出口肉及肉制品中氯霉素残量检验方法不确定度评估

化（ 精密度） ，表 1 测试不同鸡肉中有代表性的氯 霉素的残留量测定结果。
表1 样品 1 2 3 4 5 6 D1 / 1. 898 5. 630 11. 04 14. 01 14. 03 18. 78 氯霉素残留量分析测试结果 D2 / 1. 525 5. 020 12. 18 13. 96 13. 92 18. 34 平均值 / D1与 D2差值 / （ μg / kg） 0. 3730 0. 6100 － 1. 140 0. 05000 0. 1100 0. 4400 1. 712 5. 325 11. 61 13. 99 13. 98 18. 56 差值 / 平均值 0. 2179 0. 1146 － 0. 09819 0. 003575 0. 007871 0. 02371
* 作者简介： 孙久龙 （ 1984 － ） ，男，学士； Email： twllsun@ 163. com
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第 28 卷增刊 2009 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
Vol. 28. Suppl. 2009 － 12
i =1
有显著性差异。检测统计数据 t 用下式来计算： | 1 － R ec | | 1 － 0. 904 | t= = （ 6） = 7. 21 u（ R ec ） 0. 013 这个数据与 95% 置信度，n － 1 自由度的双边 临界值 t crit 比较： t = 7. 21 > t crit = 2. 06 ，则 R ec 具有 显著性差异。因此，校正因子 （ 1 / （ R ec ） ） 应包括在 结果的公式计算中，式（ 1 ） 中明确的加入校正因子 1 / （ R ec ） 式合理的。 u rel （ R ec ） = （ R ec ） = 0. 013 /0. 904 = 0. 015 （ R ec ） （ 7）
1* 孙久龙 ，张 1 悦 ，牛 2 燕 ，沙
勐
3
（ 1. 大连依利特分析仪器有限公司，大连 116000 ； 2. 厦门市产品质量检验所，厦门 361000 ； 3. 云南大学化学科学与工程学院，昆明 650091 ） 1999《测量不确定度评定与表示 》 1995 摘 要： 根据 JJFl059建立了对 SN0341《出口肉及肉制品中氯霉素残量检验方法 》 的不确定度评定方法，只要测量过程 本身及所使用的设备不发生变化 ，不确定度估计值能适用于以后该实验室使用 该方法所得的结果中。评定过程包括建立测量程序、分析不确定度来源、量化 不确定度分量。由此计算得到相对合成标准不确定度为 0. 071 ，相对扩展不确 定度为 0. 14 ，有效自由度为 65 ，比较得到测量重复性 （ 精密度研究 ） 在相对标 准不确定度中占重要比重。 关键词： 不确定度； 氯霉素； 气相色谱； 电子俘获检测器 不确定度的评定是测量结果的重要部分，反 映了测量结果的可靠性以及检测过程中各项不确 定度来源对测量结果的影响程度 。根据 JJFlO591999《测量不确定度评定与表示 》 和实验室内部确 定的数据，采用中庸偏保守的原则对本实验室采 1995《出口肉及肉制品中氯霉素残量检 用 SN0341验方法》 中气相色谱法测定氯霉素残留量的不确 定度进行评定。经过质量控制数据验证后，只要 测量过程本身或所使用的设备不发生变化，这一 不确定度估计值能适用于以后该实验室使用该方 法所得的结果中。 1 1. 1 实验部分 仪 器 BFT ｛ 99% N， O双 （ 三 甲 基 硅 烷） 三 氟 乙 酰 胺 （ BSTFA） + 1% 三 甲 基 氯 硅 烷 （ TMCS ） ｛ 美 国 Supelco 产品，货号 33154u， 0. 1 mL / ampul｝ 。 1. 3 标准物质 氯霉素 （ chloramphenicol ） ： 纯 度 ≥ 99% ，Dr. Ehrenstorfer 公司。 气相色谱条件 5； 色谱柱： 30 m × 0. 25 mm × 0. 25 μm，HP20 ℃ 260 ℃
过因果图，被测量计算公式中的参数在图中作为 主要分支。 考虑到测量程序图 1 的每一步， 将影响 因素添加到该图上，直到所有重要因素均予充分 考虑。相关不确定度来源见图 2 的因果图。 2. 3 不确定度分量的量化 不同的不确定度分量的量化可利用实验室内 部确认研究中的数据。 2. 3. 1 测量重复性 （ 精密度研究 ） 引入的相对标 准不确定度 对六个不同鸡肉样品中氯霉素进行 一系列平行测试，以获得分析程序的总的随机变
气相色谱仪： Agilent6890 ECD 检测器。离心 5 型，上海安亭仪器公司。均质器： T25 机： TDL18G，IKA 公司。 旋转蒸发器： 德国海道夫公 型， 1000μL。具塞离心管： 50 mL。 司。移液枪： 200μL、 MS3 。 涡流混匀器： IKA1. 2 试剂 乙酸乙酯： 色谱纯，德国 MERCK。甲醇： 色谱 纯，德国 MERCK。正己烷。分析纯，上海国药。氯 化钠。分析纯 上海国药。无水硫酸钠： 经 650 ℃ 灼烧 4 h，置于干燥器内备用。硅烷化试剂： Sylon
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所有的天平和 重要的体积测量装置处于常规的控制下。精密度
序的回收率在实验室确认使用标准加入法分析 。 表 2 收集了实验室对各种鸡肉样品中添加氯霉素 标准回收率进行 26 次分析的结果。
表2 样品 鸡肉 测量 组分 氯霉素 氯霉素标准回收率分析结果 加入标准 测量 Rec 平均 S 标准
和回收率研究已经考虑了体积测量装置校准的影 响，因为在研究中使用不同的容量瓶和移液管 。 持续超过了半年时间的大量的随机变化研究，也 包括了环境温度对结果的影响。因此只剩下参考 物质的纯度些不确定度分量需要研究 。 Dr. Ehrenstorfer 公 司 提 供 的 标 准 物 质 的 纯 度 为 99. 0% ± 0. 5% ，纯度是潜在的不确定度来源， 其标准不确定度按矩形分布，属 B 类。 0. 005 u ref = = 0. 0029 （ 9） 3 槡 自由度： 1 1 V= = = 1. 5≈1 （ 10） u（ uref ） 2 0. 0029 2 2 ［ ］ 2 ［ ］ uref 3 × 0. 0029 槡 — 333 —
图1 氯霉素残留分析
10 － 3 μg / mL 到 mg / kg 的转换因子 10 － 3
2. 1. 3 2. 2
检测限 此分析方法适用于氯霉素含量介 于 0. 3 ～ 50 μg / kg。 确定不确定度来源 对于分析程序，识别所有的不确定度来源通
（ 3 ） 净化 加入 1 mL 甲醇溶解残渣，再加入 15 mL 4% 氯化钠溶液超声波清洗 1 min，并转移 到 50 mL 离心管中，再取 5 mL 4% 氯化钠溶液清 洗鸡心瓶，并合并清洗液。加 15 mL 正己烷于离 心管中，用涡流混匀器混合 1 min，4000 r / min 离 心 3 min。弃去正己烷层，水层加 15 mL 正己烷， 同上操作，弃去正己烷层。水层中加入 15 mL 乙 酸乙酯，用涡流混匀器混合 2 min，4000 r / min 离 心 3 min。吸取乙酸乙酯层，通过无水硫酸钠 柱 （ 5 g） 脱水于另一个鸡心瓶中，用少量乙酸乙酯淋 洗无水硫酸钠柱。 （ 4） 浓缩 鸡心瓶于 40 ℃ 旋转蒸发至约 1 mL。 （ 5 ） 衍生化 将浓缩液移入 5 mL 离心管中， 用 1 mL 乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙酯。于 60 ℃ 吹 氮 气 蒸 发 至 干。加 入 100 μL 正 己 烷 和 100 μL硅烷 化 试 剂，加 塞。于 60 ℃ 微 量 中 加 热 60 min。吹氮气蒸发至干。 （ 6 ） 定容 色谱测定。 加入 1. 0 mL 正己烷溶解，供气相
序号 （ μg / kg） （ μg / kg） （ μg / kg）
注射 1 μL 样品萃 取液至气相色谱仪中得到峰响应值 I op 。 （ 8 ） 标准溶液的衍生化 取浓度为 1 μg / mL 标准溶液 5 μL，用氮气吹干，加入 100 μL 正己烷 — 332 —
（ 7 ） 气相色谱 （ GC ） 测定
再加入 15 mL 乙酸乙酯，涡流混匀器混匀 1 min， 离心 3 min， 合并乙酸乙酯提取液， 于 40 ℃ 旋转蒸 发至近干。 和 100 μL 硅烷化试剂，于 60 ℃ 微量处理仪中加 热 60 min。 吹氮气蒸发至干， 加入 1. 00 mL 正己烷 用衍生化后的标准 溶液作气相色谱仪校准。注射 1 μL（ V ref ） 标准溶液 至气相色谱仪中得到标准峰响应值 I ref 。 2. 1. 2 被测量 C op = I op ·C ref ·V op 10 － 3 × F hom ·rep × － 3 （ 1 ） I ref ·R ec ·m sample 10 溶解，供气相色谱测定。 （ 9 ） 气相色谱（ GC ） 校准
（ 1 ） 混合均匀 从所取原始样品中取出部分 有代表性样品，经捣碎均匀，充分混匀。用四分法 缩分出不少于 500 g 试样，混匀，均分成两份。装 入清洁容器内，加封后，表明标记。称取 5. 0 g（ 精 确至 0. 1 g） 试样于 50 mL 离心管中。 （ 2 ） 提取 加 25 mL 乙酸乙酯于 50 mL 离心 管中，用均质器均质提取 2 min，4000 r / min 离心 3 min。将乙酸乙酯层移入 50 mL 鸡心瓶中，试样
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图2
不确定度来源分析因果图
以上数据（ 差值除以平均值 ） 提供了总的随机 变化的量度。为了得到单次测量的相对标准不确 定度的估计值，求出该标准化差值的标准偏差并 除以，就可以把以上表中成对差值的标准偏差校 正为单次测定值的标准不确定度。此标准不确定 度为： S=