火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法 江苏上海液相色谱仪
高效液相色谱测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠方法验证
中图分类号：TS207
XIANDAISHIPIN 现代食品 /137
分析检测 Analysis and Testing
1 实验材料
单位为 g。
1.1 试剂与仪器设备
3 结与结论
苯甲酸标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100006， 中国计量科学研究院 ]、山梨酸标准物质 [1.0 mg·mL-1， 编号：GBW(E)100007，中国计量科学研究院 ]、糖精 钠标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100008，中 国计量科学研究院 ]，电子天平、高速冷冻离心机、岛
1.2 仪器条件
3.2 检出限
色谱柱：Venusil C18 Plus 4.6 mm×250 mm，5 μm； 流动相：甲醇 + 乙酸铵溶液 =10+90，pH 为 8.5；流速： 1 mL·min-1；检测波长：230 nm；进样量：10 μL；柱 温：30 ℃。
苯甲酸在 0.25 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出 限为 0.006 g·kg-1；山梨酸在 0.20 mg·L-1 时，信噪比大 于 3 ∶ 1，检出限为 0.005 g·kg-1；糖精钠在 0.50 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出限为 0.012 5 g·kg-1。
关键词：山梨酸；苯甲酸；糖精钠；高效液相色谱
Abstract：With the rapid development of modern food industry, benzoic acid, sorbic acid and sodium saccharin are widely used in food. At the same time, excessive use of additives also brings harm to people’s food safety. Therefore, the detection method of additives is very important. Refer to GB 5009.28-2016 national food standards, sorbic acid, benzoic acid and sodium saccharin are widely used in food, the principle of saccharin sodium determination is to use high performance liquid chromatography to determine benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in food. Through validation of the detection method, the repeatability, detection limit and recovery rate of the method are determined. Under the condition, all the three components were separated completely with a good linear relationship. The standard recovery rate was in the range of 89.4% ～ 102.7%, and the relative standard deviation was 0.02% ～ 0.10%. The adaptability of the laboratory environment and equipment to this method is better determined, which greatly reduces the personnel capacity. The inaccuracy caused by force, environment, equipment and other reasons.
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1 材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2)分析天平，(3)酸度计，(4)离心机，(5)振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2)山梨酸，(3)脱氢乙酸，(4)甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液,(2)0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。
1.3色谱参数和条件（1）色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5μm)（2）流动相：甲醇—0.02mol/L磷酸氢二钾溶液（10:90）（3）流速：1.0ml/min（4）进样量：10μL（5）检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脱氢乙酸）1.4样品处理1.4.1 固体样品（如熟肉制品.豆制品及糕点类）（1）称取捣碎混匀的样品5g ( 精确至0.01g ) 于具塞三角瓶中，（2）精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4℃放置24h ，（3）离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
1.4.2 液体样品( 如冷冻饮品)（1）将样品于室温下解冻后，称取10g ( 精确至0.001g ) 于25ml 量瓶中，（2）用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4℃放置24h ，（3）离心，取上清液3ml ，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。
2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml 中含0.1μg,0.5μg,1μg,4μg,8μg,12μg,16μg,20μg 的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定， 且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(μg/ml)为横坐标，峰面积A 为纵坐标制作标准曲线；以浓度C(μg/ml) 对峰面积A 进行线性回归，按信噪比3，计算检出限2.2 精密度和方法回收率试验（1）精密度实验：取同一对照品溶液( 各浓度均为10μg/ml ) ，重复进样，测出各峰面积的 RSD 值。
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析一、实验目的1、了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。
2、掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标定量方法。
二、实验原理高效液相色谱法是重要的液相色谱法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
根据使用的固定相及分离机制的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K ；组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度K显然，K 越大，组分在固定相上停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越大，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
据此，采用反相液相色谱法可分离防腐剂苯甲酸和山梨酸。
本实验采用外标法测定样品中苯甲酸和山梨酸的浓度。
外标法又称定量进样-标准曲线法，指用欲测组分纯物质配制成不同浓度的标准溶液，取固定量标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。
分析样品时，取和制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该样品的响应信号，由标准曲线即可查出其浓度。
三、仪器DIONEX UltiMate3000（USA ） 高效液相色谱仪（配有自动进样器，紫外检测器）。
四、试剂和溶液苯甲酸（分析纯）、山梨酸（分析纯）、甲醇（色谱纯)、高纯水、0. 02 mol/ L 乙酸铵溶液、标准储备液、标准使用液、标准混合使用液、未知溶液。
高效液相色谱法测定食品中山梨酸
高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%~100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。
高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。
各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。
因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。
并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。
1 材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1 仪器戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。
1.1.2 试剂色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6％亚铁氰化钾；22％乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。
1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液(国家标准物质中心)。
1.1.3 色谱条件色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30℃；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL 。
1.2 前处理方法汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入20～30ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤后上机。
[1，2]配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45μm滤膜过滤后上机。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证
066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。
苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。
GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。
GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。
本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。
一、仪器与试剂1.仪器。
高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。
2.试剂。
苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。
二、实验与方法1.色谱条件。
（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。
（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。
高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。
下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。
一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。
主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。
二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。
然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。
2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。
可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。
3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。
4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。
四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。
2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。
这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。
3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。
4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠
将 上 述 混 合 标 准 溶 液 进 行 测 定，
根据待测物质峰面积和浓度关系绘图，
得到标准曲线回归方程。苯甲酸、山
梨酸和糖精钠在 0.2 ～ 200 mg/L 范围
内线性关系良好，苯甲酸在 0.25 mg/L
时，线性方式 y=31 991.7x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.006 g/kg；山
1.2.1 配制混合标准溶液 精密称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠 标准物质各 4.0 mL 于 20 mL 容量瓶中，
用水配制成 200 μg/mL 的标准混合储备 液，再用水稀释成 100 μg/mL、50 μg/ mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL、2.5 μg/ mL、0.5 μg/mL、0.2 μg/mL 的 系 列 标 准工作液，由低浓度到高浓度依次进样。
梨酸在 0.20 mg/L 时，线性方式 y=60
861.2x，相关系数 r=0.999 8，检出限
为 0.005 g/kg； 糖 精 钠 在 0.50 mg/L
时，线性方式 y=21521.4x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.012 5 g/kg。
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1.2.2 样品处理 称 取 2.0 g 果 酱 样 品 于 50 mL 比 色 管 中， 加 30 mL 水 和 0.5 mol/L 的 氢氧化钠溶液 1.0 mL，摇匀后置于超 声清洗器中提取 15 ～ 20 min，直至 被测组分完全溶解。然后再添加 0.42 mol/L 的硫酸锌溶液和 0.5 mol/L 的氢 氧化铵溶液各 1.5 mL，加水定容到 50 mL 后摇匀，静置，然后用双层滤纸过 滤上层清液，将最初过滤的 5 mL 液体 丢弃，并采用 0.45 μm 的滤膜对滤液 再次过滤，进样 5 μL 开展色谱分析。 如果液体样品不包含蛋白质，则不需 要蛋白质沉淀过程，直接取样后用水 定容，超声提取后过滤进样即可；如 果是固体样品，则需要将固体样品研 磨粉碎，然后进行样品处理 [2]。 1.2.3 检测 精确称取处理液和混合标准溶液 各 20 μL 放置于高效液相色谱仪中进 行分离，以标准溶液的固定峰值为依 据，根据峰面积计算样液中的被测物 质含量，计算公式为：，其中 X 表示 样 品 中 待 测 组 分 的 含 量， 单 位 为 g/ kg；C 表示由标准曲线得出的样液中 待测物质的量浓度，单位为 mg/mL， V 表示样品定容的体积，单位 mL；m 表示样品的质量，单位为 g。
高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸_山梨酸和糖精钠方法的探讨
[作者简介] 吴燕(1976-),女,大学本科,主管技师,主要从事食品理化检验研究。
【化学测定方法】高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠方法的探讨吴 燕(上海市疾病预防控制中心,上海 200336)[摘要] 目的:探讨高效液相色谱同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法。
方法:样品经去蛋白、调节酸碱度、超声提取、过滤等处理,采用HP LC测定。
结果:方法的检出限均为110mg/kg;相对标准偏差为0184%～1120%;平均回收率为9211%～9719%。
结论:方法准确可靠、简便快速、易于掌握、便于推广。
[关键词] 高效液相色谱;食品;苯甲酸;山梨酸;糖精钠[中图分类号] O65717+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2007)03-0465-03S i m ult aneous determ i n a ti on of benzo i c ac i d,sorb i c ac i d and s acchar i n sod i u m s a lt i n foodsW u Yan(ShanghaiMunici pal Center f or D isease Contr ol and Preventi on,Shanghai200336,China)[Abstract] O bjecti ve:To discuss a method of detecti on for benzoic acid,s orbic acid and saccharin s odiu m salt in f oods by HP LC1M ethods:food sa mp les were dep r oteinized,adjusted pH,ultras onic extracted,filtered and analyzed by HP LC1Results: The detecti on li m its were110mg/kg1The relative standard deviati on range of sa mp les added standard substance was0184%～1120%1The average recovery rate was9211%～9719%1Conclusi on:The method is si m p le,rap id,reliable and accurate1So that, it is suitable for wide-range app licati on1[Key words] H igh perf or mance liquid chr o mat ography;Food;Benzoic acid;Sorbic acid;Saccharin s odiu m salt 目前,我国批准使用的食品添加剂中,苯甲酸和山梨酸作为防腐剂,糖精钠作为甜味剂被广泛使用于食品中。
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳分离比实验报告姓名：尼玛旦增学号：515110910015 同组成员：高夏鑫一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪（LC-20T，日本岛津公司）；LCsolution Multi-PDA色谱工作站（日本岛津公司）；ODs色谱柱（C184.6’250mm,中科院大连化物所）；定量环：20uL；100 ml烧杯若干； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；容量瓶若干；0.45μm有机相滤膜；过滤器；2、试剂：（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加去离子水定容至250 ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加去离子水定容至250 ml。
（4）氨水（1+1）四、实验步骤 :1、样品处理（雪碧）：吸取20-30 ml碳酸溶液超声5 min，用氨水( 1 + 1)调节pH 至近中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
（小桃汽）：吸取20-30mL饮料，经干过滤后，取后滤液，用氨水（1+1）调节至pH至中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法是一种常用的分析方法。
本文将从原理、方法及操作步骤等方面进行详细解析。
首先，液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种基于物质在固定相和移动相的作用下，依据其在两相间分配不同的速度和平衡常数进行分离和测定的方法。
液相色谱法在分析食品中的添加剂，如苯甲酸、山梨酸和糖精钠等方面具有广泛应用。
其次，对于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定，可以通过液相色谱法进行定性和定量分析。
液相色谱法主要分为正相液相色谱法和反相液相色谱法。
正相液相色谱法使用非极性固定相，极性移动相；反相液相色谱法则相反。
由于苯甲酸为非极性物质，山梨酸为极性物质，糖精钠为离子物质，所以在测定食品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠时，一般采用反相液相色谱法。
操作步骤如下：1. 准备样品：将待测食品样品称量并取样，可选择适当的提取方法进行提取。
一般采用乙酸乙酯等有机溶剂进行提取。
2. 进样操作：将提取的样品溶液通过滤膜滤过，除去悬浮物和杂质，得到清晰的样品溶液。
将溶液用微量注射器吸取一定体积后，注入进样器中。
3. 色谱条件设置：选择适当的色谱柱，一般使用反相色谱柱。
设置好流速、柱温和检测波长等参数。
常用的固定相可以是C18、C8等，移动相可以是甲醇和水的混合液。
4. 开始分析：通入移动相以开始分离分析过程。
根据样品中目标物的特性，优化流速、温度等参数，使其尽快分离并得到良好的色谱峰。
5. 数据处理：通过检测波长进行测定，根据标准曲线计算出样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。
总结起来，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法是一种快速、准确的分析方法。
通过选择适当的色谱柱和优化色谱条件，可以对食品中的目标物进行定性和定量分析。
这种方法在食品安全监测和质量控制中具有重要意义。
然而，需要注意的是，为了获得更准确的结果，实验人员还应定期校准仪器，制备标准品并建立标准曲线，以确保测定结果的准确性和可靠性。
高效液相色谱法测定食品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠
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Analysis and Testing 分析检测
1.2 试剂溶液及标准溶液配制
UV 230 nm。
1.2.1 试剂）：吸取 1 mL 氨水至 100 mL 容 量 瓶 中， 用 水 定 容 至 刻 度。 ② 亚 铁 氰 化 钾 溶 液
◎ 高明阳 （北京市工商行政管理局西城分局，北京 100035）
Gao Mingyang (Xicheng Branch of Beijing Municipal Administration for Industry and Commerce，Beijing 100035, China)
摘 要：用高效液相色谱法对食品添加剂苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量进行了测定，并对其加标回收率 及精密度进行分析，以验证实验的可行性。
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法江苏上海液相色谱仪
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法一、简介火腿肠是深受广大消费者欢迎的肉类食品,我国已出台并在2007年6月1日实施《火腿肠》国家标准(GB/T2012-2006)，标准规定了根据原料不同又有“鸡肉肠”、“鱼肉肠”、“牛肉肠”等品种。
为防止食品变质，生产厂家常在火腿肠中加入防腐剂。
我国目前常用食品防腐剂主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐为主。
防腐剂可以抑制和杀灭微生物，但过量和超范围使用会破坏食品中维生素、加重人体肝脏负担并引起毒性反应。
国标GB2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》中规定火腿肠类肉制品食品中苯甲酸不得检出，山梨酸及其钾盐(以山梨酸计)不得超过0.075g/kg。
在日常检测工作中仍可在火腿肠样品中检出苯甲酸和超标加入的山梨酸。
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的测定样品处理方法，在国标GB/T5009. 29 - 2003中苯甲酸、山梨酸测定的液相色谱法中，只规定了饮料和配制酒样品处理方法,其它样品处理没有提及。
火腿肠食品中含高蛋白、高脂肪及淀粉等基质成份较多,并且苯甲酸、山梨酸具有脂溶性的性质决定了样品处理的复杂性。
南京科捷针对火腿肠食品特点，对液相色谱法测定火腿肠中苯甲酸、山梨酸的样品处理方法进行了改进和研究，建立了有效的高效液相色谱法测定火腿肠食品中防腐剂含量的样品处理方法。
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp系统控制器：1台7725i手动进样阀：1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
食品中苯甲酸、山梨酸应用原理及液相色谱分析方法
Ｍ × ×１ ０ ＹＷＧ－ ８４ ｍ ２ ０ ｍ，０ ｍ 不 Ｃ１ ． ｍｘ ５ ｍ １ ｕ ６ 锈钢柱 。 ４２流 动相 ： ． 甲醇 ： 乙酸铵溶 液 （．２ ｏ Ｌ Ｏ０ ｍ ｌ ） ／
（ ：５ 。 ５９ ） ４３ 速 ：ｍ／ ｎ ．流 ｌｌ 。 ｍｉ
４４进样量：０ ｌ ． １ ｕ。 ４５检测器： ． 紫外检测器，３ ｎ ０２ Ｕ Ｓ ２ ０ ｍ，． Ｆ 。 Ａ ５数据处理及结果计算 ５ 根 据保留时 问定 性 ，外标峰 面积法定 ． １ 量； ５ 计算公式 ． ２
分不开。
１ 《 品添 加剂 的使 用卫 生 标 准 》 Ｇ ． 食 ２ （Ｂ ２６ ） ７ ０ 是为提供安全使用食品添加剂所制定的一 种国家标准。通过 Ｇ ７ ０ 我们可 以了解到在 Ｂ２６ ， 我 国允 许使 用的食品添加剂的品种 、使用范 围、 最大使用量 （ 或残留量 ） 等各方面 的要求， 这些数 据是根据食 品使用情况 的实际调查与毒理学试 验结果为依据而制定的。 １ 食 品添加剂是指 为改善食 品的品质和 ． ３ 色、 味， 香、 以及为 防腐和加工工艺的需要而加入 食 品中的化学合成或天然物质。 正 因为食 品添加剂的“ 价廉 物美 ” 一些食 ， 品生产企业 ， 为了较大限度地追求成本控 制以及 外在的产 品质量 ， 超量超范围使用食品添加剂 ， 因而食品质量事故 时有发生 。 ２食品中苯 甲酸 、山梨酸及其盐 的使用情
维普资讯
技 术ｌ 场 ｛ 广】
科 黑江— 投信总 — 龙— —
食品中苯甲 山梨酸应用原理及液相色谱分析方法 酸、
仇 志 杰
（ 山市 高明 区农 业产品质量监督检 验 中心 ， 佛 广东 佛 山 ５ ８ ０ ） ２５０
摘 要： 食品的质量和安全要得到障 ， 必须依靠完善的食品质量监 管体 系， 中， 品的检验方 法是其 中不可缺 少的重要 组成部 分。 其 食 主要 介绍使 用苯 甲酸 、 山梨酸在食品 中的应 用原理及讨论液相 色谱测 定食 品中的苯甲酸、 山梨酸的含量。 关键词 ： 添加剂使用 ； 食品分析 ； 甲酸 ； 苯 山梨酸 “ 民以食为天 ” ，现在人们的生活质量逐渐 提高 ， 品的质量和安全越来越重视。食品的 对食 质量和安全要得到障， 必须依靠完善的食品质量 监管体系 ， 中， 品的检验方法是其 中不可缺 其 食 少 的重要组成部分。 品的质量和安全是否满足 食 人们 的生活需要 ， 需要 由数据说话 ， 因而近年食 品的检测手段在多样性和精确性上都有很大 的 提高 ， 采取最正确、 最经济 、 最快捷的检验方法成 为一线检验人员的追求 。 １食品添加剂的使用情况 １ 现代食品工业产 品的质量取决 于三个 ． １ 因素： 一是原料 的品质 ， 二是加工工艺过程与设 备， 三是食 品添加剂。在这三大因素 中食品添加 剂是最为活跃和积极 的因素。我 国在近 ３ 年来 Ｏ 食 品工业 已得到长足的发展 ， 谁也没有想到今天 南北果蔬 能积聚一起 ， 超级市场的食品品种数量 会如此丰富 ， 这些都与食 品添加剂的开发与应用
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火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法一、简介火腿肠是深受广大消费者欢迎的肉类食品,我国已出台并在2007年6月1日实施《火腿肠》国家标准(GB/T2012-2006)，标准规定了根据原料不同又有“鸡肉肠”、“鱼肉肠”、“牛肉肠”等品种。
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我国目前常用食品防腐剂主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐为主。
防腐剂可以抑制和杀灭微生物，但过量和超范围使用会破坏食品中维生素、加重人体肝脏负担并引起毒性反应。
国标GB2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》中规定火腿肠类肉制品食品中苯甲酸不得检出，山梨酸及其钾盐(以山梨酸计)不得超过0.075g/kg。
在日常检测工作中仍可在火腿肠样品中检出苯甲酸和超标加入的山梨酸。
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的测定样品处理方法，在国标GB/T5009. 29 - 2003中苯甲酸、山梨酸测定的液相色谱法中，只规定了饮料和配制酒样品处理方法,其它样品处理没有提及。
火腿肠食品中含高蛋白、高脂肪及淀粉等基质成份较多,并且苯甲酸、山梨酸具有脂溶性的性质决定了样品处理的复杂性。
南京科捷针对火腿肠食品特点，对液相色谱法测定火腿肠中苯甲酸、山梨酸的样品处理方法进行了改进和研究，建立了有效的高效液相色谱法测定火腿肠食品中防腐剂含量的样品处理方法。
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LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话，可实时对仪器的运行状态进行监控，并可对潜在和已出现的故障做出判断，同时提供在线解决方案。
该仪器也全面实现了远程的准无人操作，大大提高了仪器的使用效率，同时通过高精度的AS1000自动进样系统，实现自动化进样，最大程度抑制了样品的交叉污染，提供样品分析精度。
LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能，记录维护信息和操作记录，符合GLP/GMP要求；系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。
卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器；精密加工的双透镜流通池，控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率，确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。
VI2010工作站符合多种法规要求。
可靠的结果——满足客户对结果的准确要求与进口仪器做对比试验,分析结果具有高度的一致性。
简便的操作——便于客户对软件的熟练操作软件采用多窗口模式，操作方便。
精美的外观——满足客户对仪器的视觉要求外形精美，带来视觉上的享受。
技术指标LC-10Tvp高压恒流输液泵输液方式微体积串联双柱塞最大输液压力0～9999Psi流量设定范围0.001～9.999ml/min （以0.001ml/min步长调节流量）流量设定值误差≤0.5%流量稳定性误差≤0.2%RSD压力脉动小于15Psi （流量1mL/min，压力600～1600Psi 。
）泵密封性压力为5400Psi，时间为10min，压降小于400Psi 。
时间程序功能有尺寸W260×H130×D420mm重量11kg使用环境温度范围4～40℃SPD-10Tvp紫外可见可变波长检测器波长范围190nm～700nm波长示值误差≤±1nm波长重复性误差≤±0.1nm动态噪声≤±0.75×10-5AU （甲醇，1ml/min，254nm，20℃。
）静态噪音≤±0.5×10-5AU （空池，响应时间1秒，20℃。
）动态基线漂移≤±1×10-4AU/h （甲醇，1ml/min，254nm，20℃。
）静态基线漂移≤0.5×10-4 （空池，响应时间1秒，20℃。
）线性范围≥104最小检测浓度≤1×10-9g/mL （萘/甲醇溶液）定性重复性RSD6≤0.1%定量重复性RSD6≤0.5%光谱带宽6nm流通池体积8μL光程10mm时间程序功能有尺寸W260×H130×D420mm重量11kg使用环境温度范围4～40℃四、火腿肠中苯甲酸和山梨酸的测定的详细检测方法。
1.1 仪器与试剂LC-10Tvp液相色谱仪SPD-10Tvp紫外检测器ODS C18反相色谱柱HY-4多用样品振荡器0.45μm微孔滤膜甲醇(色谱纯)0.02mol/L乙酸铵溶液20目海砂10g/L氢氧化钠溶液,100g/L亚铁氰化钾溶液；200g/L乙酸锌溶液；苯甲酸、山梨酸标准液1.2 液相色谱条件流动相:甲醇+乙酸铵溶液(0.02mol/L)=5+95流速：1.0ml/min柱温：室温紫外检测波长：230nm1.3 样品处理与测定将火腿肠样品用组织捣碎机均质后，称取5.0g于具塞三角瓶中,加入2～5g 20目海砂，搅拌均匀，加入50.0ml水、1.0ml氢氧化钠溶液，盖塞放于样品振荡器上振荡提取1h，加入9.5ml 亚铁氰化钾溶液、9.5ml乙酸锌溶液,振摇使其充分混匀后,静置1～2h使其沉淀(也可用离心机以3000转/min,离心10min)。
用滤纸初滤去除脂肪和沉淀物，收集初滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液10μl进行HPLC测定。
2 结果2. 1样品提取条件的选择在碱性条件下，苯甲酸与山梨酸形成相应的盐类而易溶于水，故加入氢氧化钠溶液使之形成可溶于水的盐。
用水提取样品中苯甲酸、山梨酸可选用超声波法、振荡法、直接浸泡法。
火腿肠样品在用组织捣碎机均质后，非常黏稠并易结成块状，不能与提取液充分接触，而造成提取效率低。
故在样品中加入海砂，以分散黏稠的样品,使与提取液充分接触。
在样品加入提取液后分别用超声波提取30min、振荡提取1h、直接浸泡过夜(24h)然后过滤,取滤液进行HPLC测定，对这三种样品提取方法的结果进行了比较。
从实验结果分析,直接浸泡和超声波提取方法结果回收率低,不能满足检测方法的要求,只有振荡法回收率达到方法要求。
原因是振荡器提取是通过不断振荡，海砂不断冲击分散黏稠成块的样品，使样品与提取液充分接触混匀，从而提取完全，结果回收率高,故选用振荡提取方式用于本方法的检测。
2. 2 蛋白质和淀粉对分析方法干扰与消除火腿肠样品中含有丰富的蛋白质和部分淀粉,样品在浸泡提取过程中,会含有大量的水溶性蛋白质和淀粉，如果净化不完全，直接过膜进行HPLC分析，将堵塞色谱柱,严重影响色谱柱的使用寿命。
因此火腿肠样品处理的关键是找到一种理想的沉淀剂,尽量排除样品中的油脂、蛋白质、淀粉等,并且不影响待测组分的回收率。
常用食品蛋白沉淀剂有100g/L硫酸铜溶液、100g/L钨酸钠溶液、100g/L亚铁氰化钾与200g/L乙酸锌溶液。
硫酸铜溶液对于蛋白质含量低的样品尚可,而对于火腿肠食品则不理想,经实验发现初滤液混浊不能通过滤膜。
钨酸钠溶液沉淀效果好些,经实验发现初滤液仍有堵塞滤膜的现象。
亚铁氰化钾和乙酸锌溶液作为沉淀剂通过实验发现效果最好,不仅可沉淀蛋白质,还可使淀粉变性沉淀,基本可使提取液澄清,初滤液可顺利通过滤膜,故选用亚铁氰化钾与乙酸锌作为沉淀剂。
2. 3 脂肪对分析方法的干扰与消除提取液所含的脂肪在振荡时可成球状悬浮在上层,并且在加入蛋白沉淀剂后,还可减少脂肪的乳化作用使脂肪与提取液充分分离。
对于脂肪含量很高的样品,可将样品提取液置于沸水浴中15min使脂肪充分熔化,取出冷至室温后,放于. 1℃冰箱中进行冷冻处理,大多数脂肪在冰点处析出,样品提取液中基本不含脂肪，从而消除脂肪对实验方法的干扰。
2. 4 标准曲线的制备分别配制0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20mg/ml浓度的苯甲酸、山梨酸标准溶液进行分析,根据峰面积和浓度关系绘制标准曲线,得到苯甲酸、山梨酸的回归方程。
苯甲酸回归方程: Y = 2.865×106X+2131,r=0. 9996;山梨酸回归程:Y=2.269×106X+2250,r =0. 9994。
标准系列浓度在0. 01～0. 20mg/ml范围内呈良好的线性关系。
苯甲酸、山梨酸检出限(S/N = 3)均为2.0mg/kg。
2. 5 方法精密度和回收率实验结果取已测定含量的火腿肠样品,分别添加高、中、低三种不同浓度的苯甲酸、山梨酸标准液,按本方法进行提取,各进行6次测定,结果见表。
由表1检测结果,方法回收率在90.9% ～95.1%之间,变异系数在1.26%～3.25%之间,符合国家对检测方法的要求。
五结果采用本方法处理火腿肠样品,可有效改变火腿肠样品在均质后黏稠成块的现象,使样品均匀分散在提取液中,达到提高结果回收率的目的。
在碱性条件下加入亚铁氰化钾和乙酸锌可有效沉淀分离样品中含有的蛋白质、脂肪、淀粉等基质,沉淀剂不干扰苯甲酸、山梨酸测定,样品滤液无悬浮物质起到保护色谱柱,延长色谱柱使用寿命作用。
本方法回收率在90. 9%～95. 1%之间, RSD在1. 26% ～3. 25%之间,标准系列浓度在0. 01～0. 20mg/ml范围内呈良好的线性关系,完全满足方法分析的要求,适宜在日常检测工作中应用。