弯曲菌与螺杆菌

1983年Marshall和Warren首先用微需氧技 年 和 首先用微需氧技 术从慢性胃炎、 术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜 分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染 分离出弯曲状的细菌， 胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡， 胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡， 获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖 年诺贝尔生理学和医学奖 获得了
三、生物学特性
• 为微需氧菌，在5%O2、10%CO2、 微需氧菌， 85%N2的环境中生长良好。最适生长温度 的环境中生长良好。 为37℃。相对湿度在 ℃ 相对湿度在98%以上为宜 以上为宜 • 营养要求较高，一般需含血液或血清才能 营养要求较高， 生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、 生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、 心脑浸液血琼脂、 心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养基等
• 弯曲菌属（Campylobacter）是一类呈逗 弯曲菌属（ ） 点状或S形的革兰阴性菌 形的革兰阴性菌， 点状或 形的革兰阴性菌，广泛分布于动 物界 • 其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠 其中有些可引起动物与人类的腹泻、 炎和肠道外感染等疾病 • 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、 儿弯曲菌等， 儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常 见病原菌
（五）其他方法测定
• 免疫学方法
– 用特异性抗体包被的乳胶颗粒，可用于鉴定空 用特异性抗体包被的乳胶颗粒， 大肠弯曲菌。 肠/大肠弯曲菌。也可采用酶免疫方法测定粪便 大肠弯曲菌 中弯曲菌抗原进行诊断。 中弯曲菌抗原进行诊断。血清中抗体测定用于 流行病学调查
• DNA探针和 探针和PCR扩增 探针和 扩增
HP致病机理 致病机理
• 尚不清楚，可能与下列因素有关： 尚不清楚，可能与下列因素有关：
– 特殊的螺旋状和端鞭毛有助于 穿过胃粘膜表面粘液层 特殊的螺旋状和端鞭毛有助于HP穿过胃粘膜表面粘液层 与胃粘膜上皮细胞接触； 与胃粘膜上皮细胞接触； – 具有高活性胞外脲酶分解尿素，产生氨中和菌体周围胃 具有高活性胞外脲酶分解尿素， 有助于细菌定植； 酸，有助于细菌定植； – 细胞毒素相关蛋白（CagA）和空胞毒素（VacA） 细胞毒素相关蛋白（ ）和空胞毒素（ ）
– 幽门螺杆菌 幽门螺杆菌(H. pylori)、 H. fennelliae和H. cinaedi。 、 和 。
• 幽门螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾 幽门螺杆菌与萎缩性胃炎， 与萎缩性胃炎 病相关 • 其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。 其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。
诺贝尔生理学和医学奖
一、分类
• 弯曲菌原归属于弧菌属，1973年正式命名为 弯曲菌原归属于弧菌属， 年正式命名为 弯曲菌属 • Campylobacter源自希腊语意为弯曲的杆状 源自希腊语意为弯曲的杆状 • 1984年在伯杰手册中将其分为 个种 亚种 。 年在伯杰手册中将其分为5个种 亚种)。 年在伯杰手册中将其分为 个种(亚种 近年来发现了弯曲菌的许多新种和亚种。 近年来发现了弯曲菌的许多新ห้องสมุดไป่ตู้和亚种。
（三）标本直接检查
• 直接显微镜检查
– 粪便与肛拭子可直接镜检，查找革兰阴性 粪便与肛拭子可直接镜检， 弧形、 形 海鸥形” 呈弧形、S形、“海鸥形”或螺旋形的小 杆菌；或用暗视野或相差显微镜观察， 杆菌；或用暗视野或相差显微镜观察，查 见该菌呈投镖式或螺旋式 投镖式或螺旋式运动可初步诊断 见该菌呈投镖式或螺旋式运动可初步诊断
三、生物学特性
微需氧菌， • 弯曲菌为微需氧菌，空肠弯曲菌和其他大 弯曲菌为微需氧菌 多数弯曲菌生长时需氧浓度为5%~10% 多数弯曲菌生长时需氧浓度为 ）。最佳气体环境为含 氧气、 （V/V）。最佳气体环境为含 氧气、 ）。最佳气体环境为含5%氧气 10%二氧化碳及 二氧化碳及85%氮气 二氧化碳及 氮气 • 细菌抵抗力不强，室温可迅速死亡。对热 细菌抵抗力不强，室温可迅速死亡。 敏感，标本在4℃冰箱可保存3周 敏感，标本在 ℃冰箱可保存 周。
• VacA在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性，体内导 在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性， 在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性 致小鼠胃粘膜上皮细胞损伤和溃疡形成。 致小鼠胃粘膜上皮细胞损伤和溃疡形成。 • CagA与致病岛的 与致病岛的picB紧密相连，协同诱导胃粘膜上皮细胞产生 紧密相连， 与致病岛的 紧密相连 多种细胞因子，吸引炎症细胞释放多种酶类致胃组织损伤。 多种细胞因子，吸引炎症细胞释放多种酶类致胃组织损伤。 • cag A基因与胃癌发生密切相关。 基因与胃癌发生密切相关。 基因与胃癌发生密切相关
2．鉴定
• 鉴定要点： 鉴定要点： – 弯曲菌属鉴定要点：氧化酶阳性，革兰阴性，菌体弯曲 弯曲菌属鉴定要点：氧化酶阳性，革兰阴性， 或呈S形 试验； 或呈 形，生长温度 (25℃、37℃、42℃)试验； ℃ ℃ ℃ 试验 – 奈啶酸、头孢噻吩敏感试验 奈啶酸、 • 空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药； 空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药； • 胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。 胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。 • 但近年出现对奈啶酸耐药的空肠弯曲菌 – 马尿酸盐水解试验 • 凡马尿酸盐水解试验阳性、42℃生长、氧化酶阳性、 凡马尿酸盐水解试验阳性、 ℃生长、氧化酶阳性、 与镜检形态相符者， 与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲菌空肠亚种 – 醋酸吲哚水解试验 • 空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性 空肠弯曲菌阳性，
三、生物学特性
• HP生长缓慢，需经48~72h才长出菌落 生长缓慢，需经 生长缓慢 才长出菌落
– 微氧环境培养 微氧环境培养
– 空肠 大肠弯曲菌最适生长温度42~43℃，24h可观察菌落， 空肠/大肠弯曲菌最适生长温度 可观察菌落， 大肠弯曲菌最适生长温度 ℃ 可观察菌落 如于37℃培养则需48~72h 如于 ℃培养则需 – 胎儿弯曲菌于 ℃和37℃均可生长 胎儿弯曲菌于25℃ ℃ • 临床标本需分别置37℃和42℃中培养，方不致漏检。在同一 临床标本需分别置 ℃ 需分别置 ℃中培养，方不致漏检。 培养基上出现灰白、湿润、 培养基上出现灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长菌落及 半透明、圆形、凸起、 半透明、圆形、凸起、有光泽的小菌落等两种菌落
弯曲菌Gram Stain
三、生物学特性
• 本属细菌的抗原成分有菌体 抗原、热不 本属细菌的抗原成分有菌体(O)抗原、 抗原 稳定抗原(HL系统 和鞭毛 抗原。 系统)和鞭毛 抗原。 稳定抗原 系统 和鞭毛(H)抗原 • 根据 抗原不同，将空肠弯曲菌和大肠弯曲 根据O抗原不同 抗原不同， 菌分为65个血清型 个血清型。 菌分为 个血清型。 • 根据 系统抗原，将空肠弯曲菌、大肠弯 根据HL系统抗原 将空肠弯曲菌、 系统抗原， 曲菌和海鸥弯曲菌至少分160个血清型 曲菌和海鸥弯曲菌至少分 个血清型
三、生物学特性
菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。 菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。 菌体长2.5~4.0µm，宽0.5~1.0µm。 革兰染色阴性，有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常 呈典型的螺旋状或弧形。 • 固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现 杆状或圆球状。 • 电镜下菌体的一端可伸出2~6条带鞘鞭毛。 • 鞭毛长为菌体1~1.5倍，粗约30nm。鞭毛在运动中 起推进器作用，在定居过程中起锚住作用。 • • • •
三、生物学特性
• HP基因组约 基因组约1.67×106bp，DNA G+C百 基因组约 × ， 百 分含量为37mol%，其全部序列已有报道 分含量为 ， • 研究较多和较重要的基因有脲酶基因 研究较多和较重要的基因有脲酶基因ure A、ure B、ure C，细胞毒素相关基因 、 、 ， cag A，空泡毒素基因 ，空泡毒素基因vac A • HP菌株间具有共同抗原 菌株间具有共同抗原
四、微生物检验
(一)检验程序 一 检验程序
（二）微生物检验
• 标本采集 采取新鲜粪便与肛拭子、血液、 采取新鲜粪便与肛拭子、血液、 脑脊液等立即送检。 脑脊液等立即送检。如不能及时送检应种 运送培养基， 入Cary-Blair运送培养基，放4℃冰箱保存。 运送培养基 ℃冰箱保存。 血液、脑脊液标本应先进行增菌。 血液、脑脊液标本应先进行增菌。
二、临床意义
• 空肠 大肠弯曲菌广泛分布于温血动物。未经处理的水以及 空肠/大肠弯曲菌广泛分布于温血动物。 大肠弯曲菌广泛分布于温血动物 生牛乳是人类感染的主要来源。 生牛乳是人类感染的主要来源。弯曲菌的传播途径主要以食 物和水的传播为多见， 物和水的传播为多见，经口摄入是本菌最主要的传播方式 – 腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现 – 感染后可引发吉兰 巴雷综合症和反应性关节炎 感染后可引发吉兰-巴雷综合症和反应性关节炎 • 胎儿弯曲菌主要引起肠外感染 – 其中胎儿亚种为主要的人类致病菌 – 可致人类菌血症、心内膜炎、血栓性静脉炎、活动性关 可致人类菌血症、心内膜炎、血栓性静脉炎、 节炎、脑膜炎、肺部感染、胸膜炎、腹膜炎、 节炎、脑膜炎、肺部感染、胸膜炎、腹膜炎、胆囊炎等
Helicobacter Gram Stain
二、临床意义
• HP感染非常普遍。该菌为一种高度适应或 感染非常普遍。 感染非常普遍 只能生活于胃粘膜的细菌， 只能生活于胃粘膜的细菌，菌体周围微环 境的pH值为 值为7.0。 境的 值为 。胃窦为其定植的最佳部位 • HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎之 感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎之 感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎 间的病因关系已充分确立。 间的病因关系已充分确立。 • 流行病学资料表明胃癌发病率在一些 感 流行病学资料表明胃癌发病率在一些HP感 胃癌发病率在一些 染率高的人群中较高
– DNA-DNA杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是 杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是 一种成功的参考方法。 一种成功的参考方法。 – PCR扩增技术也正在发展中 扩增技术也正在发展中