基因工程
什么是基因工程
什么是基因工程
一、什么是基因工程
基因工程（Gene Engineering）是一种技术，它可以改变物质基础的构造，使其形成新的基因组合，从而获得有意义的生物。
基因工程可以
让完全不同的物种合成出新物种，或者将不同物种的基因强行混合，
成功地让一些被认为在自然过程中不可能出现的新物种出现。
二、基因工程的基本原理
基因工程的基本原理是人工合成、改造、替换或者删除染色体的基因，在生物体的内部，精心操控它们来改变特质。
比如，可以用基因工程
在生物体内引入新基因，从而改变它们的某些性状，从而形成新物种、新性状或新能力。
同样，也能改变基因中某种成分，形成新物种。
三、基因工程在实践中的应用
（1）改性个体：基因工程可以调整体内基因水平，以便让体内特定的
特质性状得到发挥。
（2）编辑特质：基因工程可以根据所需改变，精确定位到特定的基因
的特定位点，再改变基因位置，最终让细胞发生变化。
（3）基因治疗：基因治疗是改变患有基因性疾病的患者的基因的技术，以改善疾病情况。
（4）转基因：转基因技术指的是将一种物种中的基因流入到另一种物
种中，从而改变或添加某种性质，如抗病性等。
四、基因工程的好处与弊端
（1）好处：基因工程可以帮助改变鉴定动物和植物的性能，用来生产
食物、药物、精馏植物等产品，帮助解决营养、病症，使物种在极端
环境发展。
（2）弊端：大量的基因重组可能引发不可预料的问题，产生致命的疾病，甚至影响人类基因。
有时，新基因对导入到一个物种中的其他生
命细胞产生负面影响。
什么是基因工程
什么是基因工程基因工程：改变生命的未来引言：人类一直在不断探索、改造和利用自然的力量，以满足我们的需求和向前迈进。
基因工程作为生物技术的一个重要分支，具有巨大的潜力，可以为人类带来许多福祉和进步。
本文将深入探讨什么是基因工程，它的原理和应用，以及相关的伦理和道德问题。
一、基因工程的定义和原理：基因工程，又称遗传工程，是一种利用重组DNA技术改变生物基因组的过程。
它主要包括三个步骤：选取目标基因、将目标基因导入目标生物体的基因组中、使导入基因能够在生物体中正常表达。
基因工程的原理主要包括DNA分子的切割、连接和重组。
科学家通过具有特定功能的限制酶将DNA切割成片段，然后将这些片段重新组合，以获得具有所需特性的DNA序列。
最后，将重组的DNA导入目标生物体中，通过细胞的自然复制过程使其在细胞和整个生物体中被表达。
二、基因工程的应用：1. 农业领域：基因工程在农业领域的应用非常广泛。
通过转基因技术，科学家们可以改良农作物，使其具有抗虫、抗病、耐旱等特性，提高产量和抗逆性，有力地支持全球粮食安全。
例如，转基因玉米可以抵抗玉米螟的侵袭，转基因水稻可以抗盐碱、耐旱。
2. 医学领域：基因工程在医学领域的应用正逐渐发展。
通过基因工程技术，科学家可以将外源基因导入体内，用于治疗一些遗传病、免疫系统疾病和癌症等疾病。
例如，基因工程药物可以治疗某些带有缺陷基因的遗传性疾病，如血友病和囊性纤维化等。
3. 环境保护：基因工程还可以用于环境保护。
通过改良某些细菌或植物的基因，可以使其具有降解有害化学物质的能力，从而清理油污和其他污染物。
基因工程在生物修复、环境治理中的潜力巨大，为解决环境问题提供了新的思路和方法。
三、伦理道德问题：虽然基因工程有着广阔的应用前景，但也涉及一些伦理和道德问题需要慎重考虑。
1. 遗传多样性：转基因作物的广泛种植可能导致农作物遗传多样性的丧失，降低农作物的抵抗能力。
我们应该保留自然界的遗传资源，同时加强监管和管理，确保基因工程的可持续发展。
第一章 基因工程概述
或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。
因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基
本元件。
基因工程的基本概念
B 基因工程的基本定义
基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，
包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的
是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技
术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模
酶工程
基因工程的基本概念
D 基因工程的基本形式
第一代基因工程 蛋白多肽基因的高效表达 经典基因工程 第二代基因工程 蛋白编码基因的定向诱变 蛋白质工程
第三代基因工程 代谢信息途径的修饰重构 途径工程
第四代基因工程 基因组或染色体的转移
基因组工程
第二节 基因工程的诞生和发展
一、基因
泛基因阶段
孟德尔遗传因子阶段
（如胰岛素）、干扰素、乙肝疫苗等 研制新型疫苗（HIV、霍乱、单纯疱疹病毒等）
生产具有药用价值的生物制剂，如水蛭素等
3. 基因诊断
– 遗传性疾病的分子诊断
– 癌症的分子诊断 – DNA指纹
4. 基因治疗
是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异 常引起的疾病，以达到治疗目的。
3．断裂基因
1个基因被间隔区分成不连续的若干区段，这种编码序列不连续的间断基因被称为 断裂基因。
4．假基因
不能合成出功能蛋白质的失活基因 。
5．重叠基因
不同基因的核苷酸序列有时是可以共用的 即重叠的。
现代对基因的定义是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列， 是遗传物质的最小功能单位。
二、 基因工程的诞生
顺反子阶段
1957 年，本泽尔（Seymour Benzer）以T4噬菌 体为材料，在DNA分子水平上研究基因内部的精细结 构，提出了顺反子（cistron）概念。 顺反子是1个遗传功能单位，1个顺反子决定 1条多肽链。
什么是基因工程
什么是基因工程
基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质（DNA）来实现对其性状的改变的技术和方法。
这包括插入、删除或修改基因，以产生具有特定性状或功能的生物体。
基因工程可以应用于微生物、植物、动物和人类等各个领域。
主要的基因工程技术和方法包括：
1. 基因克隆：将感兴趣的基因从一个生物体中复制并插入到另一个生物体中。
这包括DNA的复制、切割和连接等操作，常用于制造重组蛋白、疫苗等。
2. 重组DNA技术：制造重组DNA，即将来自不同来源的DNA 片段组合在一起。
这包括PCR（聚合酶链式反应）、限制酶切割、DNA 连接酶等技术。
3. 基因编辑：利用特定的酶（如CRISPR-Cas9系统）精确地修改生物体的基因。
这使得科学家能够精准地添加、删除或替换基因序列，以改变目标生物体的性状。
4. 转基因：将外源基因导入到一个生物体中，使其表达这个基因。
转基因技术在植物、动物等领域广泛应用，以改善农作物产量、提高抗病性、研究基础科学等。
5. 合成生物学：利用化学合成的方法设计和构建新的生物体，以实现特定的功能。
这包括人工合成基因、合成生物通路等。
应用基因工程的领域包括医学、农业、环境保护、工业等，其应用范围涉及疾病治疗、农作物改良、生物能源生产等方面。
然而，基因工程也引发了一些伦理、安全和法规方面的讨论和关注。
基因工程
作用： 将外源基因送入受体细胞。 利用载体在受体细胞内，对外源基因 进行大量复制。
条件： 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基 因等。 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。
质
DNA诊断
DNA点杂交 寡聚核苷酸探针杂交分析法
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
(single strand conformation polymorphism, SSCP) 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性 (restriction fragment length polymorphism, RLFP) 分析
2.基因诊断
基因诊断：采用分子生物学的技术方法来分 析受检者的某一特定基因的结构(DNA水平) 或功能(RNA水平)是否异常，以此来对相应 的疾病进行诊断。是病因的诊断。
基因诊断的原理
DNA诊断----检测相关基因的结构及其 表达功能是否正常。 RNA诊断----对表达产物mRNA的质 和量进行分析。
基因工程为人类开辟新的食物来源。 1）鸡蛋白基因在大肠杆菌和酵母菌中表达获得 成功。这表明，未来能用发酵罐培养的大肠杆菌 或酵母菌来生产人类所需要的卵清蛋白。 2）用基因工程的方法从微生物中获得人们所需 要的糖类、脂肪和维生素等产品。
（三）基因工程与环境保护
基因工程在环保方面有什么应用？
1）用于环境监测。 2）用于被污染环境的净化。
基因治疗就是把基因直接导入人体或先导入人的 细胞然后再输入人体，让这种基因达到治疗目的。 首先是治疗基因的选择。
基因工程
二 DNA或RNA浓度、纯度和相对分子质量的测定
常用的方法有紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳法。
（一）紫外分光光度计法测定DNA、RNA的浓度和纯度
分子量在1-200kb之间 。
生命科学学院
一、 质粒载体
同一质粒尽管分子量相同，不同的构型电泳迁移率不同：
超螺旋DNA最快、线形DNA次之、开环DNA最慢。
OC
SC
Lห้องสมุดไป่ตู้
生命科学学院
一、质粒载体
质粒的不相容性(incompatibility,又称质粒的不亲和性)
两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性。
生命科学学院
四、人工染色体及其应用
(一)酵母人工染色体
酵母人工染色体(yeast artificial chromosome，YAC)是一类酵母穿梭 载体。
YAC具有自主复制序列、克隆位点 以及可在细菌和酵母菌中选择的标记 基因。可以接受350-400kb的外源DNA 片段。
生命科学学院
一、质粒表达载体
二、Klenow片段 （一）基本性质 大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理，获得N 端三分之二的大肽段，即Klenow片段。
Klenow片段仍拥有5`→3`的DNA聚合酶活性和3`→5` 的核酸外切酶活性，但失去了5`→ 3`的核酸外切酶活性。
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载体的概念
载体（vector) • 是由在细胞中能够自主复制的DNA分子构成的一 种遗传成分；基因工程中，携带目的基因进入宿 主细胞进行扩增和表达的工具称为载体。 目的基因能否有效转入受体细胞，并在其中维持 高效表达，在很大程度上决定于载体 。
基因工程的名词解释
基因工程的名词解释
基因工程是一种利用生物技术手段改变生物体内遗传信息的技术,包括利用DNA分子作为工具来切割、重组、连接和修饰DNA分子,从而改变生物的性状和功能。
在基因工程中,通常会使用一些特定的工具和技术来操作DNA分子。
这些工具和技术包括:基因编辑技术,如CRISPR/Cas9、Taq酶、文库筛选等;DNA片段的制备,如扩增、剪切、合成等;DNA连接技术,如基因连接酶、基因转化技术等;以及基因转化材料,如植物、细菌、酵母等。
基因工程的应用范围非常广泛,包括生物医学研究、农业改良、食品加工、药物开发等。
在生物医学研究中,基因工程可以用于治疗疾病、开发新药物和改变生物体的性状。
在农业改良中,基因工程可以用于提高作物产量、改善作物品质、降低生产成本等。
在食品加工中,基因工程可以用于改变食品的口感、味道和营养价值等。
除了传统的生物学方法外,基因工程还采用了一些现代技术手段,如基因芯片、基因组学、蛋白质结构预测等。
这些技术的发展使得基因工程的研究和应用更加高效和精准。
基因工程也有一些伦理和法律问题需要解决,如基因隐私、基因歧视、遗传信息保护等。
因此,在基因工程的研究和应用中,需要遵循伦理和法律规定,确保其安全性和合法性。
基因工程的概念
基因工程的概念基因工程是一种利用基因技术改变生物体遗传特征的技术手段。
基因工程包括对基因的分离、克隆、修饰和转移等步骤，通过改变生物体的基因组来获得特定的性状或功能。
基因工程可以在不同的生物体中引入外来基因，实现基因的重组、修改和转移，从而改变其遗传特征并赋予其新的性状。
基因工程的应用范围非常广泛，包括农业、医学、生物工业等领域。
在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高作物的产量和抗性，使其更适应恶劣的环境条件。
通过异种基因转移，可以使作物具有抗虫、抗病、抗逆境等性状，提高作物的品质和经济效益。
在医学领域，基因工程可以用于治疗遗传性疾病。
通过基因修饰和转移，可以校正异常基因或增加缺失的基因，从而纠正遗传疾病的发生机制。
例如，通过基因工程技术可以生产蛋白质药物、基因疫苗和基因诊断试剂，用于预防和治疗多种疾病。
此外，基因工程还可以用于生物工业，如生产酶、药物和生物农药等。
通过基因工程技术可以改变微生物的代谢途径和菌株特性，使其具有高效、高产的产物合成能力。
这对于提高生物工业产品的产量和质量具有重要意义。
基因工程的发展离不开基因技术的进步。
现代基因工程技术主要包括DNA重组技术、基因克隆技术、基因表达技术和基因转导技术等。
这些技术的不断改进和创新，使得基因工程在各个领域的应用更加广泛和深入。
然而，基因工程也面临着一些争议和挑战。
一方面，基因工程技术可能带来一些潜在的风险，如基因突变、基因污染等。
另一方面，基因工程技术的应用也引发了伦理和道德方面的争议，如人类基因编辑是否合乎伦理规范等。
综上所述，基因工程作为一种利用基因技术来改变生物体遗传特征的技术手段，在农业、医学、生物工业等领域都具有重要的应用价值。
随着基因技术的不断发展和完善，基因工程有望为人类社会带来更多的福祉，但也需要在应用中严格控制和规范，以确保其安全和可持续发展。
对基因工程的认识
对基因工程的认识什么是基因工程基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质，以达到人类特定需求的技术。
通过对DNA的操作和改变，基因工程可以创造新的基因组合，改变生物体的遗传特性。
基因工程的应用领域基因工程在许多领域都有重要的应用，如农业、生物医学和工业等。
下面是一些基因工程在不同领域的应用案例：1. 农业•强化作物抗虫能力：通过基因工程，可以向作物中引入抗虫基因，使其获得自身抗虫的能力，降低农药使用量。
•提高作物的耐旱性：基因工程可以帮助作物表达耐旱基因，提高其对水分胁迫的适应能力。
•增加作物的营养价值：通过基因工程，可以使作物表达更多的营养物质，如维生素、矿物质等。
2. 生物医学•生物药物的生产：基因工程技术可以用于生产重要的生物药物，如胰岛素、人血清白蛋白等。
•基因治疗：通过基因工程，可以将健康基因导入患者的细胞中，修复或替代有缺陷的基因，治疗遗传疾病。
•个性化医疗：基因工程可以为患者提供个性化的医疗服务，根据患者的基因信息进行针对性的治疗。
3. 工业•生物质能源生产：基因工程可以改造微生物，使其能够高效利用植物纤维素，生产生物质能源，如生物乙醇、生物柴油等。
•工业酶的生产：通过基因工程，可以大量生产各种工业酶，如纤维素酶、蛋白酶等，用于各种工业生产过程。
基因工程的优点基因工程在许多方面都有着重要的优点，下面是一些常见的优点：1. 进步医疗水平基因工程可以开发出新的治疗方法和药物，帮助治疗许多难以治愈的疾病，为人类的健康提供更好的保障。
2. 提高农业生产效率基因工程可以增强农作物的抗病虫能力、提高产量和质量，帮助解决人口快速增长导致的粮食短缺问题。
3. 降低工业生产成本基因工程可以通过改良微生物，提高酶的生产效率，降低工业生产成本，推动工业发展。
4. 保护环境基因工程可以减少对环境的污染，如利用微生物降解有机废料，减少人类活动对生态环境的破坏。
基因工程的挑战及风险尽管基因工程带来了许多好处，但也存在一些挑战和风险，需要引起足够的重视和保障：1. 遗传多样性的缺失大规模应用基因工程可能导致遗传多样性的缺失，使得物种适应性降低，增加生态系统的脆弱性。
关于基因工程的名词解释
关于基因工程的名词解释引言：基因工程，作为现代生命科学的一个重要分支，旨在通过改变生物体的遗传信息，实现对生物特性的调控和改良。
下面将解释一些与基因工程相关的常见名词，以便更好地理解这个领域的重要概念。
一、基因工程基因工程，又称遗传工程，是一种通过人工方法对生物体的基因进行操作和改造的技术。
它包括对DNA序列的修改、插入和删除，以达到改变生物的表型特征或增强其产物能力的目的。
二、DNADNA（脱氧核糖核酸）是生物体内存储遗传信息的主要分子，它由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳟嘧啶）组成，通过特定的序列排列形成基因。
基因工程的核心工作就是对DNA进行修饰和操作。
三、基因基因是DNA中编码一个特定蛋白质或遗传特征的单位。
每个生物体都由大量基因组成，这些基因决定了生物体的特性和遗传信息的传递方式。
基因工程中的目标之一就是对特定基因进行改造，以期望在生物体中产生特定的效果。
四、基因组基因组是一个生物体中包含的所有基因的集合。
它可以分为染色体基因组和质粒基因组。
染色体基因组是生物体核内DNA组成的基因集合，而质粒基因组则存在于质粒中，通常被用于外源基因的插入和传递。
五、重组DNA技术重组DNA技术是基因工程中一项重要的技术手段，它通过将源自不同生物体的DNA片段在体外进行精确拼接，创造出新的重组DNA。
这种技术可以用于插入外源基因、制备重组蛋白质等。
六、基因表达调控基因表达调控是指细胞对特定基因的调控机制，包括转录因子的结合、启动子区域的调控和DNA甲基化等。
通过基因表达调控，科学家可以改变基因的表达水平，进而改变生物的性状和功能。
七、转基因转基因是指将外源基因导入目标生物体中的过程。
通过转基因技术，科学家可以将具有特定功能的基因导入到其他生物体中，从而改变目标生物体的遗传特性。
八、克隆技术克隆技术是基因工程中的一项重要技术，它可以复制生物体的DNA或细胞。
克隆技术主要包括体细胞核移植和DNA克隆。
基因工程概念
基因工程概念一、前言基因工程是近年来科学技术发展的重要成果之一，它在生物学、医学、农业等领域都有着广泛的应用。
本文将从基因工程的定义、历史、技术原理、应用领域等方面进行详细介绍。
二、基因工程的定义基因工程是指利用现代生物技术手段对生物体中的基因进行人为改造和调控，以达到预期目的的一种技术。
它可以通过改变DNA序列，实现对生物体内部结构和功能的调整和修复。
三、基因工程的历史20世纪70年代初期，科学家们开始尝试通过重组DNA技术来改变生物体内部结构和功能。
1972年，保罗·伯格首次成功地将两个不同来源的DNA片段合并成一个新的DNA分子。
这标志着人类进入了基因工程时代。
此后，随着科技水平不断提高，基因工程技术也得到了快速发展。
四、基因工程的技术原理1. DNA分离：从生物体中提取出需要进行改造或调控的DNA片段。
2. DNA剪切：利用限制性内切酶将需要操作的DNA片段剪切成特定的长度和形状。
3. DNA连接：将不同来源的DNA片段通过连接酶进行拼接，并形成新的DNA分子。
4. DNA转染：将新合成的DNA分子送入目标细胞中，使其被细胞吸收并嵌入到细胞核内。
5. DNA复制：通过PCR等技术手段对嵌入到目标细胞中的DNA分子进行复制，以实现基因工程目的。
五、基因工程的应用领域1. 医学领域：基因工程技术可以用于治疗遗传性疾病、癌症等疾病。
例如，利用CRISPR-Cas9技术可以精准地修复人类基因组中存在的错误或缺陷。
2. 农业领域：基因工程技术可以用于改良作物品种、提高农作物产量和抗逆性能。
例如，利用转基因技术可以增强植物对虫害和草害的抵抗力。
3. 工业领域：基因工程技术可以用于生产高效能、低成本、环保型生物制品。
例如，利用酵母菌等微生物进行大规模发酵生产乙醇、乳酸、维生素等化学品和生物制品。
4. 环保领域：基因工程技术可以用于修复环境污染和生态破坏。
例如，利用基因工程技术可以改变植物对重金属的吸收能力，从而达到净化土壤的目的。
基因工程知识点全
第一章基因工程概述1.什么是基因工程，基因工程的基本流程基因工程（Genetic engineering）原称遗传工程。
从狭义上讲，基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。
因此，供体、受体和载体称为基因工程的三大要素。
1.分离目的基因2.限制酶切目的基因与载体3.目的基因和载体DNA在体外连接4.将重组DNA分子转入合适的宿主细胞,进行扩增培养5.选择、筛选含目的基因的克隆6.培养、观察目的基因的表达第二章基因工程的载体和工具酶1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件具有对受体细胞的可转移性或亲和性。
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点。
具有合适的筛选标记。
分子量小，拷贝数多。
具有安全性。
2. 质粒载体有什么特征，有哪些主要类型1、自主复制性2、可扩增性3、可转移性4、不相容性主要类型有1.克隆质粒2.测序质粒3.整合质粒4.穿梭质粒5.探针质粒6.表达质粒3. 质粒的构建（1）删除不必要的 DNA 区域，尽量缩小质粒的分子量，以提高外源 DNA 片段的装载量。
一般来说，大于20Kb 的质粒很难导入受体细胞，而且极不稳定。
（2）灭活某些质粒的编码基因，如促进质粒在细菌种间转移的 mob 基因，杜绝重组质粒扩散污染环境，保证 DNA 重组实验的安全，同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应的基因，提高质粒的拷贝数（3）加入易于识别的选择标记基因，最好是双重或多重标记，便于检测含有重组质粒的受体细胞。
（4）在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割位点的 DNA序列，即多克隆接头（Polylinker），便于多种外源基因的重组，同时删除重复的酶切位点，使其单一化，以便环状质粒分子经酶处理后，只在一处断裂，保证外源基因的准确插入。
（5）根据外源基因克隆的不同要求，分别加装特殊的基因表达调控元件。
基因工程知识点超全
基因工程一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的额，因此又叫做DNA重组技术。
二、基因工程的基本工具1、限制性核酸内切酶“分子手术刀”2、DNA连接酶-----"分子缝合针”3、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”1．“分子手术刀”计计限制性核酸内切酶（限制酶）（1）存在：主要存在于原核生物中。
（2）特性：特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。
（3）切割部位：磷酸二酯键（4）作用：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
（5）识别序列的特点：瓠腿沛外林蔚黔睫混日龄睫GC G C用处题挪班岫如」「肿第 CCCG 切割后末端的种类醐帆DNA 分子经限珊片段末端通常有两 种形式产产在它识别序列的条链分别切开时，和平末端。
当限制酶中轴线两侧将DNA的两产生的是黏性末端，当限制酶在它识别序列的 中轴线处切开时，产生的则是平末端。
£coRIGAA ｛在G与ACTT 之间切割）TTC AAG中轴线CCC ：GGG CTTAA黏性末端CCC AATTCGGG Sma I（在G 与C 之间切割）GGG|CCCGGGGCC3.分子运输车载体 ⑴载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA 片③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒，它是能力的双链环状DNA 分子。
⑶其他载体：九噬菌体的衍生物、动植物病毒。
(4)载体的作用：①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。
②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
【解题技巧】(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。
基因工程
名词解释：1.启动子：启动子（promoter）是基因表达调控的重要顺式元件，是DNA链一段能被RNA聚合酶识别和结合并能起始mRNA合成的DNA序列，位于结构基因转录起始点上游。
2.基因工程：基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因在体外进行剪切和组合，然后与载体拼接，并通过载体转入到另一种生物体（受体）内，使其按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。
3.表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件，使目的基因能够表达的载体。
4.转化：DNA分子通过与细胞膜结合进入受体细胞并在细胞内稳定维持和表达的过程。
5.插入失活：外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使此基因失活，丧失其原有的表性特征。
：酵母人工染色体，是进行大片段克隆的线状载体。
7.退火：当温度突然降低时，反应体系中寡核苷酸引物和其互补的DNA模板在局部形成杂交链。
文库：是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA与适当的载体连接后转化受体菌形成的重组DNA克隆群。
：多个限制酶的单一切点，即多克隆位点。
10.同尾酶：有些来源不同的限制酶，识别及切割序列各不相同，但产生出相同的粘性末端，这类限制酶称为同尾酶。
质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有λDNA cos序列和质粒复制子特殊类型的载体。
12穿梭载体：是指能在两种不同的生物中复制的载体。
载体：利用土壤根癌农杆菌中存在着一种诱导瘤细胞的质粒构建成的载体。
14.基因文库：从特定生物个体中分离的全部基因，这些基因以克隆的形式存在（人工构建）。
15.融合型表达蛋白：蛋白质的N未端由原核 DNA 序列或其他 DNA 序列编码，C端由真核 DNA 的完整序列编码，蛋白质由一条短的原核多肽或具其他功能的多肽和真核蛋白质结合在一起，故称融合蛋白。
16.反转录酶：是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。
17.末端转移酶：一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3′-OH基上的酶。
什么是基因工程
什么是基因工程基因工程（Genetic Engineering），也称为基因改造、基因操作或遗传改良，是指人工干预生物体的遗传物质，以改变其基因组和基因表达方式的技术。
通过基因工程，科学家可以对生物体的基因进行删减、组合和重新排列，以实现特定的目标，包括改良农作物、生产药物、治疗疾病等。
基因工程的基本原理是利用DNA分子的特性进行操作。
DNA是生物体内携带遗传信息的分子，由一系列碱基序列组成。
基因工程的过程主要涉及到以下几个步骤：1. 基因分离：科学家首先需要从生物体中选择目标基因，对其进行分离和纯化。
一般通过PCR技术、限制酶切剪和电泳等方法，将目标基因从整个基因组中提取出来。
2. 基因复制：接下来，将分离得到的目标基因进行复制，使其得到足够数量的拷贝。
这一步骤可以通过PCR技术或者克隆等方法进行。
3. 基因修饰：为了使目标基因在新的宿主生物体中能够正常表达，科学家可能需要对其进行一些修饰。
这包括在基因中插入特定的启动子和终止子，以及进行DNA序列的修饰和优化。
4. 基因导入：经过修饰后的目标基因需要被导入到宿主生物体中。
这可以通过多种方法实现，例如基因枪、化学转化、电穿孔和冷冻法等。
5. 基因表达：一旦目标基因成功导入宿主生物体，科学家会利用生物体的代谢和复制系统，使其在宿主中得以表达。
不同的宿主生物体有不同的表达方式，例如细菌可通过表达蛋白来生产药物，植物可以通过表达特定基因来改良农作物。
基因工程技术的应用非常广泛。
在农业领域，基因工程可以用于改良作物的抗病性、耐旱性和营养价值，提高农作物产量和品质。
在医学领域，基因工程技术已经应用于制造重组蛋白药物，例如重组人胰岛素和重组人生长激素。
此外，基因工程还被用于研究基因功能、揭示疾病的发生机制，以及开发新的治疗方法。
尽管基因工程技术在农业、医学和科学研究中具有广阔的前景，但其也存在一些伦理和安全问题。
例如，基因工程可能导致基因污染和生物多样性的减少；基因改良农作物可能引发环境问题；基因编辑技术可能涉及到人类胚胎的修改，引发伦理问题。
生物技术之基因工程
生物技术之基因工程基因工程是一种利用基因技术改变、操纵生命体系的技术，通过客观事实和科学方法，把从不同生物体中分离和合成的基因序列组合成符合人类需要的代谢途径和生命功能，造福人类。
本文将对基因工程的意义、实现、影响等方面进行介绍。
一、基因工程的意义基因工程的目的是为了利用基因技术改变、操纵生命体系，以实现人类追求健康、节约、生产和保护地球环境的目标。
基因工程的重要意义主要表现在以下三个方面：1、医学领域的应用基因工程在医学领域有着巨大的应用前景，不仅可以创造出治疗疾病和改善人类健康的新药物，还可以创造出实现人体组织和器官的再生和再造的新方法。
通过基因工程，可以创造出具有良好生物学效能的生物药，可大大提高药物的疗效，降低药品的不良反应，改善人类健康水平。
2、农业领域的应用基因工程对农业生产的推动也是巨大的，可以创造出具有适应各种恶劣环境，具有更强的抗病性和耐旱能力的新品种；通过基因工程，可以创造出增强动物生长、提高果树的抗逆性和品质、改善农作物的产量和质量的新品种，以满足人类对食品需要的日益增长的需求。
3、环保领域的应用基因工程也可以在环保方面起到很大的作用，可以创造出绿色环保的新材料，如可以转化降解塑料的生物材料、可以转化对污染物有生物修复作用的生物材料等。
这些新材料能够保护环境和人类健康，从而加强生态文明建设和可持续发展。
二、基因工程的实现基因工程的实现方法主要有以下几种：1、基因克隆技术基因克隆技术是指将一个基因从一个生物体中割取出来，并在另一个生物体中表达出来，使得一个新的生物体拥有新的性状或能力，实现基因的遗传。
2、各种基因检测技术包括PCR反应、电泳、DNA杂交和靶向细胞转染等。
3、转基因技术通过向植物或动物细胞中导入外源基因，使得这个生物体可以具备新的特征，能够让人类乃至整个世界受益，已经成为目前基因工程发展的重头戏。
三、重要的基因工程实践1、转基因食品和作物转基因食品和作物在农业生产上起到重要作用。
什么是基因工程
1.什么是基因工程的定义和概念？基因工程是一门利用分子生物学和遗传学技术对生物体的基因进行操作和改变的科学领域。
它涉及将外源基因导入到目标生物体中，或者对目标生物体的内源基因进行修改，以实现特定的目标。
基因工程的目的是通过改变生物体的基因组来增强其特定性状，或者为人类社会的需要创造新的生物体。
这种改变可以包括插入、删除或修改基因序列，以改变生物体的特征、功能或表达。
基因工程的概念基于对基因的理解和技术的发展。
基因是生物体遗传信息的基本单位，它决定了生物体的遗传特征和功能。
通过基因工程，科学家可以精确操作基因，使得生物体具有特定的性状或功能。
基因工程在农业、医学、工业等领域具有广泛的应用。
在农业上，基因工程可以改良作物，使其具有抗病虫害、耐逆性和提高产量等性状。
在医学上，基因工程可以用于治疗遗传性疾病，生产重组蛋白药物以及开发基因诊断和基因治疗等领域。
在工业上，基因工程可以用于生产生物燃料、酶和其他生物化学品。
然而，基因工程也引发了一些伦理和安全问题，例如对环境和健康的潜在影响，以及基因编辑的道德和法律考量。
因此，基因工程的发展需要平衡科学发展、社会需求和伦理原则之间的关系。
总之，基因工程是一门重要的科学领域，它通过改变生物体的基因组来实现特定目标，具有广泛的应用前景和深远的影响。
2.基因工程的历史和发展背景是什么？基因工程是现代生物技术领域中的重要分支，它的发展可以追溯到20世纪中叶。
以下是基因工程的历史和发展背景的概述：发现DNA结构和基因的本质：在20世纪的早期，科学家们开始对生物遗传的本质进行研究。
1953年，詹姆斯∙沃森和弗朗西西斯∙克里克发现了DNA的双螺旋结构，揭示了基因的分子组成和遗传信息的传递方式。
这一发现奠定了基因工程的理论基础。
重组DNA技术的出现：1972年，保罗∙伯戈和斯坦利∙科恩等科学家首次成功地使用限制性内切酶切割DNA，并将来自不同来源的DNA片段重新组合，形成了重组DNA技术的基础。
基因工程的基本概念
基因工程的基本概念一、基因工程的定义基因工程，又称为遗传工程，是一门通过人工操作来改变生物遗传物质的科学。
它利用现代分子生物学技术，通过对DNA的精确剪切、拼接和重组，实现对生物遗传特性的改造和优化。
基因工程在生物医学、农业、工业和环保等领域有着广泛的应用。
二、基因工程的历史背景基因工程的起源可以追溯到20世纪70年代初期，当时科学家们开始探索DNA的分子结构和功能。
随着限制性内切核酸酶的发现和DNA体外重组技术的建立，基因工程开始得以实现。
1973年，美国斯坦福大学的伯格（Paul Berg）等人成功实现了第一次DNA体外重组实验，标志着基因工程的诞生。
三、基因工程的基本操作流程1.目的基因的获取：基因工程的第一步是获取所需的目的基因。
目的基因可以通过多种方法获得，如从生物体内直接分离、利用聚合酶链式反应（PCR）扩增或者通过化学合成等方法。
2.载体的构建：获取目的基因后，需要构建一个载体，以便将目的基因导入受体细胞。
载体通常是一种质粒或病毒，经过改造后能够携带外源基因并稳定表达。
3.基因的转移：将目的基因导入受体细胞是基因工程的另一个关键步骤。
常用的转移方法包括转化、转导、显微注射和基因枪等。
4.重组与筛选：在目的基因成功导入受体细胞后，需要通过重组技术将外源基因整合到受体细胞的染色体上。
随后，通过特定的筛选方法，如抗性筛选、Southern印迹杂交等，从众多的受体细胞中选育出含有目的基因的克隆。
5.表达与鉴定：最后，通过分子生物学技术和生物化学分析方法，检测目的基因的表达水平，并对重组蛋白进行鉴定和表征。
这一步对于验证基因工程的成功实施以及评估目的基因的功能至关重要。
四、基因工程的应用领域1.生物医学：在生物医学领域，基因工程被广泛应用于疾病诊断、治疗和预防。
例如，利用基因工程技术生产重组蛋白药物、抗体药物和细胞治疗等；同时，基因工程也为遗传病和传染病的研究和治疗提供了有力工具。
2.农业领域：基因工程在农业上的应用主要涉及作物改良、病虫害防治和产量提高等方面。
一、基因工程定义基因工程(gene engineering)或遗传工程...
Bioengineering of plants.
三、基因工程的应用
在生产多肽类药物、疫苗中的应用 改造传统工业发酵菌种 动、植物特性的基因工程改良 基因工程在环境保护中的应用
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第四节 基因工程
一、基因工程定义
基因工程（gene engineering）或遗传工程（genetic engineering ）指人们利用分子生物学的理论和技术，自 觉设计、操纵、改造和重建细胞的遗传核心——基因组，
从而使生物体的遗传性状发生定向变异，以最大限度满
足人类活动的需要。
二、基因工程的基本操作
目的基因 的取得
优良载体 的选择
目的基因于载体 DNA的体外重组 重组受体细胞的 筛选和鉴定
重组基因导 入受体细胞
“工程菌”或“工程细 胞”的大规模培养
基因工程三大系统
载体系统 供体系统 受体系统 Nhomakorabea基因工程四大步骤
切 连 转 选
Steps in recombinant DNA, gene cloning, and product retrieval.
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名词解释⒈基因操作：将细胞中产生的核酸分子插入到病毒、质粒或其他载体分子中，再整合到原本不含有该类物质的宿主当中，从而形成一个可持续繁殖的有机体⒉内含子：指真核生物基因中不能被翻译成蛋白质的的DNA片段⒊外显子：能翻译成蛋白质的任何一个间断基因片段⒋启动子：基因转录过程中控制起始的部位，通常一个基因是否表达，转录起始起到决定性的作用⒌同裂酶：识别序列相同的限制性酶，但切割部位有可能不同⒍同尾酶：许多不同的限制酶切割DNA产生的末端，是相同的且是对称的，他们产生相同的黏性突出末端，这些酶统称为同尾酶⒎位点偏爱：指某些限制性酶对同一个介质中的有些位点表现出偏爱性的切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象⒏星星活性：指在极端非标准条件下（酶过量），限制性酶能切割与识别相似的序列，这种改变的特性称为星星活性⒐溶源特性：指λ-噬菌体感染大肠杆菌后，除了不能裂解细胞外，也不能将其DNA直接整合到寄主细胞的染色体DNA上，并且不产生子代细菌体颗粒⒑溶菌状态：λ-DNA整合到寄主细胞染色体DNA上，并且表达产生子代噬菌体颗粒⒒基因文库(gene libray)：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将所有这些片段都与适当的载体连接，引入相应的寄主细胞中保存和扩增，理论上将这些重组载体上带有该生物体的全部基因，称为基因文库⒓cDNA：以mRNA为模版，经过转录酶作用形成的DNA为cDNA⒔cDNA文库：利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与细菌连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称为cDNA文库⒕转化（transformation）:大肠杆菌捕获质粒DNA的过程⒖转导（transduction）：借助噬菌体把外源DNA导入细菌中的过程⒗转染（transfection）: 大肠杆菌捕获噬菌体DNA的过程⒘转化率：指每克DNA转化成功的细菌克隆指数18.插入失活：把外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使此基因失活，丧失其原有的表性特征，此方法叫插入失活。
19.显色反应：加入无色底物与二抗上所携带酶发生催化反应形成有色物20.免疫印迹：又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
21.酶连免疫（ELISA）：将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法22．Ti质粒：(Ti-plasmid)存在于能够引起植物形成冠瘿瘤的土壤脓杆菌中，诱导冠瘿瘤的形成，又称为肿瘤诱导质粒23．T-DNA（转移DNA）：编码冠瘿碱的合成，能随机整合到植物染色体上，长度为12-24kb,是Ti质粒最重要的部位问答题⒈溶菌酶的作用：能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1，4糖苷键⒉葡萄糖的作用：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力的作用而降解⒊EDTA的作用：是Mg²+，Ca²+的螯合剂，可抑制DNA酶的活性，防止DNA被酶降解⒋影响质粒DNA产量的因素：①菌株的遗传背景②质粒自身的拷贝数⒌❶细菌基因组DNA制备的方法：①细胞裂解②DNA纯化③沉淀DNA❷哺乳动物基因组DNA制备的方法：①组织粉碎②细胞裂解③纯化DNA④沉淀DNA ❸植物组织基因组DNA 制备的方法①组织粉碎②细胞裂解③纯化DNA④沉淀DNA⑤除去RNA污染⒍工具酶：①限制性内切酶②连接酶③甲基化酶④糖基化酶⒎限制性内切酶的分类：①Ⅰ类限制性内切酶②Ⅱ限制性内切酶③Ⅲ限制性内切酶⒏限制性内切酶作用产生的末端：①粘性末端②齐平末端③非对称末端⒐❶同裂酶：识别位点序列相同的限制性内切酶。
❷同尾酶：识别序列不同，但能切出相同的粘性末端⒑Ⅰ类限制性内切酶和Ⅱ类限制性内切酶的区别：❶限制和修饰活性：Ⅰ类酶是单一多功能的酶，Ⅱ类酶是共基因的双功能的酶❷内切酶的蛋白结构：Ⅰ类酶是3种不同的亚基，Ⅱ类酶是2种不同的亚基❸限制作用所需要的辅助因子：Ⅰ类酶是ATP、Mg²+和SAM，Ⅱ类酶是ATP、Mg²+和SAM❹寄主特异性位点：Ⅰ类酶是EC0B：TGA(8N)TGCT，Ⅱ类酶是EC0P1:AGACC❺识别序列：Ⅰ类酶是EC0K：AAC(6N)GTGC，Ⅱ类酶是EC0P15：CAGAG ❻切割位点：Ⅰ类酶是在距离识别位点至少1000bp处随机切开一条单链，Ⅱ类酶是距离特异性位点3＇端24-26bp处❼酶催化转换：Ⅰ类酶不能，Ⅱ类酶能❽DNA易位作用：Ⅰ类酶能，Ⅱ类酶不能❾甲基化作用位点：Ⅰ类酶是寄主特异性位点，Ⅱ类酶是寄主特异性位点❿识别甲基化的序列进行切割：Ⅰ类酶能，Ⅱ类酶不能❶序列特异性切割：Ⅰ类酶不是，Ⅱ类酶是⒒终止酶切的方法有哪些：①加EDTA②加热（使蛋白质变性）③苯酚（变性剂）④用试剂盒淡化DNA⒓可以通过哪些方法插入酶切位点：①酶切②连接⒔㈠引起星星活性的因素：①甘油浓度过高②酶过量③离子强度过低④pH值过高⑤加入有机溶剂⑥用其他金属离子代替Mg²+㈡抑制星星活性的措施：①减少酶的用量，避免酶过分切割②降低甘油浓度，保证反应体系中无机溶剂③增加离子强度④pH值保持在7.0左右⑤保证Mg²+作为二价阳离子⒕缓冲液中各组分的作用①溶菌酶：破坏大肠杆菌细胞壁②葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压③EDTA：乙二胺四乙酸.作用：抑制DNA酶的活性，防止DNA降解⒖甲基化酶的种类：①Dam甲基化酶②Dcm甲基化酶③EcokⅠ甲基化酶④sssⅠ甲基化酶⒗Ecoli、DNA、polyEⅠ大片段（klenow）㈠klenow酶基本活性：①5＇-3＇的DNA聚合酶活性②3＇-5＇的核酸外切酶活性㈡klenow酶的基本用途（klenow酶失去了5＇-3＇外切能力，依然具备纠错能力）：①补平3＇的凹端②抹平3＇的突出端③对DNA片段进行末端的同位素标记④cDNA第二条链合成功能⑤利用双脱氧末端终止法，进行序列测定⒘T₄噬菌体DNA聚合酶：㈠基本活性：①5＇-3＇DNA聚合功能②3＇-5＇外切酶活性（降解单链更快）a.在没有dNTP存在的情况下，可以从任何碱基的3＇（-OH）羟基进行外切b.只有dNTP时，外切还与该dNTP互补处停止c.四种dNTP时，聚合活性占主导㈡基本用途：①切平由核苷酸内切酶产生的3＇粘性末端②对DNA片段进行末端同位素标记⒙反转录酶的基本特性：以mRNA为模版进行DNA聚合。
用途：①合成cDNA ，以oligodT 为引物②合成DNA探针，用随机引物或oligodT③RT-PCR用的模版⒚载体的功能：①运输外源DNA高效地进入受体细胞中②为外源基因提供复制和整合的能力③载体是外源基因在受体细胞中扩增和表达的必要条件⒛作为载体应具备哪些条件：①具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性②具备与受体细胞相适应的复制位点和整合位点③具备较高的DNA的装载能力④具有多种单一性核酸内切酶识别位点⑤具有合适的筛选标记a.判断目的基因与载体是否成功连接b.重组DNA分子是否成功载入受体细胞21.质粒的特征：①质粒是生物细胞所固有的独立地存在于寄主细胞中，能进行自我复制、遗传稳定的一类DNA②质粒常见于原核生物当中③绝大多数质粒为DNA，极少数是RNA ④绝大多数质粒是超螺旋、共价、闭合环状的DNA即cccDNA⑤分子大都只有10kb（1000个碱基对）22.质粒的特性：①自主复制性②不相容性③可转移性④携带特殊的遗传标记23.质粒的分离纯化方法：❶氯化铯密度梯度离心法❷沸水浴法❸碱溶法❶氯化铯密度梯度离心法：①利用EDTA缓冲液悬浮菌体②加溶菌酶，裂解细菌细胞壁③加氯化铯和溴化乙锭④超速离心过夜（4-12h）⑤在紫外线照射下，吸取cccDNA上层⑥稀释沉淀的cccDNA❷沸水浴法：①用含有EDTA和Triston-X让菌体悬浮②加溶菌酶，水解细菌细胞壁③沸水浴煮沸40s（使膜彻底变变性）④离心，用无菌牙签，挑取沉淀物⑤用乙醇或异丙醇沉淀质粒DNA❸碱溶法：①用含有EDTA缓冲液悬浮菌体②加溶菌酶，破除细菌细胞壁③加NAOH和SDS（十二烷基黄酸钠）④加高浓度的醋酸钠，沉淀染色体，去除染色体DNA极大部分的蛋白质⑤离心，要上清液（含质粒cccDNA）⑥加乙醇或异丙酮（1：1），使cccDNA产生沉淀⑦加RNAse酶---RNA核酸内切酶----降解RNA，彻底去除RNA24. λ-DNA载体的主要类型：①插入失活型②取代型③正选择型25. λ-DNA作为载体的5大优点：①λ-DNA在体外包装成噬菌体颗粒，能高效转染大肠杆菌②λ-DNA载体的装载能力为2.5kb，远大于质粒的装载能力③重组λ-DNA分子筛选比较方便④重组λ-DNA分子提取比较方便⑤λ-DNA载体适合分子克隆或扩增外源DNA片段，但不适合表达外源基因26.M13的生物学结构：①外形是丝状②外有蛋白质外壳③不裂解寄主细胞，但会抑制其生长④全长是6407个核苷酸⑤整个DNA上至少有10个基因，可形成4700个蛋白质外壳27.考斯质粒的特点：①能像λ-DNA一样进行体外包装，能够高效转染寄主细胞②能自我复制③重组操作简单，筛选容易④装载能力大，达到45kb⑤不能进行体外包装，不能裂解寄主细胞28.噬菌体的特点：①能进行体外包装，高效转染寄主细胞②和质粒一样能自我复制③装载量比常规M13的大，可达到10kb④通过克隆双链DNA能获得同等长度的单一单链DNA⑤重组操作简单29.片段化的方法：①限制性内切酶法②随机片段法③机械切割法a.超声波法b.离心法30.化学合成目的基因的方法：①磷酸二酯法②磷酸三酯法③亚磷酸三酯法④固相合成法⑤自动化学合成法31. 化学合成DNA片段的组装：①互补连接法②互补延伸连接法32.基因文库构建的一般步骤：❶染色体DNA片段的构建①物理切割法（超声波、高速搅拌）②酶切法（内切酶）❷DNA片段的连接①直接连接②做一个人工接头③同聚物加尾法33.基因文库大小的计算：（一个文库要包括基因组99﹪DNA所需要的克隆数目）N=［ln(1-P)］／［ln(1-f)］=4.61×﹙G／5﹚﹛N:克隆数目，P：概率99﹪，f：fragment，G：整个基因组的长度﹜34.cDNA文库的特点：①不含内含子序列②可以在细菌中直接表达③包含了编码蛋白质的全部基因④cDNA文库小的多，容易构建35.构建cDNA文库的一般步骤：①提取，纯化mDNA②以mDNA为模版合成第一条cDNA链③将mDNA链水解④第二条cDNA链的合成⑤去掉发夹结构36.PCR扩增的方法与原理：❶（原核生物）直接扩增基因组DNA❷（真核生物）从mDNA扩增（通过mDNA反转录形成cDNA，与DNA比较）❸模版①提取基因组的DNA（总DNA）②反转录获得cDNA（作用：作为PCR模版）❹引物③设计合成引物（针对目的基因设计）④扩增37.DNA体外连接的注意事项：①要求插入的片段与载体的酶切位点互补，即相同的粘性末端才能有效的连接，尽量避免末端直接连接（用相同的酶切，用同尾酶进行切割）②DNA插入的方向必须正确③插入基因的CRF必须正确④防止载体自身环化38.DNA片段体外连接：①粘性末端的连接②平末端的连接（直接连接、衔接物连接、DNA 连接法）39.载体和外源插入基因连接的结果：①载体自身环化连接（能存活）②载体间连接（能存活）③插入片段之间连接（不能存活，因为片段上无复制起始点）④一个载体与N个片段连接（能存活）⑤N个载体与一个片段连接（能存活）40.感受态（对数生长期）大肠杆菌的制备：①目的：增加大肠杆菌细胞壁的适应性②菌种：丧失限制系统的大肠杆菌③制备与原理：CaCl₂—›大肠杆菌细胞壁的通透性41．重组DNA转入到大肠杆菌的方式：转化、转染、转导42.DNA的电泳检测方法：①直接电泳检测法②酶切电泳筛选法③PCR扩增法43.核算杂交：❶Southern—›DNA与DNA杂交，RNA与DNA杂交❷Northern—›检测RNA❸Western —›检测蛋白质44.SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳）中化学试剂的作用：❶.SDS（十二烷基磺酸钠）：使蛋白质变性❷ PAGE（聚丙烯酰胺电泳）：在电场作用下，线性蛋白质在PAGE 介质中向正极移动，移动速度取决于其分子量大小，即链的长短，从而把不同分子量的肽链分开45.蛋白质染色方法：❶直接法①考马斯亮蓝染色②硝酸银染色❷转膜及染色46.冠瘿碱分类：①章鱼碱②胭脂碱③脓杆碱④琥珀碱（冠瘿碱的作用：在冠瘤内合成并分泌出来的是脓杆菌的C源和N源）47.DNA的定量方法有哪些：①紫外光谱法：紫外分光光度计②电泳法：琼脂糖凝胶电泳48.DNA测序技术：①双脱氧链终止法②Max—Gilbert化学修饰法49.PCR技术的扩展：①RTPCR（反转录PCR）：以mRNA为模版，产物为cDNA②RAPD:随机扩增多肽性DNA技术（PCR技术产物为cDNA）50.电泳的分类：①聚丙烯凝胶电泳②琼脂糖凝胶电泳51.电泳的基本原理：电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。