华蟾素诱导人膀胱癌细胞株T24凋亡研究
蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
（ ｉ ｂ ｆ ｉｉ Ｂ ｆ ｉ ａｄＣｎ ｂｆｇ ）ｉ ｃｎ ｙａ ． Ｃｎ ｕ ｃｎ， ｕａ ｎ ｎ ｉｏｕａｉ ｎｒ ｅｔ ｅｒ ｏ ａ ｌ ｎ ｅ ｓ
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亡信号传递 系统的异常是肿瘤发生 的疗 的一关 键机 制。经典 的凋亡
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Ｔ ｅＦｒ ｌ ｉ ｌ ｄｃｌ ０ｆ ｏ ｈｎ ｒ ｏｇｓＵ ｉ ｒｔ， ｕｅ Ｙｃａ ｇ４ ３ ０ ， ｈｎ ． ｈ ｉｔ ｉ ｃ ｉ ｆ ｆＣ ｉ Ｔ ｅ Ｇｒｅ ｎｖ ｓｙ Ｈ ｂｉ ｉ ｎ ４ ０２ Ｃ ｉａ ｓ Ｃ ｎ ａ Ｍｅ ａ ｃ ｅ ａｈ ｅ ｅｉ ｈ
现代肿瘤 医学
２ １ ４月 ０ ２年
第２ ０卷第 ４期
ＭＯ Ｅ Ｎ Ｏ Ｃ Ｌ Ｇ Ａ ｔ２ １ ， Ｏ ．０， Ｏ ０ Ｄ Ｒ Ｎ Ｏ Ｏ Ｙ，ｐ．０ ２ Ｖ Ｉ２ Ｎ ．４
．６ ８ ５．
蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
曾 欢 ， 兴福 ， 自强 宋 董
Ｒ ｓ ａｃ ｒｇｅｓ ａ ｒｐ ｒｔ ｎ ｎ ｕ ｅ ｕ ｒ ｅｌ ｐ ｐｏ ｉ ｅ ｅ ｒｈ ｐｏ ｒｓｔ ｄ ｐｅ ａａｉ ｓｉｄ ｃ ｄ ｔｍｏ ｌａ ｏ ｔｓ ｏ ｏ ｃ ｓ
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华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡及拓扑异构酶Ⅱ的影响
530中国临床药理学杂志第29卷第7期2013年7月（总第165期）华蟾素注射液对人肝癌HepG －2细胞增殖与凋亡及拓扑异构酶Ⅱ的影响Effects of Cinobufacini injections on the proliferation ，apoptosis and expression of topoisomerase Ⅱof hepatocarcinoma HepG －2cells收稿日期：2012－10－23修回日期：2013－05－03基金项目：国家自然科学基金资助项目（81173615）作者简介：田莉莉（1985－），女，硕士，主要是从事淋巴道转移、中药抗肿瘤基础的研究通信作者：崔晓楠，教授，博士生导师Tel ：（0411）83635963－3209E －mail ：cxn23@田莉莉，高山，崔晓楠（大连医科大学第一附属医院肿瘤科，辽宁大连116011）TIAN Li －li ，GAO Shan ，CUI Xiao －nan（Department of Oncology ，The First Af-filiated Hospital of Dalian Medical Uni-versity ，Dalian 116011，Liaoning Prov-ince ，China ）摘要：目的观察华蟾素注射液对人肝癌HepG －2细胞增殖、凋亡及拓扑异构酶Ⅱ表达的影响。
方法分为对照组与实验组（3个剂量0.10，0.21，0.42μg ·mL －1华蟾素注射液）；用MTT 法观察华蟾素对HepG －2细胞增殖的影响；用流式细胞术法检测华蟾素对HepG －2细胞周期的影响；用逆转录—多聚酶连反应法检测华蟾素对肝癌HepG －2细胞拓扑异构酶Ⅱ（TOPO 酶Ⅱ）的mRNA 水平表达的影响；用蛋白免疫印迹法观察华蟾素对HepG －2细胞中Topo Ⅱ蛋白表达的影响。
结果华蟾素注射液对HepG －2细胞增殖具有抑制作用，呈时间和剂量依赖性；阻滞HepG －2细胞于S 期，可明显下调Topo ⅡmRNA （P ＜0.05）及蛋白的表达（P ＜0.05），均呈剂量依赖性。
蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展摘要：蟾蜍是我国传统中药材，具有镇痛、消炎、麻醉等作用。
近年来研究表明其具有多种抗肿瘤作用，包括诱导细胞凋亡,抑制增殖，促进细胞分化，抑制肿瘤血管形成，逆转耐药及增强免疫的作用。
而近几年来，以研究蟾蜍制剂诱导肿瘤细胞凋亡作用机制最多，本文主要就近几年来蟾蜍制剂:华蟾素、蟾蜍灵及华蟾毒精诱导细胞凋亡作用机制的研究进展做一综述。
关键词：蟾蜍制剂,抗肿瘤作用，细胞凋亡Abstract:Venenum bufonis, as one of the traditional Chinese material medica, has functions in analgesia,eliminating inflammation, anesthesia et al. Recent studies indicated that venenum bufonis has the distinguished anticanceractivity. It could induce apoptosis, inhibit the cell proliferation, promote the cell differentiation, reverse the drug resistance, restrain neovacularization and enhance the immunity system.This years studying the apoptosis-inducing effects is hot. This review mainly summarizes the apoptosis-inducing effects of venenum bufonis and its active components in recent years.Key words:venenum bufonis; antineoplastic ;cell apoptosis蟾蜍是我国传统中药材。
华蟾素通过ROS-MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡
华蟾素通过ROS-MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡华蟾素通过ROS/MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡食管癌是一种高度侵袭性的恶性肿瘤，其发生和发展与多种信号通路的异常激活密切相关。
近年来的研究表明，华蟾素作为一种天然产物，具有抗肿瘤的活性。
本文将重点探讨华蟾素在通过ROS/MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡中的作用机制。
华蟾素（Bufalin）是一种从华蟾科动物的皮肤中提取出来的中草药活性成分，已被证实具有抗癌活性。
研究表明，华蟾素能够通过影响细胞周期、促进细胞凋亡、调节基因表达等多种途径来抑制肿瘤生长。
最近的研究发现，华蟾素通过ROS/MAPK和NF-κB信号通路也起到了抗食管癌的作用。
氧化应激（ROS）是一种细胞内外的氧化代谢产物，在细胞内发挥着重要的调节作用。
适量的ROS能够通过改变细胞信号传导途径来调控细胞生长和凋亡。
由于食管癌细胞的代谢紊乱和缺氧状态，导致了ROS的异常积累。
研究发现，华蟾素能够显著增加食管癌细胞内ROS的水平，进而影响了MAPK信号通路的激活。
MAPK是一种重要的细胞信号传导途径，包括ERK、JNK和p38等下游效应分子。
华蟾素的作用通过增加ROS的水平来激活MAPK信号通路，进而抑制食管癌细胞的增殖和诱导其凋亡。
此外，NF-κB信号通路在多种癌症的发生和发展中起着重要的作用，包括食管癌。
NF-κB是一种转录因子，能够调控多种基因的表达，包括细胞凋亡相关的基因。
而华蟾素能够通过抑制NF-κB的激活来促进食管癌细胞的凋亡。
研究显示，华蟾素能够抑制NF-κB的核转位和DNA结合能力，从而抑制凋亡抑制基因的表达，增加细胞凋亡相关基因Bax和caspase-3的表达，最终促进食管癌细胞的凋亡。
除了ROS/MAPK和NF-κB信号通路外，华蟾素还能通过其他多个信号通路来发挥其抗癌作用。
例如，华蟾素能够抑制食管癌细胞中表达的MDR1 P-gp蛋白，增加化疗药物的敏感性；能够阻断食管癌细胞的线粒体功能，导致线粒体膜电位降低，释放细胞色素c，从而诱导细胞凋亡等。
茶多酚诱导膀胱癌T24细胞株凋亡及上调PTEN表达
茶多酚诱导膀胱癌T24细胞株凋亡及上调PTEN表达【摘要】目的探讨茶多酚抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。
方法采用MTT法和流式细胞术，观察膀胱癌细胞系T24 经不同浓度的茶多酚处理后对细胞生长以及PTEN蛋白表达的影响。
结果茶多酚以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长，加入0、50、100、200、400μg/ml茶多酚的T24 细胞抑制率分别为0%、11.2%、33.4%、36.9%、67.5%。
流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰，癌细胞出现凋亡，凋亡率分别为6.8%、25.1%、28.6%、36.6%、41.1%;同时，随茶多酚作用浓度的增加，出现G1/S阻滞细胞逐渐增多，细胞分裂增殖指数(PI) 降低;而细胞PTEN 蛋白表达水平由(37.66±0.49)逐渐增加至(163.92±3.36)(P< 0.01)。
结论茶多酚对T24细胞生长具有抑制作用，其机制可能是通过上调PTEN 蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。
PTEN蛋白表达水平的上调可能具有逆转细胞恶性生物学行为作用。
【关键词】茶多酚膀胱癌凋亡 PTEN 蛋白【Abstract】Objective To explore the molecular mechanism of inhibition effect of tea polyphenols on the growth of bladder carcinoma cell lines. Methods MTT assay and flow cytometry(FCM) analysis were applied to investigate theeffects of TP on the cellular growth, proliferation cycle, apoptosis, and the expression of PTEN in bladder carcinoma cell lines. Results To inhibited the growth and inducted apoptosis of T24 cells in a dose-dependent manner, under the dosages of 0μg·ml１、50μg·ml１、100μg·ml１、200μg·ml １ and 400μg·ml１ average inhibitory rate were 0%、11.2%、33.4%、36.9% and 67.5%, and hypodiploid peaks on FCM histogram. Apoptosis rate were 6.8%、25.1%、28.6%、36.6%、41.1%;Moreover, the cell cycle could be arrested at G1/S checkpoint, also made G1 phase cell markedly increasing and the cell proliferating index (Pl) also decreased. At the same time, the expression of PTEN increased from 37.66 ±0.49 to 163.92 ±3.36(P<0.01) with TP treatment. Conclusion TP has the inhibitory effects on the cellular growth, and the mechanism may be associated with influence in the cell cycle and induction of apoptosis in T24 cell lines. The cell cycle and apoptosis are associated with TP-induced increase of PTEN protein level in the tumor cell lines. At the same time, the up-regulation of the PTEN 's expression by TP also has a possible reversing effects on malignant tumor cells .【Key Words】 Tea polyphenols Carcinoma of bladder Apoptosis PTEN茶多酚(TP) 是茶叶中最具有抗肿瘤活性的酚类及其衍生物为主的酚类化合物。
蟾毒灵诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展
【 ｂｔ ｃ】ｈ ｅ ａｉ ｆｉ ｉ ｕｉ ｐｐ ｓ ｍｒ ｅｓｓｕ ｍ ｒｅ ｉａｉｅｒ ｅｏｏ－ Ａ ｓ ａｔＴｅ ｃ ｎ ｍ ｏｂ ａｎ ｎ ｃ ｇ ｏ ｔ ｉｏ ｔ ｏ ｃｌｉｓｍ ａｚ ｉ ｔｓ ｒｃ ｏ ｔ ｌｗ ｒ ｍ ｈ ｓ ｆ ｕ ｌ ｄ ｎ ａ ｏ ｓ ｕ ｌ ｆ ｉ ｄ ｎ ｈ ｔｌ ｆｍ ｈ ｆｌ
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【 指示性摘 要】 本文从蟾毒灵的药物作用靶点 、 对信号通路 的改变、 对相关细胞凋亡的机制研究进展 。
【 关键词】 蟾毒灵 ； ； 肿瘤 细胞凋亡 ； 信号转导 ； 进展 【 中图分类号】 ７０５ ． Ｒ ３．２ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】６２ ４９ 一（ ０ ）１ ０２ — ４ １７ — ９２ ２ ９ Ｏ — １６ ０ ０
检测蟾毒灵诱导人单 核 白血 病细胞 Ｔ ＨＰ一１ 人成淋 巴 白血 、 病 细胞 ＭＯ Ｔ一３以及结肠腺癌 细胞 Ｃ Ｌ ３ ０ Ｍ 凋亡发生 Ｌ Ｏ Ｏ２ Ｄ
华蟾素通过抑制谷胱甘肽合成酶表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制研究
㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(Ｎｏ.８２２０４６９３)ꎻ滨州医学院高层次人才科研启动基金项目(Ｎｏ.ＢＹ２０２０ＫＹＱＤ１３)作者简介:兀琦ꎬ女ꎬ硕士ꎬ研究方向:中药药理学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｑｉ０９０５２０２１＠１６３.ｃｏｍ通信作者:张加余ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ研究方向:中药质量控制及体内代谢ꎬＴｅｌ:０５３５－６９１３７１３ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｈａｎｇｊｉａｙｕ０６１５＠１６３.ｃｏｍꎻ杨爱琳ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向:中药药理学ꎬＴｅｌ:０５３５－６９１３７１９ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇａｉｌｉｎ０４１８＠１６３.ｃｏｍ华蟾素通过抑制谷胱甘肽合成酶表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制研究兀琦ꎬ杨静依ꎬ陈启梅ꎬ王安美ꎬ孙艺轩ꎬ张加余ꎬ杨爱琳(滨州医学院药学院ꎬ山东烟台２６４００３)摘要:目的㊀研究华蟾素(ｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ)通过抑制谷胱甘肽合成酶(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅꎬＧＳＳ)表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制ꎮ方法㊀不同浓度华蟾素(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)分别与铁螯合剂(ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅꎬＤＦＯ)５０μｍｏｌ Ｌ－１或还原型谷胱甘肽(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅꎬＧＳＨ)５ｍｍｏｌ Ｌ－１联合处理肝癌细胞４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活性ꎮ采用活性氧(ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓꎬＲＯＳ)㊁丙二醛(ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅꎬＭＤＡ)和ＧＳＨ检测试剂盒检测华蟾素(８μｇ ｍＬ－１)干预后肿瘤细胞内ＲＯＳ㊁ＭＤＡ和ＧＳＨ含量ꎮ通过实时荧光定量ＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测华蟾素处理对肝癌细胞ＧＳＳ表达的影响ꎮ并采用ＲＮＡ干扰技术探究在肝癌细胞中ＧＳＳ对ＧＳＨ含量及肝癌细胞增殖的影响ꎮ结果㊀与单独使用华蟾素相比ꎬ铁螯合剂ＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ与对照组相比ꎬ华蟾素干预组能够增加肿瘤细胞内的ＲＯＳ和ＭＤＡ含量ꎬ降低ＧＳＨ含量ꎮ同时ꎬ研究显示ＧＳＨ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ深入机制研究发现ꎬ华蟾素能够抑制ＧＳＳ蛋白表达ꎮＲＮＡ干扰实验的结果表明ꎬ下调ＧＳＳ蛋白表达能够降低ＧＳＨ水平ꎮ敲低ＧＳＳ能够削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎬ且敲低ＧＳＳ能够在一定程度上抑制肝癌细胞的生长ꎬ并增强华蟾素的增殖抑制作用ꎮ结论㊀华蟾素能够诱导肝癌细胞发生铁死亡ꎬ其机制与干预ＧＳＳ水平有关ꎮ该研究为华蟾素临床应用提供理论基础ꎬ并对中药抗肿瘤新药开发起到积极的推动作用ꎮ关键词:华蟾素ꎻ肝癌ꎻ铁死亡ꎻ谷胱甘肽合成酶中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０３－０２１４－００７ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０３.００２ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＷＵＱｉꎬＹＡＮＧＪｉｎｇｙｉꎬＣＨＥＮＱｉｍｅｉꎬＷＡＮＧＡｎｍｅｉꎬＳＵＮＹｉｘｕａｎꎬＺＨＡＮＧＪｉａｙｕꎬＹＡＮＧＡｉｌｉｎ(ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＢｉｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＹａｎｔａｉ２６４００３ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｉｎｈｉｂ￣ｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ(ＧＳＳ).Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ(０ꎬ２ꎬ４ꎬ６ꎬ８μｇ ｍＬ－１)ｏｒｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ(ＤＦＯ)５０μｍｏｌ Ｌ－１ꎬｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ(ＧＳＨ)５ｍｍｏｌ Ｌ－１ｆｏｒ４８ｈꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＣＣＫ－８ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ.Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ(ＲＯＳ)ꎬｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ(ＭＤＡ)ａｎｄＧＳＨａｓｓａｙｋｉｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＲＯＳꎬＭＤＡꎬａｎｄＧＳＨｌｅｖｅｌｓｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ(８μｇ ｍＬ－１).Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎＧＳＳｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＧＳＳｏｎＧＳＨｌｅｖｅｌａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔａｌｏｎｅꎬｔｈｅＤＦＯｃｏｕｌｄｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ.ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅＲＯＳａｎｄＭＤＡｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｔｈｅＧＳＨｌｅｖｅｌｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ.ＡｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｅｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＧＳＨｃｏｕｌｄｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.ＦｕｒｔｈｅｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＳＳｐｒｏｔｅｉｎ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＲＮＡｉｎ￣ｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｅｐｌｅｔｉｏｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅＧＳＨｌｅｖｅｌꎬｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｉｍｐａｉｒｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤＦＯｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎬａｎｄｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓꎬａｎｄｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＣｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｃａｎｉｎｄｕｃｅｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓꎬａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＧＳＳｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ.Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎬａｎｄｐｌａｙｓａｎａｃｔｉｖｅｒｏｌｅｉｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎻＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａꎻＦｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓꎻＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ㊀㊀癌症是导致人类死亡的主要原因之一ꎬ据２０２０年ＧＬＯＢＯＣＡＮ项目研究表明肝癌的死亡率位居世界第三ꎬ占癌症总死亡率的８.３％[１]ꎮ肝细胞癌(ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａꎬＨＣＣ)是原发性肝癌最常见的一种类型ꎮ早期发现可通过手术切除㊁射频消融术㊁肝移植等方法治疗ꎬ然而大多数肝癌患者确诊时已为中晚期[２]ꎮ截至目前ꎬ化疗依旧是晚期肝癌治疗的主要方法ꎬ但在临床治疗中ꎬ化疗往往会引起一系列不良反应ꎬ例如肝功能异常㊁高血压㊁腹泻等ꎮ因此迫切需要开发新的有效㊁低毒性抗肝癌药物ꎮ中医药有着悠久的历史ꎬ近年来在抗肿瘤领域引起广泛关注ꎮ中医药能够增强化疗疗效ꎬ提高生存期ꎮ华蟾素是从蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍(ＢｕｆｏＢｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓＣａｎｔｏｒ)蟾蜍干皮中提取所得ꎬ其主要活性成分为蟾蜍二烯内酯㊁生物碱和肽类[３]ꎮ华蟾素胶囊㊁华蟾素注射液等广泛应用于临床肝癌的治疗[４－５]ꎮ临床研究表明ꎬ华蟾素联合化疗药物能够显著提高晚期癌症患者药物疗效和生活质量[６]ꎮ另外ꎬ有研究表明华蟾素能够通过抑制细胞增殖㊁诱导细胞凋亡㊁抑制上皮间充质转化和抑制肿瘤血管生成等多方面机制发挥抗肿瘤功效[７]ꎮ铁死亡是由于失去对膜脂质过氧化的控制而导致的细胞死亡的形式ꎬ其发生过程中伴随铁依赖性脂质累积㊁谷胱甘肽过氧化物酶４(ＧＰＸ４)功能异常㊁活性氧(ＲＯＳ)升高和还原型谷胱甘肽(ＧＳＨ)含量下降[８－９]ꎮＧＳＨ是人体内重要的抗氧化剂ꎬ能够清除活性氧ꎮ此外ꎬ有研究表明ＧＳＨ合成障碍导致脂质活性氧累积ꎬ导致铁死亡发生[１０]ꎮＧＳＳ催化λ－谷氨酰半胱氨酸与甘氨酸反应生成还原性ＧＳＨꎬ不受ＧＳＨ反馈抑制的调节[１１]ꎮ另有资料显示ꎬ在肝癌细胞中ꎬ核糖核苷酸还原酶Ｍ２肽(ＲＲＭ２)依赖于ＧＳＳ刺激ＧＳＨ合成ꎬ从而抑制铁死亡[１２]ꎬ且有研究表明通过药物诱导铁死亡为目前肿瘤治疗的新策略及研究热点[１３]ꎮ关于华蟾素能否诱导肝癌细胞发生铁死亡及作用机制目前鲜有报道ꎬ本研究从铁死亡角度探讨华蟾素抑制肝癌细胞生长的机制ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验药物㊀华蟾素胶囊(批号:ＯＤ０４)来自于陕西东泰制药有限公司ꎮ１.２㊀细胞系㊀人肝癌ＨｅｐＧ２细胞(ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ)ꎮ１.３㊀试剂㊀ＤＭＥＭ基础培养基㊁胎牛血清(ＦＢＳ)㊁青霉素－链霉素混合液和０.２５％的胰蛋白酶(美国康宁公司)ꎻＣＣＫ－８细胞活性检测试剂㊁还原型谷胱甘肽(批号:ＢＮ２７００５ꎬ北京百瑞极生物科技有限公司)ꎻ铁螯合剂(ＤＦＯꎬ批号:Ｄ９５３３ꎬＳｉｇｍａ公司)ꎻＭＤＡ检测试剂盒㊁ＧＳＨ和氧化型谷胱甘肽(ＧＳＳＧ)检测试剂盒㊁ＲＯＳ检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)ꎻＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)ꎻＧＳＳ(批号:ｓｃ－１６６８８２)和β－ａｃｔｉｎ(批号:ｓｃ－４７７７８)(美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司)ꎻＨＲＰ标记的羊抗鼠二抗(美国ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司)ꎮ１.４㊀仪器㊀ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸＭ２型多功能酶标仪(美国ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ公司)ꎻＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６型实时荧光定量ＰＣＲ(德国罗氏公司)ꎻＤＹＹ－６Ｄ电泳仪电源(北京六一生物科技有限公司)ꎻＣ６００多功能荧光化学发光成像仪(ＡｚｕｒｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司)ꎻＴＵＳ－２００Ｐ震荡型恒温金属浴(上海恒科有限公司)ꎮ１.５㊀方法㊀１.５.１㊀细胞培养与细胞活性检测㊀将细胞培养在含８９％ＤＭＥＭ基础培养基㊁１０％ＦＢＳ和１％的青霉素－链霉素的完全培养基中ꎬ放入含５％ＣＯ２的３７ħ恒温培养箱中进行培养ꎮ通过细胞活性检测实验研究华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖的影响ꎮ首先ꎬ将ＨｅｐＧ２细胞(３.５ˑ１０３个/孔)铺于９６孔板中ꎬ２４ｈ后ꎬ吸出上清ꎬ将细胞与华蟾素药液０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１单独或者分别与ＤＦＯ５０μｍｏｌ Ｌ－１㊁ＧＳＨ５ｍｍｏｌ Ｌ－１联合处理４８ｈꎮ之后ꎬ吸出上清ꎬ每孔加入１００μＬ１０％ＣＣＫ－８工作液ꎬ将培养板放入培养箱敷育１ｈ后用酶标仪在４５０ｎｍ波长下进行检测ꎮ１.５.２㊀细胞ＭＤＡ含量检测㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ细胞样品处理方法:用胰蛋白酶消化后ꎬ加入１ｍＬＤＭＥＭ完全培养液吹打收集细胞ꎬ１０００ˑｇ离心５ｍｉｎꎮ移除上清ꎬ将细胞用１ｍＬＰＢＳ清洗ꎬ再次离心５ｍｉｎꎬ移除上清ꎬ加入７０μＬＰＢＳꎮ细胞样品采用反复冻融的方法进行裂解细胞ꎬ将其放入－８０ħ冷冻ꎬ１０ｍｉｎ后取出冷冻的细胞放置于３７ħ金属浴融化５ｍｉｎꎮ反复冻融４次后ꎬ收集上清ꎮ之后根据ＭＤＡ检测试剂盒说明书对细胞样品进行检测ꎮＭＤＡ含量通过样品的蛋白浓度归一化ꎬ蛋白浓度由ＢＣＡ蛋白测定试剂盒测定ꎮ１.５.３㊀细胞内ＧＳＨ含量检测㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ之后根据试剂盒说明书对细胞样品进行处理检测ꎮＧＳＨ含量通过细胞数量进行归一化ꎮ１.５.４㊀细胞内ＲＯＳ水平测定㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ之后收集细胞ꎬ悬浮于稀释好的ＤＣＦＨ－ＤＡ(１ʒ１０００)中ꎮ放置于３７ħ培养箱中避光敷育２０ｍｉｎꎬ并每间隔５ｍｉｎ颠倒混匀一下ꎬ使探针与细胞充分接触ꎮ敷育结束后ꎬ用无血清ＤＭＥＭ基础培养基洗涤细胞３次ꎬ以充分去除未进入细胞内的探针ꎮ最后将细胞悬浮于２００μＬＰＢＳ中ꎬ在３０ｍｉｎ内进行流式细胞仪上机检测ꎮ采用ＦｌｏｗＪｏ软件分析荧光强度ꎮ１.５.５㊀实时荧光定量ＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)㊀将肝癌细胞铺于６ｃｍ皿中ꎬ待密度达到８５％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素药物浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ使用Ｅ.Ｚ.Ｎ.Ａ. ＴｏｔａｌＲＮＡＫｉｔＩ(ＯＭＥＧＡ)根据试剂盒说明书进行总ＲＮＡ抽提ꎮ使用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度计测定ＲＮＡ浓度ꎮ使用ＴａｋａｒａＰｒｉ￣ｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＲｅａｇｅｎｔＫｉｔ进行ｃＤＮＡ逆转录ꎮ以下引物用于ＱＲＴ－ＰＣＲ:Ｈｕｍａｎａｃｔｉｎ(Ｆｏｒｗａｒｄ):５ᶄ－ＧＧＧＡＣＣＴＧＡＣＴ￣ＧＡＣＴＡＣＣＴＣ－３ᶄＨｕｍａｎａｃｔｉｎ(Ｒｅｖｅｒｓｅ):５ᶄ－ＴＣＡＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴ￣ＴＧＣＴＧＡＴ－３ᶄＨｕｍａｎＧＳＳ(Ｆｏｒｗａｒｄ):５ᶄ－ＧＴＡＣＴＣＡＣＴＧＧＡＴ￣ＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡ－３ᶄＨｕｍａｎＧＳＳ(Ｒｅｖｅｒｓｅ):５ᶄ－ＣＧＧＣＴＣＧＡＴＣＴＴ￣ＧＴＣＣＡＴＣＡＧ－３ᶄ１.５.６㊀Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ㊀肝癌细胞用不同浓度的华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁８μｇ ｍＬ－１)处理２４ｈꎮ细胞用预冷的ＰＢＳ洗涤两次ꎬ加入细胞裂解液ꎬ充分裂解后收集细胞裂解物ꎮ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶上分离细胞裂解物ꎬ之后转移到ＰＶＤＦ膜上ꎮ膜在４ħ下用含５％脱脂牛奶的ＴＢＳＴ缓冲液封闭过夜ꎮ第２天ꎬ将膜与特异性一抗(１ʒ１０００)在４ħ下孵育过夜ꎬ将膜用ＴＢＳＴ缓冲液洗涤４０ｍｉｎꎬ然后与ＨＲＰ偶联的二抗(１ʒ２０００)在４ħ下孵育过夜ꎮ最后ꎬ用ＴＢＳＴ缓冲液洗涤４０ｍｉｎ后ꎬ使用ＥＣＬ超敏发光液检进行蛋白检测ꎬ并通过凝胶图像系统(ＡｚｕｒｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＣ６００ꎬ美国)显示条带ꎮ１.５.７㊀ｓｉＲＮＡ转染㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到５０％进行转染ꎮ将Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００５μＬ与ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液２５０μＬ混合在一起ꎬ用枪轻轻吹匀ꎮ将ｓｉＲＮＡ１０μＬ加到ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液２５０μＬ中ꎬ与加有Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００的ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液混合在一起ꎬ室温静置２０ｍｉｎꎮ之后将６孔板中的培养基弃掉ꎬ加入ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液１５００μＬꎬ将含有Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００的ｓｉＲＮＡ溶液５００μＬꎬ补齐至每孔２ｍＬ体系ꎬ放入细胞培养箱中６ｈ后将上清替换为ＤＭＥＭ完全培养基ꎮｓｉＲＮＡ序列如下:ｓｉＮＣ(ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌꎬＮＣ):５ᶄ－ＵＵＣＵＣＣＧＡ￣ＡＣＧＵＧＵＣＡＣＧＵＴＴ－３ᶄꎻｓｉＧＳＳ:５ᶄ－ＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＴＴＴＡ－３ᶄꎮ１.６㊀统计学方法㊀所有数据统计及分析作图采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８ꎮ数据比较采用ｔ检验ꎮＰ<０.０５表明组间差异具有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀华蟾素诱导肝癌细胞发生铁死亡㊀前期通过研究发现华蟾素能够明显抑制肝癌细胞的生长[３]ꎮ为了研究华蟾素抑制肝癌细胞生长的形式ꎬ采用细胞铁螯合剂ＤＦＯ干预不同浓度华蟾素处理的细胞ꎮ结果显示ꎬＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制能力ꎬＨｅｐＧ２细胞用不同浓度华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)或与ＤＦＯ(５０μｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎬ结果见图１ꎮ由此可见ꎬ华蟾素能够通过诱导人肝癌ＨｅｐＧ２细胞发生铁死亡的形式抑制增殖ꎮ图１㊀华蟾素对肝癌细胞铁死亡的影响注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.２㊀华蟾素能够增强肝癌细胞ＲＯＳ和脂质过氧化水平㊀铁死亡的直接表现是诱导细胞内ＲＯＳ累积和脂质过氧化诱导的细胞损伤[１４]ꎮ因此ꎬ首先通过流式细胞术检测人肝癌ＨｅｐＧ２细胞经过华蟾素处理后的ＲＯＳ水平ꎮ用浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１的华蟾素药液处理ＨｅｐＧ２细胞４８ｈ后ꎬ用ＤＣＦＨ－ＤＡ染色并通过流式细胞仪分析结果显示ꎬＨｅｐＧ２细胞经华蟾素处理后荧光强度增强ꎬ说明华蟾素能够诱导ＨｅｐＧ２细胞产生ＲＯＳ(见图２Ａ)ꎮ为了进一步研究华蟾素是否通过铁死亡介导的脂质过氧化诱导细胞发生损伤ꎬ通过检测细胞内ＭＤＡ水平发现ꎬ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ检测ＭＤＡ水平与对照组相比ꎬＨｅｐＧ２细胞内ＭＤＡ水平显著升高(见图２Ｂ)ꎬ暗示细胞脂质过氧化程度和细胞损伤的加重ꎮ图２㊀华蟾素对肝癌细胞活性氧(ＲＯＳ)和丙二醛(ＭＤＡ)的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.３㊀华蟾素通过降低肝癌细胞ＧＳＨ水平抑制细胞增殖㊀前期文献报道ꎬＧＳＨ能够避免细胞发生氧化性损伤ꎬ更重要的是铁死亡途中伴随着ＧＳＨ的损失ꎬ除了ＭＤＡ检测ꎬ铁死亡的脂质过氧化的指标还有ＧＳＨ合成的变化[１０ꎬ１５]ꎮ细胞中存在多个对抗铁死亡的防御途径ꎬ其中最主要的一个是由ＧＰＸ４所介导的ꎬ通过ＧＳＨ特异性催化过氧化脂质来抑制铁死亡的发生[１６]ꎮ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ检测ＧＳＨ水平ꎬ相比空白对照组ꎬ华蟾素干预组ＧＳＨ水平显著降低(见图３Ａ)ꎮ为了进一步探究华蟾素是否通过下调ＧＳＨ水平抑制肿瘤细胞生长ꎬＨｅｐＧ２细胞用不同浓度华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)或与ＧＳＨ(５ｍｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ结果显示ꎬＧＳＨ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用(见图３Ｂ)ꎮ综上ꎬ华蟾素可能通过降低肝癌细胞内的ＧＳＨ水平诱导铁死亡从而表现出抑制肝癌生长的作用ꎮ图３㊀华蟾素对肝癌细胞谷胱甘肽(ＧＳＨ)含量的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.４㊀华蟾素能够抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平㊀ＧＳＳ能够催化λ－谷氨酰半胱氨酸与甘氨酸反应形成ＧＳＨ[１１]ꎮ我们首先检测华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞中的ＧＳＳ水平的影响ꎮ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ采用ＱＲＴ－ＰＣＲ检测ＧＳＳ的ｍＲＮＡ水平ꎮ如图４Ａ所示ꎬ与对照组相比ꎬ华蟾素干预后肝癌细胞ＧＳＳ的ｍＲＮＡ水平降低ꎬ表明华蟾素干预导致ＧＳＳ的转录抑制ꎮ此外ꎬＨｅｐＧ２细胞采用０㊁２㊁４㊁８μｇ ｍＬ－１的华蟾素药液处理２４ｈꎬ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＧＳＳ蛋白水平ꎮ华蟾素给药干预后肝癌细胞中ＧＳＳ蛋白表达减弱(见图４Ｂ)ꎮ图４㊀华蟾素对肝癌细胞中谷胱甘肽合成酶(ＧＳＳ)水平的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ２.５㊀抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平能够降低ＧＳＨ产生㊀接下来ꎬ我们研究在肝癌细胞中ＧＳＳ是否影响ＧＳＨ产生ꎮ用靶向ＧＳＳ(ｓｉＧＳＳ)或阴性对照(ｓｉＮＣ)的ｓｉＲＮＡ转染肝癌ＨｅｐＧ２细胞ꎮ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ￣ｔｉｎｇ检测敲低ＧＳＳ后ＨｅｐＧ２细胞ＧＳＳ蛋白水平的变化ꎮ如图５Ａ所示ꎬ敲低ＧＳＳ能够显著抑制ＨｅｐＧ２细胞ＧＳＳ的蛋白表达ꎮ同时我们对ＨｅｐＧ２细胞敲低ＧＳＳ后其ＧＳＨ含量进行检测ꎬ结果表明敲低ＧＳＳ组与ｓｉＮＣ组相比ꎬ细胞内ＧＳＨ含量降低(见图５Ｂ)ꎮ以上结果表明华蟾素可能通过抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平进而抑制ＧＳＨ的产生ꎮ图５㊀敲低ＧＳＳ对肝癌细胞ＧＳＨ含量的影响㊀注:与阴性对照相比ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.６㊀华蟾素诱导肝癌细胞铁死亡部分通过干预ＧＳＳ实现㊀我们进一步研究华蟾素是否部分通过抑制ＧＳＳ诱导肝癌细胞铁死亡ꎬＨｅｐＧ２细胞(转染ｓｉＮＣ或ｓｉＧＳＳ)用不同浓度华蟾素药液(０㊁０.５㊁１㊁２μｇ ｍＬ－１)或与ＤＦＯ(５０μｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ如图６Ａ所示ꎬ敲低ＧＳＳ会削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎮＨｅｐＧ２细胞(转染ｓｉＮＣ或ｓｉＧＳＳ)用不同浓度华蟾素药液(０㊁０.５㊁１㊁２μｇ ｍＬ－１)处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ如图６Ｂ所示ꎬ敲低ＧＳＳ在一定程度上能够抑制肝癌细胞的生长ꎬ并能够增强华蟾素对肿瘤细胞的增殖抑制作用ꎮ上述结果表明华蟾素诱导肝癌细胞铁死亡可能通过干预ＧＳＳ水平来实现ꎮ３㊀讨论目前ꎬ大多数肝癌患者确诊时已为晚期ꎬ只有１５％患者能够手术治疗ꎮ索拉非尼是ＦＤＡ批准唯一用于肝癌晚期治疗的药物[１７]ꎬ然而其具有较强的毒副作用ꎬ因此迫切需要开发新的抗肝癌药物ꎮ在临床中ꎬ中药应用于癌症治疗历史悠久[１８]ꎮ华蟾素作为中成药已广泛应用于临床治疗肝癌㊁胃癌和胰图６㊀华蟾素部分通过抑制ＧＳＳ诱导肝癌细胞铁死亡㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ腺癌等[１９－２０]ꎮ铁死亡是一种独特的细胞死亡方式ꎮ研究表明通过药物诱导铁死亡能够抑制肿瘤发生发展[２１]ꎬ其发生的主要机制为多不饱和脂肪酸途径诱导脂质过氧化导致ＲＯＳ累积最终造成细胞损伤[２２]ꎮＭＤＡ是脂质过氧化的副产物[２３]ꎬ是铁死亡的标志物ꎮ通过研究发现铁螯合剂ＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎬ我们又进一步检测了铁死亡标志物ＲＯＳ与ＭＤＡꎬ结果显示华蟾素能够诱导肝癌细胞内ＲＯＳ和ＭＤＡ的累积ꎬ可见华蟾素能够诱导肝癌细胞发生铁死亡ꎮＧＳＨ缺失可诱导肿瘤细胞铁死亡[２４]ꎮ研究表明抑制ＧＳＨ能够增加脂质ＲＯＳ含量ꎬ增强ＨＣＣ对铁死亡的敏感性ꎬＧＳＨ合成的变化能够反映铁死亡的脂质过氧化程度[２５]ꎮ细胞中存在多个对抗铁死亡的防御途径ꎬ其中最主要的一个是由ＧＰＸ４所介导的ꎬ通过ＧＳＨ特异性催化过氧化脂质来抑制铁死亡的发生[９]ꎮ此外ꎬ研究证实Ｅｒａｓｔｉｎ能够通过直接降低ＧＳＨ水平ꎬ诱导缺乏ＧＰＸ４的敏感细胞发生铁死亡[２６]ꎮ因此ꎬ抑制ＧＳＨ合成是诱导铁死亡的主要方法ꎮ我们检测华蟾素干预后肝癌细胞内ＧＳＨ含量ꎬ结果发现华蟾素干预后ＧＳＨ水平降低ꎬ且ＧＳＨ能够减弱华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ因此ꎬ华蟾素可能通过抑制ＧＳＨ诱导人肝癌ＨｅｐＧ２细胞发生铁死亡进而表现出抑制肝癌细胞生长的作用ꎮＧＳＳ是ＧＳＨ生物合成的关键酶ꎬ研究表明ＧＳＳ在肿瘤组织中呈现升高趋势[１３]ꎮ此外ꎬ有研究证实抑制ＧＳＳ能够降低肝癌细胞活性ꎬ且ＧＳＨ能够减弱由ＧＳＳ抑制所诱导的细胞增殖抑制作用[２７]ꎮ通过研究发现华蟾素能够抑制ＧＳＳ水平ꎬ且敲低ＧＳＳ能够抑制ＧＳＨ水平ꎮ进一步研究结果显示敲低ＧＳＳ能够削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎬ且敲低ＧＳＳ能够在一定程度上抑制肝癌细胞生长ꎬ并增强华蟾素对肿瘤细胞的增殖抑制作用ꎮ综上ꎬ我们认为华蟾素诱导人肝癌细胞铁死亡可能是通过干预ＧＳＳ来实现的ꎮ本研究有助于阐明华蟾素复杂的抗肝癌作用ꎬ为华蟾素应用于肝癌临床治疗提供新的理论支持ꎮ参考文献:[１]㊀ＳＵＮＧＨꎬＦＥＲＬＡＹＪꎬＳＩＥＧＥＬＲＬꎬｅｔａｌ.ＧｌｏｂａｌＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓ２０２０:ＧＬＯＢＯＣＡＮＥｓｔｉｍａｔｅｓｏｆＩｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄＭｏｒｔａｌｉｔｙＷｏｒｌｄｗｉｄｅｆｏｒ３６Ｃａｎｃｅｒｓｉｎ１８５Ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ[Ｊ].Ｃａ－ＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎꎬ２０２１ꎬ７１(３):２０９－２４９.[２]陈敏山.中国肿瘤整合诊治指南－肝癌(２０２２精简版) [Ｊ].中国肿瘤临床ꎬ２０２２ꎬ４９(１７):８６５－８７３.[３]ＷＵＱꎬＷＡＮＧＳꎬＳＵＮＸꎬｅｔａｌ.ＨｕａＣｈａｎＳｕｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓｗｉｔｈｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｒｅｓｔｒａｉｎｉｎｇＨｅｘｏｋｉｎａｓｅ－２[Ｊ].ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢꎬ２０２２(１４２):１０６１２３. [４]罗展雄ꎬ倪秉强ꎬ郑青平ꎬ等.华蟾素注射液对晚期恶性肿瘤患者Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞的影响[Ｊ].现代肿瘤医学ꎬ２００９ꎬ１７(２):３４０－３４１.[５]朱必胜ꎬ田红岸ꎬ舒诚荣ꎬ等.华蟾素胶囊联合放疗治疗晚期胰腺癌的临床效果观察[Ｊ].中国医药ꎬ２０２０ꎬ１５(５):７４９－７５２.[６]张晨ꎬ宋亚熙ꎬ贵永贤.华蟾素胶囊联合化疗干预晚期肺癌的价值[Ｊ].实用中医内科杂志ꎬ２０２２ꎬ３６(１):１０２－１０４.[７]ＣＨＥＮＧＣＳꎬＷＡＮＧＪＱꎬＣＨＥＮＪꎬｅｔａｌ.Ｎｅｗｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｓｐｅｃｔｓｏｆｓｔｅｒｏｉｄａｌｃａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ:ｔｈｅａｎｔｉｃａｎｃｅｒｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＨｕａｃｈａｎｓｕａｎｄｉｔｓｍａｉｎａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔＢｕｆａｌｉｎ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＩｎｔꎬ２０１９(１９):９２.[８]ＳＵＹＷꎬＺＨＡＯＢꎬＺＨＯＵＬＦꎬｅｔａｌ.Ｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓꎬａｎｏｖｅｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｓ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔꎬ２０２０(４８３):１２７－１３６.[９]杨凤娟ꎬ谭宁ꎬ张天禹ꎬ等.谷胱甘肽在肿瘤细胞发生铁死亡过程中的作用研究[Ｊ].世界华人消化杂志ꎬ２０２１ꎬ２９(１５):９０１－９０７.[１０]陈意ꎬ温海滨ꎬ谭宁ꎬ等.ＳｙｓｔｅｍＸｃ－在肿瘤中的调控研究进展[Ｊ].生命的化学ꎬ２０２２ꎬ４２(７):１３４４－１３５６. [１１]ＢＡＮＳＡＬＡꎬＳＩＭＯＮＭＣ.Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＪＣｅｌｌＢｉｏｌꎬ２０１８ꎬ２１７(７):２２９１－２２９８.[１２]ＣＨＥＮＰꎬＷＡＮＧＬꎬＳＵＮＳꎬｅｔａｌ.Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇｓｕｇｇｅｓｔｓｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅａｓａｎａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｔａｒｇｅｔｏｆｐｏｌｙｄａｔｉｎｕｓｉｎｇｈｕｍａｎｐｒｏｔｅｏｍｅｃｈｉｐ[Ｊ].ＩｎｔＪＢｉｏｌＭａｃｒｏｍｏｌꎬ２０２０(１６１):１２３０－１２３９.[１３]全菲ꎬ杨勇.靶向铁死亡的癌症疗法[Ｊ].药学研究ꎬ２０２０ꎬ３９(６):３１１－３１６.[１４]田吴爱ꎬ陈乃清ꎬ黄丽华ꎬ等.益母草碱激活ｐ６２/Ｎｒｆ２/ＨＯ－１信号通路抑制肾小管上皮细胞铁死亡的作用机制[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２３ꎬ４８(８):２１７６－２１８３.[１５]李艳纯ꎬ周怡ꎬ王鑫ꎬ等.二氢青蒿素通过诱导铁死亡抑制肝癌细胞生长[Ｊ].中国生物化学与分子生物学报ꎬ２０１９ꎬ３５(１２):１３６１－１３６６.[１６]ＣＯＮＣＨＥＣꎬＦＩＮＫＥＬＭＥＩＥＲＦꎬＰＥŠＩＣ'Ｍꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｂｉｎｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｗｉｔｈＭＤＳＣｂｌｏｃｋａｄｅｒｅｎｄｅｒｓｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｕｒｓａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｅｓｉｎｌｉｖｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｉｍｍｕｎｅｃｈｅｃｋ￣ｐｏｉｎｔｂｌｏｃｋａｄｅ[Ｊ].Ｇｕｔꎬ２０２３(７２):１７７４－１７８２.[１７]ＫＩＭＤＷꎬＴＡＬＡＴＩＣꎬＫＩＭＲ.Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ(ＨＣＣ):ｂｅｙｏｎｄｓｏｒａｆｅｎｉｂ－ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＪＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＯｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ８(２):２５６－２６５.[１８]ＬＵＯＨꎬＶＯＮＧＣＴꎬＣＨＥＮＨＢꎬｅｔａｌ.Ｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｃｏｍｐｏｕｎｄｓ:ｓｈｉｎｉｎｇｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ[Ｊ].ＣｈｉｎＭｅｄ－Ｕｋꎬ２０１９ꎬ１４(１):４８.[１９]ＮＩＴＹꎬＷＡＮＧＨＢꎬＬＩＤꎬｅｔａｌ.ＨｕａｃｈａｎｓｕＣａｐｓｕｌｅｉｎ￣ｈｉｂｉｔｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａＡｋｔ/ｍＴＯＲｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒꎬ２０１９(１１８):１０９２４１.[２０]ＹＡＮＧＴꎬＳＨＩＲＬꎬＣＨＡＮＧＬꎬｅｔａｌ.ＨｕａｃｈａｎｓｕｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｈｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＦａｓ/ＦａｓｌａｎｄＴＮＦ－ａｌｐｈａ/ＴＮＦＲ１ｐａｔｈｗａｙｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃＲｅｓꎬ２０１５ꎬ３４(１):２１.[２１]徐文慧ꎬ李沧海ꎬ姜廷良.铁死亡通路与中药干预机制研究进展[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１８ꎬ４３(２０):４０１９－４０２６.[２２]刘鑫玉ꎬ周洋ꎬ周建敏ꎬ等.铁死亡机制及其在肝细胞癌治疗中的应用[Ｊ].生命的化学ꎬ２０２２ꎬ４２(１０):１８８１－１８８７.(下转第２３５页)３㊀讨论ＰＣＩ术和冠状动脉搭桥等都是治疗冠心病的主要手段ꎬ而术后支架内再狭窄也是导致心血管事件发生率升高的主要因素ꎮ血管内膜炎性细胞浸润㊁内皮细胞增生㊁血管平滑肌(ＶＳＭＣ)迁移至内膜等导致内膜增厚ꎬ是管腔狭窄的主导因素ꎬ因而如何抑制血管内膜增厚㊁防止血管发生再狭窄是心血管疾病的研究热点之一[６]ꎮ目前临床上用于ＰＣＩ术的药物主要有雷帕霉素㊁紫杉醇等ꎮ此类药物阻止损伤部位血管平滑肌增殖迁移的同时ꎬ也会干预损伤血管内皮化ꎬ这就会引起血管迟发性再狭窄以及迟发性血栓的生成ꎬ导致ＰＣＩ术后心血管不良事件的发生ꎮ因此寻找安全有效的治疗血管再狭窄药物ꎬ具有重要的临床研究意义ꎮ研究发现[７]大鼠球囊损伤后２４ｈ可引起ＶＳＭＣ增殖㊁迁移ꎬ１４ｄ后内膜增生达到最高峰ꎻ２１ｄ模型对照组内膜呈进行性弥漫性增厚ꎬ其中以平滑肌为主ꎬ中膜细胞排列紊乱ꎬ管腔面积明显缩小ꎮ本研究建立大鼠腹主动脉球囊损伤术模型发现ꎬ假手术组管壁结构完整ꎬ血管内膜呈现良好的连续性ꎬ中膜边缘可见ＶＳＭＣｓ规则排列ꎮ模型对照组大鼠与假手术组相比ꎬ大鼠主动脉血管内皮剥落ꎬ内膜明显增厚ꎬ血管腔变窄ꎮ麝香心痛宁组大鼠腹主动脉内皮剥脱㊁内膜增厚㊁血管平滑肌迁移等病理现象减少ꎬ表明麝香心痛宁可抑制腹主动脉球囊损伤大鼠血管内膜增生ꎮＮＯ㊁ＥＴ－１和ＶＥＧＦ是反映血管内皮功能的因子ꎬＮＯ具有舒张血管平滑肌ꎬ抑制炎症因子和血小板黏附于血管的作用ꎬＥＴ－１可促进血管平滑肌细胞增殖ꎬ并收缩血管ꎬＶＥＧＦ可促进内皮细胞的迁移和增殖[８]ꎮ麝香心痛宁可调节血管内皮相关因子的含量[９]ꎬ从而抑制内膜增生的发展进程ꎮ通过检测大鼠血管炎症相关因子ＩＬ－１β表达发现麝香心痛宁可降低ＩＬ－１β表达ꎮ此外ꎬ麝香心痛宁可抑制Ｒｈｏ/Ｒｏｃｋ通路相关因子的表达ꎮ综上所述ꎬ麝香心痛宁具有保护血管内膜㊁抑制内膜增生的作用ꎬ并具有抗氧化损伤和抗炎作用ꎮ麝香心痛宁抑制血管损伤后内膜增生的药理作用机制可能与其抑制Ｒｈｏ/Ｒｏｃｋ信号通路相关ꎮ参考文献:[１]㊀ＹＯＮＧＦＳꎬＪＵＮＪＬꎬＫＥＺꎬｅｔａｌ.Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｔｏｘ￣ｉｃｉｔｙ:Ａｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｖｉｅｗｏｆｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｉｎｍｕｌｔｉ￣ｐｌｅｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＣｅｌｌＭｅｔａｂꎬ２０２１ꎬ３３(１０):１９１１－１９２５. 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华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡作用及机制探讨
华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡作用及机制探讨史磊;张耀勇;田爱霞【期刊名称】《中西医结合肝病杂志》【年(卷),期】2018(28)4【摘要】目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡作用,并探讨其机制.方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25 μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率.培养48h后荧光定量PCR检测AKT、mTOR、Caspase3、Bax和Bcl-2 mRNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量.结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显著高于对照组(P＜0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显著高于对照组(P＜0.05),实验组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、mTOR、Bcl-2 mRNA表达量与对照组相比均显著降低(P＜0.05),Bax和Caspase-3 mRNA表达量均显著增加(P＜0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致.结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进其凋亡,作用机制可能与通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关.【总页数】5页(P234-237,后插1)【作者】史磊;张耀勇;田爱霞【作者单位】漯河市中心医院(漯河医专一附院)肿瘤内科河南漯河,462000;漯河市中心医院(漯河医专一附院)肿瘤内科河南漯河,462000;湖北文理学院附属襄阳市中心医院消化一科【正文语种】中文【相关文献】1.华蟾毒精抑制Hela细胞增殖作用机制的初步探讨 [J], 王鹏;吴军;杨秀伟;李敏;崔景荣2.华蟾毒精对肾癌细胞增殖的抑制作用 [J], 潘一鸣;张蕾;闫兵;丁雪莹;孙雪芳3.索拉菲尼对不同人肝癌细胞株抑制增殖及促凋亡作用的研究 [J], 赵鹏;陈东;陈伟4.华蟾素抑制肾癌细胞786-O增殖及促凋亡作用研究 [J], 王名琦; 穆素红5.蟾皮华蟾毒配基组分体外对肿瘤及正常细胞株的抑制作用 [J], 陈贵兵;李荣;夏绍友因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
华蟾素抗肿瘤作用的研究进展
华蟾素抗肿瘤作用的研究进展【摘要】华蟾素具有抑制肿瘤细胞增殖增强机体免疫力、镇痛等药理作用。
临床上常与化疗药物联合使用，用于中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等治疗，可提高中晚期癌症患者的生活质量并延长其生存期。
随着医疗技术的发展，华蟾素在药理作用机制和临床应用的研究不断深入，华蟾素在临床抗肿瘤中的应用不断增加，现就近年来华蟾素抗肿瘤的药理作用机制进行综述。
【关键词】华蟾素；抗肿瘤机制华蟾素（cinobufagin）为蟾蜍科动物中华大蟾蜍（Bufobufo gargarizans cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo melanostietus Schneider）等的全皮提取制剂，主要成分蟾毒灵、脂蟾蜍配基等等，具有清热解毒、利水消肿、软坚散结、抗肿瘤、止痛等作用，蟾毒灵可调节线粒体介导信号通路对骨肉瘤细胞抗增值作用，而脂蟾蜍配基则可对糖原合成激酶/细胞因子通路诱导骨肉瘤细胞凋亡[1，2]。
有关药理研究结果，华蟾素具有升高白细胞和明显抑制多种肿瘤细胞的作用，并具安全、有效等优点，广泛应用于多种肿瘤的辅助治疗。
随着对华蟾素不断地深入研究，已证实华蟾素具有提高患者免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、促进肿瘤细胞凋亡、诱导血管收缩、止痛等功能[3]。
1抗肿瘤机制1.1免疫调节作用华蟾素可以显著改善机体的免疫功能，增强肿瘤患者的免疫力。
据报道，华蟾素注入荷瘤裸鼠体内发现T淋巴细胞增多，并且抑制肿瘤的生长，免疫功能提高[4]，同时促进患者的体液免疫功能和细胞免疫功能。
在体内外华蟾素均可抑制胆囊癌QBC939细胞的生长，其机制与TNF-α、IL-6有关[5]。
1.2作用于蛋白激酶受体蛋白激酶（protein kinases，PK）。
一类催化蛋白质磷酸化反应的酶，包括蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）、蛋白色氨酸/苏氨酸激酶（protein serine-threonine kinase，PSTK）、蛋白组氨酸激酶（protein histidine kinase，PHK）等。
华蟾素抗肿瘤的机制与研究进展
华蟾素抗肿瘤的机制与研究进展发表时间：2013-02-26T11:40:08.357Z 来源：《医药前沿》2012年第36期供稿作者：冉进军蒲启康耿沐熹[导读] 华蟾素的药品名为华蟾素注射液(Cinobutacini injection，CINO)是我国临床中应用较广的抗肿瘤中药制剂，尤其对原发性肝癌、肺癌、食管癌等具有较好的疗效。
冉进军蒲启康耿沐熹（华西公共卫生学院四川成都 610041）【摘要】华蟾素的药品名为华蟾素注射液(Cinobutacini injection，CINO)是我国临床中应用较广的抗肿瘤中药制剂，尤其对原发性肝癌、肺癌、食管癌等具有较好的疗效。
近年来，中药华蟾素注射液治疗肝癌、肺癌、胰腺癌的I期临床研究已获得阶段成果，初步的实验结果显示，其抗肿瘤活性有效组分可能为其非极性部分。
本文综述了华蟾素抑制肿瘤细胞的机制以及当今其用于各种癌症的研究的进展。
【关键词】华蟾素抗肿瘤机制研究进展【中图分类号】R73-36【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）36-0109-03CINO’s mechanism of antineoplastic and research progress【Abstract】 Cinobufagin drug called cinobufacini injection ( Cinobutacini injection, ) is an antineoplastic which is widely used in clinical in China , especially for primary liver cancer, lung cancer, esophageal cancer, has a good curative effect. Recently, Chinese traditional medicine of cinobufacini injection for the treatment of liver cancer, lung cancer, pancreatic cancer of phase I clinical studies has obtained stage achievement.The preliminary experiments shows that the anti-tumor’s active components maybe probably the non-polar component. In 2005,this project was financed by the American NCI U19,to carry on the treatment of pancreatic cancer in a phase II clinical study.This article reviews the cinobufagin inhibiting tumor cell mechanisms and now being used for a variety of cancer research progress.华蟾素（/01234567010）系传统中药中华大蟾蜍皮的水制剂，其重要成分为吲哚生物碱、还原糖、氨基酸以及蟾蜍毒素、蟾蜍色胺等，具有清热解毒，利水消肿，化瘀溃坚等作用，已列为国家级中药保护品种。
华蟾素对膀胱癌T24细胞株的体外抑制作用(综述)
其他人样本 。 （ ２ ） 被检红细胞 的浓度过高或过低 。 （ ３ ） 忘记在反应体系中加入检测标本或试剂 。 （ ４ ） 未按照 试 剂使 用说 明进 行试 验 。（ ５ ） 离心 步骤 离心 时 间不 足
或 离心 时间超时 。（ ６ ） 对试 验结果 记 录或判读不正 确 。
参 考文 献
［ ５ 】 张绍林． １ 临 床检验【 Ｍ ］ ． 全国中等卫生学校 教材 ， 四川科学技术 出版
社． １ ９ ９ ３ ： １ ５ ４ — １ ５ ５ ．
审稿 ： 周建峰 ． 校对： 马艳 秀
【 临床 医学 】
华蟾素对膀胱癌 Ｔ ２ ４细胞株的体外抑制作用（ 综述）
孙 荣 生 ， 王健 ：
摘要 ： 目的 研究华蟾素对 膀胱癌 Ｔ ２ ４细胞的体外抑制作用 ， 探讨其对膀胱癌 的临床应用价值 。方法 用 ＭＴ Ｙ法测定不 同浓度华蟾素和 配伍丝裂霉 素 Ｃ （ ＭＭＣ ） 作用下 的 Ｔ ２ ４细胞 ２ ４ ｈ 、 ４ ８ ｈ的抑 制作用 ； 用流式细胞术 （ ｌ ｆ ｏ ｗ ｃ ｙ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｅ ｒ ， Ｆ Ｃ Ｍ） 测定不同浓度华蟾素作用 Ｔ ２ ４细胞 ４ ８ ｈ后细胞周 期表现。结果 （ １ ） 华蟾素组 ： ２ ５ 、 ２ ． ５ 、 ０ ． ２ ５ 、 ０ ． ０ ２ ５ 、 ０ ． ０ ０ １ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 华蟾素
中 国城 乡企 业 卫 生 ２ ０ １ ４年 ２月第 １期 （ 总第 １ ５ ９ 期）
有 输血 史 ，或 是否 为骨髓 移植 患 者 ， ６月龄 以下 的婴
பைடு நூலகம்
患者 、 免 疫 缺 陷 患者 ） 。（ ４ ） 移植 患 者 使 用抗 排 异 药
儿其血浆／ 血清不似成人一样存在可预见的抗 Ａ ， 抗Ｂ 抗体 ， 因此只做正定型不做反定型 。
华蟾素抗肿瘤成分及作用机制研究进展
华蟾素抗肿瘤成分及作用机制研究进展华蟾素（Cinobufagin）为蟾蜍科动物中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo-melanostietus Schneider）的全皮经提取加工制成的水溶性成分，具有清热解毒、化瘀溃坚、利水消肿等作用。
临床用于治疗肝癌、胰腺癌、食管鳞癌、肺癌、骨肉瘤等多种恶性肿瘤。
华蟾素主要有蟾毒内酯类、吲哚生物碱类、多肽、胆固醇等成分，具有抗肿瘤、强心升压、镇痛等作用，抗肿瘤作用机制主要包括抑制肿瘤细胞的生长繁殖、诱导凋亡、逆转多药耐药性、抑制肿瘤血管生成、增强机体免疫力、抗炎等。
本文对华蟾素抗肿瘤成分及作用机制等文献整理归纳，以期为华蟾素的合理应用及新剂型的研发提供理论支撑。
1.化学成分华蟾素的化学成分比较繁多，主要含有蟾毒内酯类、吲哚生物碱类、多肽、胆固醇等成分。
研究显示发挥抗肿瘤的主要成分为蟾毒内酯类、吲哚生物碱类、氨基酸等。
1.1 蟾毒内酯类此类物质为强心甾体类化合物，含有蟾毒配基和蟾蜍毒素两大类。
吴喜燕等归纳总结了脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵、日蟾毒他灵、去乙酰华蟾毒他灵、华蟾毒他灵、蟾毒他灵、沙蟾毒精等124 种化合物，本文不再赘述。
韩玲玉等从蟾蜍中首次分离得到3-表- 假蟾毒精（3-epi-ψ-bufarenogin）、3-表- 沙蟾毒精（3-epi-arenobufagin）、12α- 羟基蟾蜍灵、华蟾蜍精-3-辛二酰甲酯、12β- 羟基- 蟾毒灵（12β-hydroxyl-bufalin）、5，7β-二羟基- 脂蟾毒配基（5，7β-dihydroxyl-resib-ufagenin）、3-表- 日蟾毒它灵（3-epi-gamabufotalin）、3-氧代- 沙蟾毒精（3-oxo-arenobufagin）。
对于此类成分研究报道较多，目前认为发挥抗肿瘤有效成分是脂蟾毒配基、蟾毒灵、华蟾毒精等。
其中，蟾毒灵和华蟾毒精作用最强。
华蟾素抗肿瘤作用机制研究进展
中的 Ｂｃｌ－２表达，诱导细胞凋亡；左小东等［１８］研究 结果与此类似，华蟾素作用于胃腺癌 ＭＧＣ－８０３及 人肝癌 ＳＭＭＣ－７７２１细胞同样可以诱导 Ｂｃｌ－２表 达下降。韩仲明等 研 ［１９］ 究发现华蟾素可以增加喉 癌 Ｈｅｐ－２细胞 ｐ５３蛋白的表达，同时抑制 ｃ－ｍｙｃ 和 Ｂｃｌ－２的表达，研究还显示，低浓度的华蟾素促 进喉癌细胞的分化。安德森癌症中心 Ｌｉ等［４］进行 了华蟾素增强肺癌细胞放射敏感性的相关研究，发 现华蟾素可以依赖 ｐ５３增强人肺癌细胞株的放射敏 感性。以上研究结果表明，华蟾素可以通过调控抑 癌蛋白 和 促 癌 蛋 白 的 表 达 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 的 产生。 ２．３ 华蟾素抑制肿瘤组织新生血管的生长
华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞HepG2增殖抑制作用观察及其作用机制研究
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｃ ｉ ｎ ｏ ｂ ｕ ｆ ａ ｇ ｉ ｎ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ
华蟾 素注 射 液 对 人 肝 癌 肿 瘤 细 胞 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 增 殖
抑 制 作 用 观 察 及 其 作 用机 制研 究
张霞 ， 陈迎 平 ， 祁峰
（ 江苏 省盐 城市 第一人 民医 院药剂 科 ， 江苏 盐 城 ２ ２ ４ ０ ０ ６ ）
摘要 ： 目的 探讨 华蟾 素注射 液对人肝癌肿瘤 细胞 Ｈｅ ｐ Ｇ ， 增 殖抑制作 用观察及 其作 用机制研 究。方 法 ＭＩ Ｔ 法
Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍｓ ｏ ｆ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ．Ｍ ｅ ｔ ｈｏ ｄ ｓ ＭＴＹ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍｉ ｒ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ Ｈｅ ｐ Ｇ２ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｔ ｈ ｅ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｌ ｉ ｖ ｅ
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华蟾素通过fasfasl和tnf-alphatnfr1通路抑制膀胱癌的增殖的机制研究
目录中文摘要： (1)ABSTRACT (3)中英文对照缩略词表 (5)前言 (6)第一部分华蟾素对膀胱癌细胞生物学活性的影响 (12)1.材料和仪器 (12)2.试验方法 (14)3.结果分析 (20)4.结论 (23)第二部分：华蟾素影响膀胱癌细胞增殖能力的分子机制研究 (24)1.材料和仪器 (24)2.实验方法 (28)3.结果分析 (36)4.结论 (43)第三部分：华蟾素对膀胱癌的体内试验 (45)1.材料和仪器 (45)2.实验方法 (46)3.结果分析 (47)4.结论 (51)讨论 (52)参考文献 (56)综述： (59)致谢 (96)华蟾素通过Fas/Fasl和TNF-alpha/TNFR1通路抑制膀胱癌的增殖的机制研究中文摘要：背景：华蟾素（huachansu，HCS），是从干的蟾蜍皮中提取出的一类脂溶性的成分，然后经过精制而成。
华蟾素其中包含的蟾蜍苷元和华蟾蜍精这两种成分具有较强的抗癌作用。
华蟾素具备增强免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖活性的作用。
然而，华蟾素对膀胱癌的抑制作用机制至今仍然没有被阐明。
在本篇研究中，我们主要探讨华蟾素在体外和体内的抗肿瘤作用及其作用机制。
方法：通过MTS法检测T24,EJ,RT-4，SV-HUC-1细胞在华蟾素处理之后的细胞活性；通过透射电子显微镜观测经过华蟾素处理之后的膀胱肿瘤细胞形态学的改变；通过流式细胞仪来评估华蟾素诱导细胞凋亡的现象；并通过western blot技术检测华蟾素对于膀胱癌细胞中凋亡相关蛋白Bax, Bcl-2, XIAP,PARP, cleaved-Caspases 3, 8, 9的表达的影响情况。
然后我们评估华蟾素对Fas和Fasl的表达以及TNF / TNFR1和NF -κB通路的激活的影响,而且这些通路的影响在华蟾素诱导凋亡的过程中也被检测到。
最后，构建膀胱癌移植瘤动物模型，探讨华蟾素在活体内的抗肿瘤作用。
结果：经过试验，我们发现华蟾素可以有效地抑制人类膀胱癌细胞系的增殖。
华蟾素对原位膀胱癌大鼠的影响
万方数据１１００筮婴至医太堂堂塑！』坠塑！丛韭塑型型翌生）三Ｑ塑！≥Ｑ！！兰！堕！！巳；么塑型：堂坚垒：竺１．２方法１．２．１动物模型建立将对数生长期膀胱癌细胞Ｔ２４胰酶消化，以ＰＢＳ洗２次，调整细胞密度为２×１０１０／Ｌ．以ｌＯｇ／Ｌ戊巴比妥４５ｍｇ／ｋｇ腹腔注射麻醉裸鼠，仰卧位固定后术区消毒，取下腹正中切口约０．８ｃｍ，逐层切开，暴露膀胱，自尿道插入２２Ｇ动脉穿刺套管针，顺利进入膀胱后可见尿液流出，插入针芯使其尖端超出套管少许，在直视下用小镊子提起膀胱并轻轻移动，使针芯划伤膀胱侧壁２～３次，退出针芯，用ＰＢＳ冲洗膀胱２次，将准备好的细胞悬液０．１ｍＬ经套管针注入膀胱腔内，退出套管针后马上将尿道外口用小金属静脉夹夹闭．腹部切口用丝线缝合２层，１ｈ后放开尿道的静脉夹．１．２．２观察时间种植后每日观察裸鼠的饮食及精神状态，伤口每日消毒至完全愈合，伤口缝线于种植后第７日时拆除，每３ｄ触摸下腹部有无异常肿块，以种植当日记为０ｄ，分别于第７，１４，２ｌ，２８日用ＭＲＩ检查裸鼠，并每次在检查后２４ｈ内处死５只裸鼠，观察双侧输尿管有无积水；取出膀胱、肺、肝、肾、输尿管、膀胱周围腹膜，子宫，行组织病理切片进行观察，其余５只裸鼠继续观察至３５ｄ．１．２．３ＭＲＩ检查扫描参数设定，Ｔ１加权横断面及矢状面：ＴＲ５００ｍｓ，ＴＥ１２ｌｎ８，层厚２ｍｍ，ＦＯＶ８０ｍｍ×８０ｎｔｍｌ，阵距２５６×３８４；Ｔ２加权像横断面：ＴＲ４０２９ｎｌｎｌ，ＴＥ９９．４吣，层厚２／ｎｌｎ，ＦＯＶ８０ｉｎｔｏ×８０ｍｉｌｌ，阵距５１２×５１２．在Ｔｌ横断面扫描参数下Ｇｄ—ＤＴＰＡ的最适浓度，用生理盐水将Ｇｄ－ＤＴＰＡ稀释为０．４６９，０．９３９，１．４０８，２．１１２ｇ／Ｌ，分别用２ｍＬ注射器取稀释后的溶液，测定感兴趣区信号强度，取信号最佳者进行下一步实验．裸鼠麻醉后，轻轻挤压膀胱，将尿液排尽，插入２２Ｇ动脉穿刺套管针，向膀胱腔内注入最佳浓度的Ｇｄ－ＤＴＰＡ０．１ｍＬ，尿道外口用丝线结扎，将裸鼠置于小关节线圈行ＭＲＩ检查，麻醉时间可保证ＭＲＩ检查顺利进行．检查结束后立即解除裸鼠尿道外口丝线，分析ＭＲＩ图像．１．２．４膀胱灌注实验分组按上述方法建立膀胱癌裸鼠动物模型，自种植后第６日取１８只模型，随机分为对照组和实验组，每组９只，对照组不予任何处理，实验组０．０５ｇ／Ｌ华蟾素，每次０．０６ｍＬ膀胱灌注，２次／ｗｋ．膀胱灌注在麻醉后进行，尿道夹闭２ｈ后放开．于种植后第２６日，每组给药６次后完整取出裸鼠膀胱，电子天平称质量．１．２．５病理切片观察新鲜组织标本用１００ｍＬ／Ｌ甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度４—５ＩＬｍ，ＨＥ染色．１．２．６肿瘤生长抑制率正常裸鼠膀胱质量为１３ｍｇ（取其他实验所用相近周龄裸鼠测得）．所测整个膀胱质量减正常膀胱质量视为膀胱肿瘤质量．抑瘤率＝［（未处理组瘤质量一治疗组瘤质量）／未处理组瘤质量］×１００％．统计学处理：计量资料以ｉ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳｌ２．０统计软件进行单因素方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义．２结果２．１一般情况观察伤口缝线于术后５～７ｄ自行脱落，或于术后第７日拆除，所有裸鼠伤口均未发生感染．在１５ｄ左右可触及膀胱质地变硬，挤压膀胱时４只裸鼠出现肉眼血尿，大部分裸鼠在３ｗｋ内未见到精神及饮食状态的变化，但种植时为４ｗｋ龄的两只裸鼠在１６—１８ｄ后出现消瘦，少动，生长迟缓，并在１ｗｋ后情况恶化而死亡．２５ｄ后，８只裸鼠明显消瘦，精神萎靡，脊背弓起．２８—３５ｄ，５只裸鼠中３只死于恶液质，存活的２只裸鼠濒于死亡．２．２Ｍ砒检查取不同浓度的造影剂在Ｔ１加权项行ＭＲＩ扫描，当造影剂浓度为１．４０８ｓ／Ｌ时，Ｔｌ加权项上信号最佳．浓度增加到２．１１２ｇ／Ｌ时，信号开始减弱（图１）．故在对裸鼠膀胱进行ＭＲＩ检查时均采用浓度为１．４０８ｓ／Ｌ的造影剂．种植后７ｄ时，裸鼠膀胱在ＭＲＩ中未检测到明显变化，膀胱充盈良好，种植后１４，２ｌ，２８ｄ时，ＭＲＩ可以检测到膀胱不同程度充盈缺损，肿瘤逐渐增大，最终占据整个膀胱腔，典型图像见图２．种植后３５ｄ因肿瘤过大，影响插导尿管，未行Ｍ砌检查．Ａ：０．４６９∥ＬＧｄ—ＤＴＰＡ；Ｂ：０．９３９ｇ／ＬＣ，ｄ・ＤＴＰＡ；Ｃ：１．４０８ｇ／ＬＧｄ・ＤＴＰＡ；Ｄ：２．１１２ｇ／ＬＧｄ－ＤＴＰＡ．图１ＭＲＩ扫描图像２．３病理学表现的变化种植后７，１４，２１ｄ处死的裸鼠中，未发现双侧导尿管积水，２８，３５ｄ时，见裸鼠有不同程度的肾盂、输尿管积水，观察期间，肝、肺等脏器镜下未见转移．种植后７ｄ时，无肉眼可见的肿块，病理切片上可见肿瘤细胞种植于膀胱黏膜或浅层肌肉，未见深肌层侵润（图３Ａ）．种植后１４ｄ可见膀胱内突起肿块，２１ｄ时肿块充满膀胱腔５０％左右，２８万方数据箜四至医盔堂堂堡ｆ』！！坚丛丛卫竺塑型尘１２兰Ｑ塑：垫！！兰２堕！虫；么！！竺：塑坐坠生：！翌ｄ后肿块几乎占据整个膀胱腔，膀胱变为一质硬的肿块，肉眼所见肿瘤大小与ＭＲ／表现吻合．所形成肿瘤均为尿路上皮癌ＩＩ～Ⅱｌ级，与Ｔ２４细胞病理分级一致．１４—２８ｄ肿瘤浸润于肌层不同的深度，尚未浸及浆膜层（图３Ｂ），３５ｄ时肿瘤浸及浆膜层（图３Ｃ）．Ａ：种植７ｄ；Ｂ：种植１４ｄ；Ｃ：种植２Ｉｄ；Ｄ：种植２８ｄ．图２膀胱肿瘤在种植后不同时间的超声表现Ａ：种植７ｄ（×４０）；Ｂ：种植２８ｄ（×１００）；Ｃ：种植３５ｄ（×１００）．图３种植后不同时间裸鼠膀胱肿瘤组织的病理学表现２．４膀胱肿瘤生长受抑制情况各组膀胱肿瘤质量及抑瘤率见表１．经６次膀胱灌注治疗，实验组膀胱肿瘤生长受到明显抑制（Ｐ＜０．０５）．表ｌ不同处理对裸鼠膀胱肿瘤的抑制作用（ｎ＝９，孑±ｓ）。
三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究
三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究姚茂金;李洁;方建珍;肖涛;谢丽华;施小六【期刊名称】《实用肿瘤杂志》【年(卷),期】2007(22)4【摘要】目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人移行细胞膀胱癌细胞株T24细胞凋亡的作用。
方法用MTT法、TUNEL法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导T24细胞凋亡的作用。
结果As2O3可有效地抑制T24细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。
DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条带。
TUNEL法呈阳性结果。
透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。
对照组均未见上述变化。
对凋亡相关基因Bcl-2免疫组化染色发现其表达下调,同时凋亡主要效应分子Caspase 3被激活。
结论As2O3可有效诱导膀胱癌细胞凋亡,通过下调Bcl-2基因表达是其作用机制之一。
【总页数】4页(P332-335)【关键词】砷剂/药理学;肿瘤细胞;培养的;细胞凋亡/药物作用;膀胱肿瘤/病理学【作者】姚茂金;李洁;方建珍;肖涛;谢丽华;施小六【作者单位】中南大学湘雅二医院医学实验中心;株洲市第一医院肾病内科;中南大学湘雅二医院骨科研究室【正文语种】中文【中图分类】R962【相关文献】1.丝裂霉素和表柔比星诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的体外实验研究 [J], 梁健铭;杨占斌2.维生素K3增强吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的研究 [J], 赵亮;刘俊生3.羟基喜树碱诱导人T24膀胱癌细胞凋亡的研究 [J], 凡杰;唐孝达;张先有4.全反式维甲酸对人膀胱癌细胞株T24生长抑制和凋亡诱导作用的实验研究 [J], 杨嗣星;文艳;张雪军;王玲珑;张孝斌5.染料木黄酮诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究 [J], 章劲夫;张忠林;刘岐山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
华蟾素增强细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞的杀伤活性
华蟾素增强细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞的杀伤活性蒋淑莲;文剑;杜建霞
【期刊名称】《中国生化药物杂志》
【年(卷),期】2007(28)3
【摘要】目的观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用.方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC)培养,收集非贴壁细胞并加入白细胞介素2(IL-2)诱导培养CIKC,将华蟾素加入CIKC,用四甲基偶氯唑盐(MTT)法检测CIKC杀伤BEL7402肝癌细胞株的活性.结果 CIKC经华蟾素加入培养后,CIKC细胞群的CD3+CD8+,CD3+CD56+细胞比例和杀伤活性较单纯的CIKC更高.结论华蟾素有助于CIKC的细胞毒活性.
【总页数】3页(P164-166)
【作者】蒋淑莲;文剑;杜建霞
【作者单位】南京市第二医院,江苏,南京,210003;南京市第二医院,江苏,南
京,210003;南京市第二医院,江苏,南京,210003
【正文语种】中文
【中图分类】R965;R979.1
【相关文献】
1.华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响 [J], 牛凯;成宇晶
2.树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养后对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的研究 [J], 莫晨;黄燕苹;罗社文;吴小娥;邓笑伟;徐铭宝
3.甘露聚糖肽增强细胞因子诱导的杀伤细胞的杀伤活性及机制研究 [J], 李志虎;张连生;郭红云;崔杰;朱公建
4.抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌细胞杀伤活性的研究[J], 周兵;张德重
5.华蟾素对肝癌大鼠骨髓来源树突状细胞的影响及其预防肝癌的机制 [J], 谢新梅;何艳芬;张洪亮
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蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响
蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响黄后宝;夏东东;沈群山;程庆水;王啸;邱腾【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2014(19)7【摘要】目的:研究蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其在膀胱癌中的抗肿瘤机制。
方法:采用MTT法测定蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测蟾毒灵对癌细胞凋亡和细胞周期的影响;RTPCR法检测癌细胞周期蛋白D1(CyclinD1)基因表达情况。
结果:蟾毒灵可抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵能诱导T24细胞凋亡;20nmol/L浓度的蟾毒灵预处理膀胱癌T24细胞后,与对照组(36.42%)进行比较,可分别在12h(69.76%)和24h(88.14%)显著诱导细胞G0/G1期阻滞(P<0.05),且可降低膀胱癌T24细胞的CyclinD1mRNA表达水平。
结论:蟾毒灵能显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导T24细胞G0/G1周期阻滞,下调人膀胱癌T24细胞CyclinD1基因表达。
【总页数】5页(P733-737)【关键词】膀胱癌;蟾毒灵;细胞周期;细胞周期蛋白D1【作者】黄后宝;夏东东;沈群山;程庆水;王啸;邱腾【作者单位】皖南医学院第一附属医院泌尿外科【正文语种】中文【中图分类】R965.2【相关文献】1.蟾毒灵体外抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和促凋亡作用及对Na+/K+-ATP 酶的影响 [J], 杨瑞琨;熊建辉2.蟾毒灵对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用 [J], 李静3.蟾毒灵联合阿霉素对膀胱癌T24细胞生长的影响及机制 [J], 梅祥宝;黄后宝;夏东东;王迪;刘伟4.VEGF-C对膀胱癌T24细胞增殖与丝裂霉素诱导T24细胞凋亡影响的研究 [J], 祖雄兵;齐琳;叶章群;周四维;申鹏飞5.蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖及细胞凋亡的影响 [J], 何春锋;张青川因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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式 细胞 仪 结 果 示 ， 高浓 度 的 Ｃｎ （５ ｇｍ ） 外 ． 余 各组 均 见 到 在 Ｇ ／ 期 前 出 现 亚二 倍 体 峰 （ Ｐ 除 ｉｏ２ ｍ ／ １组 其 ０Ｇｌ Ａ Ｏ峰 ）且 阻 滞 细胞 ，
【 关键 词 】 膀胱 癌 华 蟾 素 细 胞 凋亡 流式 细胞 术
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中 国现 代 医 药 杂志 ２ １ ０ ０年 １月 第 ｌ 第 ｌ ＭＭ Ｃ Ｊｎ２ １，Ｖ ｌ１，Ｎ ． ２卷 期 Ｊ ， ａ ０ ０ ｏ ２ ｏ１
论 著 ・
华蟾 素诱 导人膀 胱癌 细胞 株 Ｔ ４凋 亡研 究 ２
吕静 王 健 任 承 德
研 究 华 蟾 素 注射 液 （ｉ ｂ ｆ ｉ，ｉ ） 膀胱 癌 细 胞 株 Ｔ ４的 体 外 增 殖 抑制 及 诱 导 凋 亡 作 用 ， 讨其 ｃ ｏ ｕａ ｎ ｎ 对 ｎ ｃ Ｃ ｏ ２ 探
除 Ｃｎ （ ５ ｇ ｉｏ ２ ｍ ／
【 要 】 目的 摘
对 膀 胱 癌 的ｌ 应用 价 值 方 法 不 同 浓度 Ｃ ｎ 单 独 作 用 和配 伍 丝 裂霉 素 Ｃ（ 临床 ｉｏ ＭＭＣ 作用 于 膀 膀癌 Ｔ ４细胞 株 后 ， 过 流 ） ２ 通 式 细胞 术 （ Ｃ 以及 Ｄ Ａ 凝 胶 电泳 检测 细 胞 的 凋亡 情 况 ， 用光 学 显 微镜 观 察 细胞 形 态学 的变 化 。结 果 Ｆ Ｍ） Ｎ 应
ｃ ｎ ｂ ｆｃｎ ｏ ｎ ｉ ｉ ｎ ｒ ｌ ｅ ａｉ ｎ ａ ｄ ｉ ｄ ｃ ｉｇ ａ ｏ ｔｓｓ ｉ ｌｄ ｅ ａ ｃｎ ｍａ ｅｌＴ ４ ｎ ｖｔｏ ｉｏ ｕ ａ ｉ ｎ ｉ ｈ ｂｔ ｇ ｐ ｏ ｉ ｒ ｔ ｎ ｎ ｕ ｔ ｐ ｐ ｏБайду номын сангаасｉ ｎ ｂ ａ ｄ ｒｃ ｒ ｉｏ ｃ ｌ ２ ｉ ｉ ．Ｍ ｅ ｈ ｄ Ａｐ ｐ ｏ ｉ ｉ ｆ ｏ ｎ ｒ ｔｏ ｓ ｏ ｔｓｓ
生 长在 Ｇ ／ 期 。 药物 浓 度 组与 对 照组 的 Ｓ期 比率 （ Ｐ ） ０Ｇ１ 各 Ｓ Ｆ 和增 殖 指 数 （ Ｉ分 别 进 行 比较 （ ＜ ． ） 统 计 学差 异 。 论 Ｐ） Ｐ Ｏ０ 有 ５ 结 Ｃｎ ｉ ｏ对 膀胱 肿 瘤 Ｔ ４细 胞有 诱 导 凋亡 和直 接 杀死 的 双 重作 用 。具体 表 现 为高 浓 度 （ ５ ／ １作 用 于 细胞 时 ， 细 胞表 现 为 ２ ２ ｍｇ ） ｍ 对 直 接杀 死 作用 。 在 较低 浓 度 范 围内 （ ． １ ２５ ｍ ） 表 现 为对 细 胞诱 导 凋 亡 的作 用 ， 具 有一 定 的 时效 和 量效 关 系 配 而 Ｏ ０ —． ０ ｍ １， 且 伍 丝裂 霉 素应 用 时 ． Ｔ ４细胞 的诱 导 凋 亡作 用 明 显 增强 ． 药 有 协 同作 用 。具 有 治疗 膀 胱 癌 的临 床 价值 对 ２ 两
Ｍ ＭＣ， ｅｍ ｒｈ ｌ ｉ ｌ ｈ ｎｅ ｗ ｒ ｏｓｒｅ ｒｕｈｔ ｐｉ ｌ ｉ ｏｃｐ． ｓｌ Ｉ ｄ ｉｏ ｉｏ （５ ￣ ） ｒｕ ， ｔ ｏ ｏ ｇ ａ ｃａ ｇｓ ｅｅ ｂｅｖｄｔ ｏｇ ｅｏｔ ａ ｍｃ ｓｏｅ Ｒｅｕｔ ｎａｄｔ ｎｔ Ｃｎ ２ ｍ ｍ１ｇ ｐ ｈ ｐ ｏｃ ｈ ｈ ｃ ｒ ｓ ｉ ｏ ｏ