氯仿-甲醇提取法41页PPT
展开剂的配制操作规程
目的：建立展开剂的配制操作规程。
适用范围：本操作规程适用于展开剂的配制。
职责：1.该文件归口质量保障部管理。
主管负责该文件的培训与具体实施。
3.检验员对该文件的正确执行负责。
程序：1.器具：25ml量筒、2ml刻度吸管、100ml量筒、10ml刻度吸管、50ml 量筒、5ml刻度吸管。
2.操作步骤：展开剂：正已烷-氯仿-甲醇（：4：1）用50ml量筒量取正已烷45ml，用25ml量筒量取氯仿24ml，再用10ml 刻度吸管吸取甲醇6ml，同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
展开剂：氯仿-甲醇-水（15：7：2）用100ml量筒量取氯仿60ml，用50ml量筒量取甲醇28ml，再用10ml 刻度吸管吸取水8ml，三液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
氯仿-甲醇（40：1）用100ml量筒量取氯仿80ml，用2ml刻度吸管吸取甲醇2ml，两液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5：2：1）用50ml量筒量取甲苯40ml，用25ml量筒量取醋酸乙酯16ml，用10ml 刻度吸管吸取甲酸8ml，三液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
氯仿-环已烷（5：1）用50ml量筒量取氯仿50ml，用10ml刻度吸管吸取环已烷10ml，两液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
石油醚（60~90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）用100 ml 量筒量取石油醚（60~90℃）60ml，用25ml量筒量取甲酸乙酯20ml，用5ml刻度吸管吸取甲酸4ml，三液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
醋酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）用100ml量筒量取醋酸乙酯80ml，用25ml量筒量取乙醇20ml，用10ml 刻度吸管吸收水10ml，三液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
苯-醋酸乙酯（19：1）用100ml量筒量取苯95ml，用5ml刻度吸管吸取醋酸乙酯5ml，两液同置于干净的棕色试剂瓶中，密塞，摇匀，即得。
2提取分离方法
如挥发油、小分子的香豆 素类、小分子的醌类成分的 提取。
3.升华法（sublimation）
固体物质受热不经过熔融，直接 变成蒸汽，遇冷后又凝固为固态，称为升华。
中草药中有一些成分具有升华的性质，可以利用升华 法直接自中草药中提取出来。如樟脑、咖啡因。
二、中草药有效成分的分离与精制
（一）根据物质溶解度差别进行分离
物理过程。
超声波引起液体介质的振
动，并且通过空化现象， 造成植物细胞壁及整个生 物体破裂； 溶液渗透到药材细胞中，
加速成分的溶解。
微波提取法
穿透性强，选择性高， 加热效率高，操作简 便。
缺点：成分变化、生物 活性变化。
2. 水蒸气蒸馏法：
适用于具有挥发性、能随水 蒸汽蒸馏而不被破坏，难溶 或不溶于水的成分的提取。
酸（或氨、吡啶、二乙胺），防止拖尾。 吸附剂用量: 30～60倍，有时100～200倍
1
TLC
5～ 10
5．聚酰胺吸附色谱法：
（1）原理：氢键吸附。
分子中的酰胺羰基与化合物的酚羟基 酰胺键上的游离胺基与羰基形成氢键缔合 吸附强弱取决于各种化合物与之形成氢键缔合的 能力。
聚酰胺吸附层析原理
3. 纸色谱（PC）：
原理：分配原理
支持剂：纤维素 固定相：水
流动相：水饱和的有机溶剂
K = 1/r(Rf/1-Rf)（ r为纸层色谱定数） 若A、B两种物质的Rf值分别为Rfa，Rfb，则 β ＝Rfa（1－Rfb）/ Rfb（1－Rfa） (Rfa> Rfb)
故纸色谱可为液-液萃取分离提供指导。
提取分离课件
提取方法新技术
• 超临界流体萃取技术 • 超声提取技术 • 微波萃取技术 • 酶法 • 半仿生提取法 • 破碎提取法
提取分离
超临界流体萃取技术
• 临界温度(Tc)：气体高于该温度时，任何压 缩不能使其变为液体，
• 临界压力（Pc）：在临界温度下，气体能 被液化的最低压力
• 超临界状态：温度及压力均处于临界点以 上的液体所处的状态
提取分离
4、溶剂分类与选择
• 溶剂提取法的关键，是选择适当的溶剂。 • 注意以下三点：
①溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解 度小；
②溶剂不能与中药的成分起化学变化； ③溶剂要经济、易得、使用安全方便
提取分离
分类
• 常用溶剂分为水、有机溶剂两大类。 水是；相对极性较弱的有机溶剂也根据极 性不同分为亲水性有机溶剂和亲脂性有机 溶剂两类。
提取分离
• 应用： 常以水或者乙醇为溶剂，适宜于挥发性
成分、热不稳定性成分、含淀粉、糖类或 树胶多的成分的提取。
• 缺点是：时间长、溶剂用量大、
提取分离
3）煎煮法
• 煎煮法是我国最早使用的传统的浸出方法。 在砂锅（陶瓷锅、搪瓷锅、玻璃锅、铝锅、 铜锅、不锈钢锅均可）加入水没过药材粗 粉，加热至沸30－60分钟，趁热过滤；滤 渣进行二次煎煮，方法同前。合并再次煎 煮液，提取液可直接服用或再做处理。
提取分离
• 注意：所用容器不宜用铁锅，因为铁比较 活泼，能与许多物质（尤其是酸性基团物 质）发生化学反应，导致成分结构破坏、 失效，以免药液变色。直火加热时最好时 常搅拌，以免局部药材受热太高，容易焦 糊。有蒸汽加热设备的药厂，多采用大反 应锅、大铜锅、大木桶，或水泥砌的池子 中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过 管道互相连接，进行连续煎浸。
氯仿甲醇法提取
氯仿/甲醇法提取
称取干燥、粉碎的南极磷虾置于匀浆机，按1:6(m/V)料液比分别加入氯仿/甲醇（2:1，V/V）、无水乙醇和正己烷于室温（25 ℃）搅拌浸提。
过滤后用少量提取溶剂冲洗滤渣，合并滤液。
采用无水乙醇和正己烷提取的滤液真空旋转蒸发，温度为40 ℃。
采用氯仿/甲醇法提取的滤液中要加入10%氯化钠溶液，振荡摇匀后静置过夜，溶液分层明显，收集下层氯仿层，通过无水硫酸钠脱水后移至旋蒸瓶，于40 ℃下真空旋转蒸发。
每100克新鲜或冷冻样品将组织在Waring Blendor中用混合物均化2分钟，100毫升氯仿和200毫升甲醇。
然后向混合物中加入100毫升氯仿和混合30秒后，加入100ml蒸馏水并继续混合30秒。
过滤匀浆。
通过在Coors No. 3布氏漏斗上的Whatman No.1滤纸轻微吸力。
过滤通常很快，当残留物变成时干燥，在烧杯底部施加压力，以确保最大限度地重新加入溶剂的混合物。
将滤液转移至500毫升量筒中，并且，在允许几分钟完全分离和澄清后，记录氯仿层的体积（至少150ml）和酒精通过抽吸去除图层。
少量氯仿层也是移除以确保完全移除顶层。
氯仿层含有纯化的脂质。
对于定量脂质提取，保留在组织残留物中的脂质是通过将残余物和滤纸与100ml氯仿混合来回收。
将混合物通过原始布氏漏斗和混合器过滤。
将罐和残余物用总共50ml氯仿冲洗。
这种滤液是在除去醇层之前与原始滤液混合。
中药化学第八章三帖类化合物详解演示文稿
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第四节 三萜类化合物的提取与分离 一、三萜类化合物的提取 1．醇类溶剂提பைடு நூலகம்法
为提取皂苷首选方法
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glc
6-1
O glc2-1 glc
H OH
HO HH
结构特点
基本碳架与羊毛脂烷型不同的是 9位连有β-CH3，C5、C8、均连 β-H， C10连α-H。
雪胆甲素 R=Ac
glc1-6 glc O
罗汉果甜素Ⅴ
雪胆乙素 A=H
（比蔗糖甜约256倍）
（急性痢疾、肺结核、慢性气管炎）
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产生沉淀。 C. 三萜皂苷与胆甾醇产生沉淀没有甾体皂苷稳定。
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3.水解反应 (1)酸水解 三萜皂苷所连多是α-OH糖，因此要进行剧烈水解：
由于条件剧烈，因此常使苷元产生脱水，双键移位，构 型
异构酸，水环解合虽的然反易应引。起苷元结构的改变，但可使皂苷中的全部 单糖被水解，有助于了解成苷的单糖种类。
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先提总皂苷，再水解苷键，继用石油醚、苯、溶剂汽油、 CHCl3等弱极性有机溶剂提取苷元
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3．碱水提取法 提取含羧基皂苷
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二、三萜类化合物的分离 1．分段沉淀法
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2．胆甾醇沉淀法 利用三萜皂苷能与胆甾醇生成不溶性分子复合物进行分离。
三、双环三萜
OR4
28 29
27
结构特点是基本碳架 OH O O
提取分离和鉴定的方法2PPT课件
（3）沉淀法：酸性或碱性化合物还可 通过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶 性的盐类沉淀等析出。 如加入铅盐、雷氏铵盐等。
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第二章 提取分离和鉴定方法
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2.2 物质在两相溶剂中的分配比不同
1．两相溶剂萃取法 2．液—液分配柱色谱 3．加压相色谱法
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2.2 物质在两相溶剂中的分配比不同
1．两相溶剂萃取法
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2.1 物质溶解度差别
1、结晶及重结晶法
2、溶剂分离法
（2）结晶操作：
结晶操作实际是进一步分离纯化过程，
一般是应用适量的溶剂在加热至沸点的情况下 将化合物溶解，制成过饱和溶液，趁热过滤去 除不溶性杂质，放置冷处，以析晶。
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2.1 物质溶解度差别
1、结晶及重结晶法
2、溶剂分离法
（3）结晶纯度的判定：
结晶形态和色泽：单一化合物的结晶具有结晶形状 均一和均匀的色泽。
熔点和熔距：单一化合物具有一定的熔点和较小的 熔距，结晶前后的熔点应一致，熔距很窄，在 1℃2℃的范围内。但要注意双熔点，如汉防己乙 素、芫花素及一些与糖结合的苷类化合物。
色谱法：单一化合物在薄层色谱或纸色谱层析中经 三种不同的溶剂系统展开，均为一个斑点者。
分 脂溶性成分
水溶性成分
脂溶性成分
出膏率低，易 发霉，需加防
腐剂
消耗溶剂量大， 费时长
易挥发、热不 稳定不宜用
热不稳定不宜 用，溶剂量大
亲脂性较强成 用索氏提取器，
分
时间长
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第一节 天然药物有效成分的提取 （常见的提取方法）
2、水蒸气蒸馏法
适用于具有挥发性、能随水蒸汽蒸馏而不被破坏、 难溶或不溶于水的成分的提取，如挥发油、小分子的 香豆素类、小分子的醌类成分。
溶剂提取法PPT课件
• 此法操作简单，提取效率高于冷浸法，但煎煮 液黏稠，滤过困难，且杂质较多，易发生霉变。
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回流提取法
• 回流提取法是为保 持溶剂与原料持续 的接触，通过加热 提取液，使溶剂受 热蒸发，经冷凝后 变为液体流回提取 器，如此反复至提 取比较完全的一种 热提取方法。
入新溶剂，可以连续收集
浸提液。
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特点及使用范围：
• 由于原料不断与新溶剂或含有低浓度提取物的 溶剂接触，始终保持一定的浓度差，属于动态 浸出，因此浸提效果要比浸渍法高。
• 不经过滤处理可直接收集渗漉液，可省去过滤 操作。
• 不足之处为溶剂消耗多，提取时间长。
• 当渗漉液颜色极浅或渗漉液的体积相当于原料 重的10倍时，便可认为基本上已提取完全。在 大 量 生 产 中 常 将 收 第集21的页/共稀39页渗 漉 液 作 为 另 一 批 新
影响提取效果的因素
• 粉碎度 由于提取过程包括渗透、溶解、扩散等过程，因此 样品粉碎得越细，表面积就越大，浸出过程就越快， 但粉碎度过高，样品颗粒表面积过大，吸附作用增 强，反而影响过滤速度。故粉碎的粒度需适中，一
般 而言，视原料质地粉碎粒度以20～60目为宜。 • 提取温度 冷提杂质少，效率低，热提杂质多，效率高。因温
• 实验室常用提取器是 索氏提取器。
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该提取器有上、中、下三部分组成， 上部是冷凝器；中部是带有虹吸管 的提取器；下部是烧瓶。将盛原料 粉的滤纸装置中部，内装物高度不 得超过虹吸管，溶剂由上部加入烧 瓶中，烧瓶置水浴上加热，溶剂受 热气化，通过中部提取器旁的通气 侧管到达上部冷凝器，遇冷变为液 体滴入提取器中，当滴入的溶剂达 一定高度时，因虹吸作用，使提取 成分后的提取液又流入烧瓶中，其 中溶剂可因再受热而气化，提出的 成分留在烧瓶中，如此连续操作， 即可提尽有效成分。
天然药物提取方法(ppt)
（二）其他方法
根据化合物的特殊性质选择特殊的提取方 法。
1. 水蒸气蒸馏法
2. 升华法
溶剂提取法
1. 浸渍法 2. 渗漉法 3. 煎煮法 4. 回流法 5. 连续回流法 6. 超声提取法 7. 超临界流体萃取法
浸渍法
▪ 分为冷浸法（室温）和温浸法（40~60℃）。 ▪ 常用溶剂：水、酸水、碱水、稀醇等。 ▪ 适用于遇热易被破坏的成分或含大量淀粉、
结晶溶剂的选择 二
▪ 常用溶剂：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙 酸乙酯等。
▪ 其他不常用溶剂： 二甲基亚砜、乙腈、甲酰胺、二甲基甲酰
胺、冰醋酸等。
▪ 混合溶剂 ？如何选择与使用
水--乙醇；乙醇—乙醚；石油醚—苯；水— 丙酮；乙醚—乙酸乙酯—乙醇等。
ห้องสมุดไป่ตู้
结晶纯度的判断
1. 一定的晶形、均匀的色泽； 2. 有固定的熔点，熔距较小； 3. TLC ：经过三种以上展开剂展开得均
结晶的条件
▪ 被分离化合物纯度高； ▪ 呈过饱和状态； ▪ 最适结晶温度：5~10℃； ▪ 充分放置。
结晶溶剂的选择（理想溶剂）一
1. 不与结晶物质起化学反应； 2. 杂质与结晶物质在溶剂中的溶解度相差大； 3. 目的物在溶剂中的溶解度随温度不同有显
著差别； 4. 溶剂沸点不宜太高或太低（可在60 ℃ ）； 5. 溶剂沸点低于化合物的熔点； 6. 溶剂沸点低于结晶温度； 7. 能给出较好的晶形，无剧毒。
升华法
▪ 适用于有升华性，升华 温度适当，遇热较稳定 的化合物的提取。
▪ 可分为常压升华和减压 升华两种。
关于提取问题小结
▪ 极性（溶剂的极性、化合物的极性） ▪ 提取溶剂的分类与特点 ▪ 提取的原理 ▪ 提取的方法与适用范围
氯仿-甲醇提微生物油脂
4. 测定方法: (1)提取:准确称取样品5克,放入200毫升具塞三角瓶中(高水分食品可加适量硅藻土使其分散)加入60毫升氯仿-甲醇混合液(对干燥食品可加入2~3毫升水).连接布氏漏斗,于60度水浴中,从微沸开始计时提取1小时.
氯仿-甲醇提取法
索氏抽提法只能提取游离态的脂肪,而对脂蛋白、磷脂等结合态的脂类则不能被完全提取出来,酸水解法又会使磷脂水解而损失.而在一定水分存在下,极性的甲醇与非极性的氯仿混合液(简称CM混合液)却能有效地提取结合态脂类.本法适合于含结合态脂类比较高,特别是磷脂含量高的样品,如鲜鱼\贝类\肉\禽\蛋等,对于含水量高的试样更为有效.
(2 )溶剂回收至残留物尚具有一定的流动性，不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，从而使测定结果偏低。所以，最好在残留有适量水分时停止蒸发。
（3）在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入以免影响石油醚对脂类的溶解，其加入量可根据残留物中的水分含量来确定，一般为5~15g.
5． 结果计算 w=(m2-m1)*2.5/m*100% 式中：w----脂类质量分数，%； m----试样质量,g m2----称量瓶与脂类质量，g m1----称量瓶质量，g 2.5---- 从25ml乙醇中取10ml进行干燥，故乘以系数2.5。
6． 说明
（1）提取结束后，用玻璃过滤器过滤再用溶剂一边搅拌试样残渣，一边用溶剂洗涤。
1. 测定原理 将试样分散于氯仿-甲醇混合液中,在水浴中轻微沸腾,氯仿-甲醇及样品中一定的水分形成提取脂类的溶剂,在使样品中组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类的亲和性增大,从而有效地提取出全部脂类,经过滤除出非脂成分,回收溶剂,对残留脂类用石油醚提取,蒸去石油醚后定量.
氯仿-甲醇提取法
（7）注意：
①样品必须干燥，样品中含水分会影响溶剂提取 效果，造成非脂成分的溶出。 ②滤纸筒的高度不要超过回流弯管，否则超过弯 管中的样品的脂肪不能提尽，带来测定误差。 ③乙醚回收后，剩下的乙醚必须在水浴上彻底挥 净，否则放入烘箱中有爆炸的危险。乙醚在使 用过程中，室内应保持良好的通风状态，仪器 周围不能有明火，以防空气中有乙醚蒸气而引 起着火或爆炸。 ④抽提是否完全，可凭经验，也可用滤纸或毛玻 璃检查，由提脂管下口滴下的乙醚（或石油醚） 滴在滤纸或毛玻璃上，挥发后不留下痕迹即表 明已抽提完全。
(2) 原 理 ： 罗 紫 • 哥 特 里 法 的 原 理 是 利 用
氨-乙醇溶液破坏乳的胶体性状及脂肪球膜，使非脂成 分溶解于氨 - 乙醇溶液中而脂肪游离出来，再用乙醚 石油醚提取出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳 脂肪。
(3) 仪器
(4) 操作步骤 氨-乙醇处理→ 乙醚-石油醚提取 → 回收溶剂 → 干燥→ 称重 （5） 注意： ① 氨水：使酪蛋白钙盐变成可溶解的盐。 ②乙醇：使溶解于氨水的蛋白质沉淀析出。 ③乙醚：提取脂肪。 ④石油醚：降低乙醚的极性，使乙醚与水不 混溶，只抽出脂肪，并使分层清晰。
(6) 结果计算
m2 m1 100 % m
式中 ——脂类质量分数，%； m------式样质量，g; m1------空锥形瓶质量，g; m2-------锥形瓶与样品脂类质量，g;
(7) 注意
①固体样品必须充分磨细，液体样品必须充分混匀， 以便充分水解。 ② 开始加入 8mL 水是为防止后面加盐酸时干试样固 化，水解后加入乙醇可使蛋白质沉淀，降低表面 张力，促进脂肪球聚合，同时溶解一些碳水化合 物如糖，有机酸等。后面用乙醚提取脂肪时因乙 醇可溶于乙醚故需加入石油醚降低乙醇在醚中的 溶解度，使乙醇溶解物残留在水层，使分层清晰。
脂肪的测定
二、酸水解法
(一）原理
将试祥与盐酸溶液一同加热进行水解，使结合或包 藏在组织里的脂肪游离出来，再用乙醚和石油醚提 取脂肪，回收溶剂，干燥后称量，提取物的重量即 为脂肪含量。
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（二） 适用范围与特点
此法适用于各类、各种状态的食品中脂肪测定。 特别是加工后的混合食品，易吸湿，不好烘干的， 用索氏提取法不行的样品，效果更好。
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3. 抽提
将滤纸筒或滤纸包放入索氏抽提器内，连接已干燥 至恒重的脂肪接受瓶，由冷凝管上端加入无水乙醚或石
油醚（30—60℃沸程） ，加量为接受瓶的2／3体积， 于水浴上(夏天65℃，冬天80℃左右)加热使乙醚或石油醚 不断的回流提取，一般视含油量高低提取6—12小时，至 抽提完全为止（用滤纸试）。
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4. 称重
取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶 内乙醚剩 1 ～2 ml 时，在水浴上蒸于，再于100～ 105℃干燥 2小时，取出放干燥器内冷却30分钟，称重，
并重复操作至恒重。
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(四) 结果计算
脂肪(％)＝(m2-m1) / m×100
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植物性或动物性油脂中脂肪含量最高，
而水果蔬菜棚S肪含量很低。几种食物100 g中脂肪含量(g) 如下：
猪肉(肥) 90.3
核桃 66.6
花生仁 39.2
青菜 0.2
0.9
苹果 0.2
柠檬
牛乳
3 以上
香蕉 0.8
全脂炼乳 8 以上
全脂乳粉 25～30
这些含量是指用乙醚提取的脂类总量。
化妆品中甲醇及氯仿鉴别及含量测定方法优秀doc资料
化妆品中甲醇及氯仿鉴别及含量测定方法优秀doc资料化粧品中甲醇及氯仿鑑別及含量測定方法Identification and Assay for Methanol and Chloroform in Cosmetics1. 適用範圍：本檢驗方法適用於化粧品中甲醇及氯仿之鑑別及含量測定。
2. 檢驗方法：氣相層析質譜法(gas chromatography/mass spectrometry,GC/MS)配合頂隙進樣器(headspace sampler)2.1. 裝置：. 氣相層析質譜儀：.1. 游離源：電子游離法(electrospray ionization)。
2.1.1.2. 層析管：DB-5 m s，μm，內徑2.5 mm × 30 m，或同級品。
2.1.2. 頂隙進樣器(headspace sampler)：可振搖加熱器，溫度可達90℃以上。
2.2. 試藥：甲醇、氯仿、甲苯-D8及丙酮均採試藥特級。
2.3. 器具及材料：. 頂隙進樣分析瓶：容量為20 mL。
. 頂隙進樣分析瓶蓋：鋁製瓶蓋，直徑2 cm。
. 頂隙進樣分析瓶墊片：材質為polytetrafluoroethylene (PTFE)。
. 容量瓶：100 mL。
. 試管：50 mL。
2.4. 標準溶液之配製：取甲醇及氯仿各約20 mg，精確稱定，共置於100 mL 容量瓶中，以丙酮定容，混合均勻，使成濃度皆為200 μg/m L，供作混合標準原液。
使用時以丙酮稀釋至10.0 μg/m L，供作混合標準溶液。
2.5. 內部標準溶液之配製：取甲苯-D8約20 mg，精確稱定，以丙酮定容至100 mL，混合均勻，使成濃度為200 μg/mL，供作內部標準溶液。
2.6.標準曲線之製作：取混合標準溶液 1 mL，置於頂隙進樣分析瓶中，添加內部標準溶液25 μL，加上墊片及瓶蓋鎖緊，混合均勻。
以配置頂隙進樣器之氣相層析質譜儀分析，就甲醇或氯仿標準溶液與內部標準溶液波峰之定量離子強度比對應甲醇或氯仿含量(μg)，製作標準曲線。