活苗【作者】龚泽修【作者单位】湖南娄底职业技术学院农林工程系,湖南娄底417000【正文语种】中文【中图分类】S852.4猪大肠杆菌病是由猪源性致病性大肠杆菌感染引起的以腹泻为主的消化道传染病，临床表现主要为仔猪黄痢、仔猪白痢和水肿病[1]。

据报道，由致病性大肠杆菌引起仔猪腹泻发病率达3 5%[2]，死亡率达11.5%～29.5%[3]，尤其是1周龄以内的新生仔猪发病率和死亡率更高，给养猪业带来了极大的经济损失。

目前很多猪场通过化学药物和菌苗接种对猪大肠杆菌病进行防治。

由于长期使用大量抗菌药物，导致产生了许多耐药性菌株，对本病的治疗效果也越来越差。

不同猪场的大肠杆菌血清型不同，对药物的敏感性也不一样，并导致药物治疗效果并不理想。

因此，采用菌苗接种预防本病的发生十分重要。

但由于大肠杆菌血清型多，各地血清型不相同[5]，对本病的预防效果差异非常大。

近年来，湘中某中型猪场持续暴发仔猪黄白痢病，用外购疫苗预防和药物治疗效果不佳，给猪场带来严重经济损失。

为此，本研究从该猪场分离筛选出地方优势致病性大肠杆菌菌株制成铝胶灭活苗，经临床应用后，该猪场仔猪黄白痢得到了有效的控制。

本研究为中小规模猪场大肠杆菌病进行生物防治技术研究具有十分积极的现实指导意义。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 分离菌株分离菌株取自湖南娄底某猪场患黄(白)痢表现严重腹泻症状的哺乳仔猪直肠中致病性大肠杆菌，用于菌苗的制造。

大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验

大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验摘要大肠杆菌自家灭活油乳苗的制备及疫苗质量检验研究结果表明，按乳化剂的亲水亲油平衡值设计4个配方，通过对乳化剂粘度测定、乳剂类型测定、稳定性测定得出最佳乳化剂配方为90%白油、10%司本-80、2.0%吐温-80、1%硬脂酸铝。

以此配方作为免疫佐剂，制备自家灭活油乳苗，并对其质量进行检验。

经检验合格后，采用流行病学方法评价疫苗的免疫接种效果。

结果表明，自家苗对试验动物小白鼠有保护力。

关键词大肠杆菌；灭活油乳苗；制备；疫苗质量；检验大肠杆菌为肠杆菌科、埃希菌属，兼性厌氧菌，为革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

由Echerich于1885年发现。

在相当长的时期内，一直被视为正常菌群。

直到20世纪中叶，人们才认识到一些特殊血清型对人和动物有致病性。

大肠杆菌血清型较多，各血清型之间没有交叉免疫力，菌株易发生变异，因此市售大肠杆菌疫苗无法覆盖所有致病性大肠杆菌血清型。

自家疫苗针对性强，在未引入外来畜禽前能收到较好的免疫效果。

因此，及时分离到菌株，制取自家灭活疫苗来免疫畜禽是一种经济、效果好的预防致病性大肠杆菌的措施。

1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 主要试剂。

营养肉汤、Minca培养基、麦康凯培养基、硫乙醇酸盐（T.G）培养基、酪胨琼脂（G.A）培养基、葡萄糖蛋白胨水（G.P）培养基、白油、司本-80、吐温-80、硬脂酸铝、0.85%生理盐水，甲醛溶液，麦氏浊管。

1.1.2 仪器。

胶体磨、电子天平、精密试纸、HY-8大容量振荡器、PGX型多段可编程光照培养箱、电热恒温培养箱、电热恒温鼓风干燥箱、SW-CJ-1FD 型单人单面净化工作台、TDL-40B离心机、冰箱、离心管。

1.2 试验方法1.2.1 乳化剂配方的优化。

乳化剂配方设计根据乳化剂的亲水亲油平衡值，固定亲油性乳化剂司本-80，改变亲水性乳化剂吐温-80，设计4种乳化剂配方（表1），并与等量生理盐水乳化。

大肠杆菌疫苗的制备

大肠杆菌灭活苗的制备实验原理致病性大肠杆菌是人和多种动物（猪、鸡等）的致病菌之一。

疫苗免疫是控制大肠杆菌病的主要方法。

从动物体分离或实验室保存鉴定的大肠杆菌菌株，经扩增培养，配制成适当浓度，用甲醛灭活，使大肠杆菌失去毒力但又保持免疫原性，制成灭活疫苗。

在疫苗中添加白油佐剂，有利于增强疫苗的免疫效果。

甲醛是最古老常用的灭活剂，现在我国用的26种灭活疫苗，均以甲醛为灭活剂。

性质：甲醛为刺鼻的气体，水溶液叫福尔马林，浓度为36%-40%。

10°C 以下易聚合成三聚甲醛或多聚甲醛，为白色沉淀。

甲醛的醛基起灭活作用，可使蛋白质的氨基→羟甲基胺；羧基→亚甲基二醇单酯；羟基→羟甲基酚；巯基→硫代亚甲基二醇。

浓度：需氧菌甲醛浓度到0、1%--0、2%，厌氧菌0、4%--0、8%，病毒0、05%--0、4%，原则是浓度低，时间短，温度低可以灭活细菌，尽量减少破坏抗原（通常加入量，以福尔马林量计算，不再折合甲醛浓度）。

乳化剂是一种降低其它溶液表面张力作用的物质，可使一种物质分散混合于另一不相容的液体中。

司本80或吐温80是乳化剂，他们可使油类和水剂疫苗乳化均匀。

疫苗水剂是分散相（内相），油类为连续相（外相），两者中间是乳化剂，可以做成油包水，W/O；也可以做成水包油，O/W；前者不易吸收，储存时间长。

后者容易吸收和释放。

实验目的1、掌握细菌性疫苗的灭活原理与方法2、掌握疫苗的乳化原理与方法3、掌握细菌性疫苗的制备方法实验器材与试剂分光光度计、超净台、离心机、组织匀浆器、恒温培养箱、培养皿、涂布器、棉签、三角烧瓶试剂：牛肉膏培养基、生理盐水、大肠杆菌、甲醛、白油、司班-80菌种分离与鉴定（略）：本试验室保存。

细菌的扩大培养：将菌种均匀涂抹于营养琼脂平板表面，37℃培养18～24h，以灭菌生理盐水洗下所有培养物，置灭菌三角瓶中。

油乳剂苗的制备（1）灭活：取细菌培养液，以灭菌生理盐水稀释至含细菌总数为150亿/mL （比浊法测定OD600>1×109）.加入菌液体积0.4%的福尔马林，于37℃恒温条件下灭活48h，其间每隔4～5h摇振一次。

大肠杆菌灭活苗的制备实验报告

大肠杆菌灭活苗的制备实验报告实验目的：1.熟悉大肠杆菌培养和灭活方法；2.学习掌握灭活苗制备的实验技术。

实验原理：实验步骤：1. 大肠杆菌培养：取一块LB平板，用灭菌铁环沾取一点大肠杆菌单克隆菌株，点接在含有LB培养基的离心管中。

将培养管放入恒温摇床中，以37℃、200rpm的条件下培养12-16小时。

2.培养基的制备：将1LLB培养基溶解于适量的蒸馏水中，加入适量的琼脂糖。

将混合溶液调节至pH7.0左右，然后将溶液加热至溶解琼脂糖完全。

将溶液分装入离心管中，每管倒满2/3，然后将倒置固化。

3.灭活实验：将大肠杆菌培养物离心，去除上清液，然后加入对应的化学灭活剂。

常用的化学灭活剂有福尔马林、甲醛以及石灰。

选择合适的灭活剂和浓度，将大肠杆菌悬液与灭活剂混合，混匀后放置室温下静置一段时间。

4.灭活后的处理：灭活结束后，将灭活后的大肠杆菌培养物通过离心使菌体沉淀，去除上清液。

然后用生理盐水洗涤培养物，再次离心使菌体沉淀。

重复洗涤步骤，以去除残留的灭活剂。

5.疫苗的制备：将洗涤后的菌体沉淀用生理盐水稀释至适宜浓度，然后将稀释液分装入疫苗瓶中。

6.储存条件：将制备好的大肠杆菌灭活苗储存在2-8℃的冰箱内。

储存期一般不超过3个月。

实验结果：制备好的大肠杆菌灭活苗应该呈现透明无菌液体。

实验注意事项：1.在培养大肠杆菌时要注意无菌操作，避免外源菌污染。

2.在灭活过程中，要控制好灭活剂的浓度和作用时间，避免对菌体产生过大的损伤。

3.制备疫苗后要储存于低温冰箱中，避免菌体的破坏和变化。

4.实验过程中要注意个人防护，避免与化学灭活剂直接接触。

实验总结：通过本次实验，我们成功地制备了大肠杆菌灭活苗。

制备疫苗的过程需要准确掌握各个步骤和相关技术，以确保疫苗的质量和效果。

此外，实验中还需要注意无菌操作、化学灭活剂的使用和个人防护等安全问题。

通过这次实验，我们不仅熟悉了大肠杆菌的培养和灭活方法，还对灭活疫苗的制备过程有了更深入的了解。

猪大肠杆菌灭活菌苗的研制及应用

猪大肠杆菌灭活菌苗的研制及应用
王福传;张玉换;李骅;王彩先;黄毓红
【期刊名称】《山西农业科学》
【年(卷),期】2000(028)001
【摘要】采用当地规模猪场黄痢致死猪脏器组织分离的大肠杆菌研制成菌苗,对46头妊娠母猪于产前免疫注射处理.结果,免疫组的平均发病率为9.97%,组间差异不显著(P＞0.05),比对照组(45.98%)降低36个百分点,差异高度显著(P＜0.01).其中以产前4周和2周两次注射10ml效果较好,发病率仅为6.19%.
【总页数】3页(P82-84)
【作者】王福传;张玉换;李骅;王彩先;黄毓红
【作者单位】山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032;山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西,太原,030032
【正文语种】中文
【中图分类】S858.28
【相关文献】
1.鸡大肠杆菌多价灭活菌苗的研制和应用 [J], 许兰菊;蒋大伟;方丽云;李建华
2.仔猪大肠杆菌灭活菌苗的研制 [J], 董冰
3.仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的研制与应用 [J], 刘泽文;
袁芳艳;刘威;周丹娜;段正赢;郭锐;杨克礼;田永祥;阮征
4.仔猪黄白痢自体灭活菌苗的研制与应用效果观察 [J], 熊忠良;黄新明
5.仔猪腹泻性大肠杆菌蜂胶灭活菌苗的研制及应用 [J], 秦毅斌;卢敬专;陈忠伟;闭炳芬;赵武;梁家幸;卢冰霞;何颖;黎珂钰;李斌;苏乾莲;周英宁;蒋冬福
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

仔猪黄白痢大肠杆菌灭活苗的研制与应用

仔猪黄白痢大肠杆菌灭活苗的研制与应用
马海利;王瑞吉
【期刊名称】《养猪》
【年(卷),期】1995(000)003
【摘要】从山西某种猪场仔猪黄白痢粪便中分离出致病性大肠杆菌Ｏ１４９：Ｋ８８ａｃ、Ｏ１８和Ｏ１１２菌株，分别制成Ｏ１４９：Ｋ８８ａｃ单价苗和Ｏ１４５：Ｋ８８ａｃ、Ｏ１８和Ｏ１１２多价苗，应用于该种猪场妊娠母猪，结果：免疫组母猪所产仔猪黄白痢的发病率明显低于对照组（Ｐ〈０．０１），且多价苗的免疫效果明显优于单价苗（Ｐ〈０．０１），免疫组母猪所产仔猪因黄白痢的致死率明显低于对照组（Ｐ〈０．０１）。

【总页数】2页(P38-39)
【作者】马海利;王瑞吉
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S859.797
【相关文献】
1.鸽新城疫油佐剂灭活苗的研制与应用 [J], 杨冰;康广萍;张波;符子华;易忠;胡尔玛西;王淑莉;王红巧;李丽;李黎
2.鸡新城疫一多价大肠杆菌二联油乳灭活苗的研制与应用 [J], 任素芳;崔锦鹏;颜世敢;徐培莲
3.湘中地区大肠杆菌自家灭活苗的研制与应用 [J], 龚泽修
4.鹅巴氏杆菌油乳剂灭活苗的研制与应用效果 [J], 凌明亮
5.水貂犬瘟热的诊断及蜂胶组织灭活苗的研制与应用 [J], 王兆学;毕可东
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大肠杆菌灭活菌的制造及应用效果

大肠杆菌灭活菌的制造及应用效果
高林;胡宾
【期刊名称】《养猪》
【年(卷),期】1989(000)004
【摘要】由致病性大肠杆菌(E.Coli)引起的仔猪黄、白痢在各猪场均有不同程度的发生,对仔猪的育成、增重影响很大。

目前药物疗法费用高、效果不显著,特别在集约化养猪条件下,消耗人力物力太大。

本试验本着“以防为主”的原则,试图用大肠杆菌灭活苗(以下简称灭活苗)预防本病的发生。

试验全过程均在辽宁省马三家机械化养猪试验场进行。

【总页数】2页(P27-28)
【作者】高林;胡宾
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S858.280.5
【相关文献】
1.鸡大肠杆菌多价灭活苗临床应用效果观察 [J], 刘卫忠
2.某鸡场大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定及自家灭活苗免疫效果检测 [J], 王成聪;黄秋华;严金平;王娟
3.鸡大肠杆菌多价灭活菌苗(新疆株)应用效果观察 [J], 向春和;剡根强;刘思国
4.超声灭活大肠杆菌制造禽大肠杆菌病疫苗 [J], Doron;Melamed
5.禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制 [J], 金天明;谷禹;马文芝;周淑云;李富桂;郭亮;张建斌
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。